国家自然科学基金(30371553)
- 作品数：8 被引量：77H指数：5
- 相关作者：胡静戚孟春邹淑娟李继华周海孝更多>>
- 相关机构：四川大学华北煤炭医学院四川大学华西口腔医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 张应力下成骨性转录因子在骨髓间充质干细胞中的表达被引量：5
- 2008年
- 目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）对单一周期的机械力刺激的反应以及Ets-1、Cbfa1和ALP的基因表达。方法：密度梯度离心法体外分离培养大鼠骨髓MSCs；应用四点弯曲加力系统对细胞施加40min、2000μe的机械牵张力，检测MSCs细胞增殖及ALP活性，并采用实时荧光定量RT-PCR检测Ets-1、Cbfa1和ALP的基因表达。结果：机械力刺激下，MSCs的增殖活力、ALP活性以及Ets-1、Cbfa1和ALP的基因表达均显著增高。Ets-1表达较早，加力后0．5h达到最高峰；而Cbfa1表达较晚，加力后6h达到最高峰；ALP的表达与Cbfa1相似。3个基因表达增高均在6—12h后恢复到正常水平。结论：单一周期的张应力可诱导Ets-1、Cbfa1和ALP在MSCs中呈时间依赖性表达，并促使MSCs短暂性骨向分化。机械力刺激是MSCs骨向分化的关键驱动因子．对牵张成骨骨痂形成具有重要的作用。
- 戚孟春梁永强孙红胡静韩力赤
- 关键词：骨髓间充质干细胞机械牵张碱性磷酸酶ETS-1
- 骨髓间充质干细胞移植促进大鼠下颌骨牵张成骨的实验研究被引量：5
- 2005年
- 目的:探讨大鼠下颌骨牵张间隙内移植自体骨髓间充质干细胞,促进骨痂形成的可行性。方法:选用54只雄性SD大鼠,密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞(MSCs)。所有大鼠行右侧下颌骨牵张;并于术后随机分为试验和对照2组。牵张结束时,实验组牵张间隙内注射自体MSCs;而对照组只注射等量生理盐水。分别于固定期第2、4、8周分3批处死大鼠,进行放射学、组织学观察,并对骨组织形态计量学参数进行统计学分析(t检验)。结果:放射学和组织学观察表明,2组牵张间隙内均形成了骨痂组织,但实验组新生骨组织显著多于对照组。计量学分析也显示,各时间点实验组新生骨量(NBV1和NBV2)和新生骨小梁宽度(TNT)均显著高于对照组(P<0.01)。结论:牵张间隙内行自体骨髓MSCs移植,可有效促进新骨形成,缩短固定期;该方法对众多的颅颌面外科畸形的矫治极具价值。
- 戚孟春胡静邹淑娟李继华周海孝
- 关键词：骨髓间充质干细胞移植下颌骨牵张成骨骨髓问充质干细胞移植自体骨痂形成新骨形成
- 大鼠骨髓间充质干细胞和颅骨成骨细胞在张应力下细胞骨架的改变被引量：26
- 2005年
- 目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)和颅骨成骨细胞(OB)在机械张应力刺激下的反应和细胞骨架蛋白F_actin的变化。方法 体外分离培养大鼠骨髓MSCs和颅骨OB ,应用四点弯曲加力系统对细胞施加2 0 0 0 με的机械张应力,加力时间分别为0h、2h、6h、12h。采用激光共聚焦显微镜观察特异性荧光染料标记的微丝蛋白F_actin和细胞核,并用图像分析软件对细胞形态学参数进行测量。结果 MSCs和OB荧光强度减弱,F_actin纤维束稀疏,排列紊乱;胞核轮廓模糊,部分细胞可观察到凋亡小体;MSCs体积明显变小,OB体积变化不明显。定量分析表明,MSCs的细胞总面积、总荧光密度、绿色荧光(F_actin)密度均显著降低(P <0 0 5或P <0 0 1) ;OB的总荧光密度、绿色荧光密度和胞核红色荧光密度也显著下降(P <0 0 5或P <0 0 1)。结论 机械张应力刺激可引起MSCs和OB细胞骨架F_actin解聚和重排,部分细胞发生凋亡;
- 戚孟春胡静邹淑娟韩力赤罗恩
- 关键词：间充质干细胞成骨细胞激光共聚焦显微镜
- 成骨细胞在机械力刺激下细胞骨架及细胞形态改变的体外研究被引量：17
- 2004年
- 目的:探讨大鼠颅骨成骨细胞(OB)对机械力刺激的反应及细胞骨架F-actin的变化。方法:体外分离培养大鼠颅骨OB细胞;应用四点弯曲加力系统,对第3代细胞施加2000με的机械牵张力,加力时间分别为0h、2h、6h、12h,应用特异性荧光染料分别标记微丝蛋白F-actin和细胞核;在激光共聚焦显微镜下观察并进行形态计量学测量。应用TUNEL法进行原位凋亡检测。结果:在机械张力刺激下,OB荧光强度减弱,F-actin纤维束变得稀疏而排列紊乱;胞核轮廓模糊,并可观察到凋亡小体。定量分析表明,OB的荧光总强度、绿色荧光强度(F-actin)和红色荧光强度(胞核)均显著下降(9<0.05或P<0.01)。TUNEL检测也表明,随着加力时间延长,凋亡细胞数明显增加,但明显少于F-actin发生改变的细胞数。结论:机械牵张刺激可引起OB细胞骨架F-actin解聚和重排,并诱发部分细胞发生凋亡。
- 戚孟春胡静韩立赤邹淑娟王大章
