湖北省科技攻关计划(2007AA402C55)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：湖北省农业科学院华中农业大学更多>>
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- 猪圆环病毒Ⅱ型抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2009年
- 建立了检测猪圆环病毒2型血清抗体的间接ELISA方法，并初步应用于临床血清样品的检测。用PCR方法从PCV2 HBZX株中获得截短的核衣壳（capsid，Cap）基因，将该基因克隆到原核表达载体pET-32a（＋）中，构建重组表达质粒pET-Cap，将该重组质粒转化宿主菌Ecoli BL21-CodonPlus（DE3），用IPTG诱导，SDS-PAGE和Western—blot鉴定蛋白的正确表达，表达蛋白Cap分子质量为42ku，可与6×HIS抗体反应；KCI预染切胶纯化目的蛋白，以其为抗原建立检测PCV2感染猪血清抗体的间接ELISA方法。ELISA检测5份血清样品结果变异系数均小于10％。用该方法分别检测湖北、河南等地的91份临床血清样品，阳性率为25％～100％。上述结果表明，所制备的目的蛋白具有较高的纯度和良好的免疫原性，所建立的间接ELISA检测抗体方法，具有良好的重复性，初步临床试用效果良好。
- 李坤温国元罗青平商雨艾地云罗玲王红琳杨峻邵华斌程国富
- 关键词：猪圆环病毒2型原核表达间接ELISA
- 猪瘟病毒E2蛋白的原核表达及抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：5
- 2009年
- 以猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)标准强毒石门株为模板,RT-PCR扩增CSFV E2基因N端的主要抗原区(ΔE2)。PCR产物定向克隆至原核表达载体pET-32a中,构建了重组表达质粒pET-ΔE2,转化Eacterium coli BL21-Codonplus(DE3),IPTG诱导重组ΔE2蛋白表达,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定蛋白的正确表达。KCl预染切胶法纯化ΔE2蛋白,以其为包被抗原,通过反应条件的优化,建立了CSFV抗体ELISA检测方法。用该方法对331份临床血清进行检测,并与IDEXX公司阻断ELISA试剂盒进行了相符性验证,符合率为74%。为研制猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒奠定了基础。
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- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白间接ELISA原核表达
- 猪圆环病毒2型HBZX株的全基因组克隆及序列分析被引量：1
- 2008年
- 参照GenBank发表的猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)序列,设计合成了1对用于扩增PCV2全长基因组的特异性引物,从患断奶后仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)的病料中,采用PCR方法克隆了PCV2 HBZX株的全长基因组序列,并进行了序列测定与分析。结果显示,PCV2 HBZX株的基因组全长为1 767nt;同源性比较发现,HBZX株与其他PCV2株的核苷酸同源性为95.0%～98.9%;遗传进化树分析表明,根据PCV2全基因组序列和ORF2编码蛋白的氨基酸序列所绘制的遗传进化树相似度较高;PCV2可分为两个亚型,以中国株为代表的亚洲株和以加拿大株为代表的美洲株分布在亚型1中,以法国株为代表的欧洲株分布在亚型2中。说明PCV2各分离株之间存在较为明显的地理位置上的相关性。
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- 关键词：猪圆环病毒2型同源性进化树