- 关键词：成骨细胞凋亡激光共聚焦显微镜
- 重组质粒pEGFP-BMP7的构建及在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达被引量：7
- 2005年
- 目的体外构建重组质粒pEGFP_BMP7,并检测其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达。方法应用RT_PCR方法从大鼠肾脏中分离、扩增目的基因片段,并进行测序,随后将所得cDNA定向克隆到真核表达载体pEGFP_N1中,进行双酶切来鉴定克隆的正确性。通过脂质体介导重组pEGFP_BMP7瞬时转染大鼠骨髓间充质干细胞,确定转染效率,并通过RT_PCR、免疫细胞化学手段检测BMP7的表达。结果通过RT_PCR成功获得1.3 kb的cDNA片段,该cDNA除756 bp处有一碱基从T突变成A外,其余序列与大鼠BMP7基因完全相符。重组质粒双酶切图谱显示,BMP7 cDNA被正确插入载体中。绿色荧光蛋白在大鼠骨髓间充质干细胞中早期瞬时转染效率可达33%。转染后RT_PCR和免疫细胞化学检测证实重组pEGFP_BMP7在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达。结论成功构建重组真核表达质粒pEGFP_BMP7,并在大鼠骨髓间充质干细胞中得到表达,有助于应用BMP7行基因治疗,促进牵张成骨、骨痂形成和修复颅颌面骨缺损。
- 胡静戚孟春邹淑娟李继华周海孝
- 关键词：骨形成蛋白7基因转染间充质干细胞
- BMP-7基因促进大鼠下颌牵张成骨的研究被引量：13
- 2006年
- 目的:探讨骨形成蛋白-7(BMP-7)基因修饰的自体骨髓间充质干细胞(MSCs)促进大鼠下颌牵张骨痂形成的可行性。方法:选用48只雄性SD大鼠,随机分为实验和对照2组。建立大鼠下颌DO模型;于牵张结束最后1d,实验组大鼠牵张间隙内注射转染重组质粒pEGFP-BMP7的自体骨髓MSCs;而对照组大鼠注射转染pEGFP-N1空质粒的MSCs。分别于固定期第2、4、8周分3批处死大鼠,进行放射学、组织学观察,并进行骨组织形态计量学分析。结果:实验组牵张间隙内新骨形成和骨痂密度均明显高于对照组;计量学分析也显示各时间点实验组新生骨量(NBV1和NBV2)和新生骨小梁宽度(TNT)均显著高于对照组(P<0.01)。结论:基于MSCs的BMP-7exvivo基因治疗可有效促进DO新骨形成,从而缩短固定期,为临床颅颌面骨缺损的重建提供了一个极具价值的修复策略。
- 胡静戚孟春韩立赤李继华周海孝
- 关键词：牵张成骨骨形成蛋白-7间充质干细胞
- 重组腺病毒-骨形成蛋白7对骨髓间充质干细胞骨向分化影响的实验观察被引量：2
- 2007年
- 目的观察骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)7重组腺病毒对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)骨向分化的影响。方法构建重组腺病毒载体 pAd-BMP-7,测定其滴度。应用 pad-BMP-7和空白载体 pAdTrack-CMV 分别转染 MSC,检测外源基因转染效率,并应用 RT-PCR、免疫细胞化学手段检测 BMP-7的表达。将 MSC 分为3组,A 组:转染 pad-BMP-7;B 组:转染 pAdTrack-CMV;C 组:转染 pAdTrack-CMV+骨向分化液。观察其矿化结节形成,评价3组细胞骨向分化情况。结果重组腺病毒 pAd-BMP-7的滴度可达2.0×10^(15)pfu/L;外源基因的转染效率为99%,表达时间持续5～7周,3周内表达水平较高。RT-PCR 和免疫细胞化学检测证实了BMP-7在 MSC 中的有效表达。病毒转染后,A 组和 C 组细胞均有矿化结节形成,其中 A 组矿化结节数目显著多于 C 组(P<0.01);B 组无矿化结节形成。结论 BMP-7重组腺病毒可有效转染大鼠骨髓 MSC,并促进其骨向分化,转染的 BMP-7得到了有效表达。
- 戚孟春孙红胡静邹淑娟赵强李继华
- 关键词：干细胞骨髓祖代细胞骨形成蛋白
- 大鼠下颌骨牵张成骨模型的改进被引量：2
- 2005年
- 目的:建立一个新的可行性和重复性俱佳的大鼠下颌骨牵张成骨模型。方法:对30只雄性大鼠从升支前 缘中部至下颌下缘行全层骨切开,并安放特制的纯钛牵张器,用螺钉固定。5d延迟期后,以0.2mm/次、2次/d的 速度进行牵张,共8d;随后进入固定期。分别于固定期第2、4、8周分3批处死大鼠,进行大体标本观察和放射学、 组织学检测。结果:实验过程被所有大鼠很好的耐受,切口感染率低(6.7%),无牵张器脱落。大体标本观察表明, 在牵张间隙形成了很好的骨痂组织,牵张间隙达到了预期的长度。新生骨组织放射学和组织学表现与大动物的表 现相似。结论:我们成功建立了一个新的可行性和重复性俱佳的大鼠下颌骨牵张成骨模型;该模型有助于牵张成 骨分子机制的进一步深入研究。
- 唐杰戚孟春胡静邹淑娟李继华周海孝
- 关键词：牵张成骨动物模型
