国家自然科学基金(30371586)
- 作品数：29 被引量：155H指数：8
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- 单克隆抗体在NSCLC治疗中的现状及展望被引量：2
- 2005年
- 赵伟鹏朱波陈正堂
- 关键词：NSCLC靶向治疗单克隆抗体CLINICAL临床肿瘤学实体肿瘤
- 以鼠尾胶为贴黏剂的小鼠淋巴管内皮细胞培养体系的建立被引量：8
- 2007年
- 目的:建立一个简便、廉价和稳定的小鼠淋巴管内皮细胞(LEC)培养体系.方法:应用不完全弗氏佐剂诱导小鼠腹腔淋巴管瘤形成,消化法分离获得LEC,置于自制的鼠尾胶包被的培养瓶(板)中培养.以免疫荧光化学法检测LEC特异性标记物VEGFR-3和LYVE-1的表达,以3H-TdR掺入率测定和细胞倍增时间检测LEC的增殖活力,以淋巴管形成试验判定LEC能否形成淋巴管样结构.结果:不完全弗氏佐剂能诱导小鼠腹腔淋巴管瘤形成,所获LEC活细胞数大于98%.免疫荧光化学检测表明,LEC表达VEGFR-3和LYVE-1.在鼠尾胶包被的培养瓶(板)中,LEC生长状况良好,3H-TdR掺入率明显增加,倍增时间为(42.7±3.2)h;在鼠尾胶凝胶中,LEC能形成淋巴管样结构.结论:鼠尾胶为贴黏剂的体系是一种简便、廉价和稳定的小鼠LEC培养体系.
- 章必成王俊赵勇高建飞郭燕陈正堂
- 关键词：细胞培养
- 针对CD_(44)V_3的短发夹RNA抑制肺癌A549细胞体外增殖被引量：3
- 2005年
- 目的:研究针对CD44V3的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对体外培养的人肺腺癌A549细胞CD44V3表达及增殖能力的影响。方法:设计和构建带有U6启动子的、能产生针对CD44V3的shRNA的RNA干扰表达质粒,转染至A549细胞,以RT-PCR和Western blot检测A549细胞转染前后CD44V3表达,以MTT实验和软琼脂细胞集落形成实验比较A549细胞转染前后增殖能力。结果:和转染前相比,转染了RNA干扰表达质粒的A549细胞CD44V3mRNA和蛋白表达、以及增殖能力皆明显降低。结论:针对CD44V3的短发夹RNA能明显抑制人肺腺癌A549细胞体外增殖能力。
- 卓文磊王彦陈正堂
- 关键词：寡核苷酸类转染
- Layilin的RNAi对透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响被引量：2
- 2006年
- 目的：研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制透明质酸受体layilin表达,对透明质酸(hyaluronan,HA)诱导人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响。方法：构建能表达针对layilin的短发夹RNA(shRNA)的阳性RNA干扰(posi- tive RNAi,Pi)质粒和表达不针对任何已知mRNA的shRNA的阴性RNAi(negative RNAi,Ni)质粒,分别转染至A549细胞,以RT-PCR和Western blot检测A549细胞转染前后layilin表达,并用新霉素抗性筛选得到layilin表达受抑制的阳性RNAi(Pi)细胞和layilin表达未受影响的阴性RNAi(Ni)细胞。分别在存在或不存在外源性透明质酸的培养条件下,以MTT实验和软琼脂细胞集落形成实验比较正常(control,C)、Pi、Ni组细胞体外增殖能力。结果：在不存在外源性透明质酸的培养条件下,C、Pi、Ni组A549细胞体外增殖能力无显著差异(P＞0．05),在存在外源性透明质酸的培养条件下,Pi和C组相比,体外增殖能力显著降低(P＜0．01),Ni和C组相比,体外增殖能力无显著差异(P＞0．05)。结论：抑制layilin表达能抑制透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外增殖。
- 卓文磊王彦陈正堂
- 关键词：腺癌透明质酸A549细胞
- VEGF-C基因3′端未翻译区对荧光素酶表达的影响被引量：2
- 2007年
- 目的构建小鼠血管内皮生长因子-C(VEGF-C)基因3′端未翻译区(3′UTR)的荧光素酶表达载体,利用双荧光报告系统观察VEGF-C基因3′UTR对荧光素酶基因表达的影响。方法通过PCR分别扩增小鼠Lewis肺癌细胞VEGF-CcDNA全长3′UTR(429bp)和一段312bp的编码区序列(CR),采用基因工程方法将PCR产物克隆至pTA2克隆载体,随后再亚克隆至荧光素酶报告基因载体(pGL3-Promoter)荧光素酶编码基因下游的XbaⅠ酶切位点,使用LipofectamineTM2000真核转染小鼠Lewis肺癌细胞,化学发光法检测荧光素酶的活性,定量RT-PCR检测荧光素酶mRNA水平。结果PCR成功扩增出与预期长度相符的小鼠VEGF-CCR(312bp)和VEGF-C3′UTR(429bp)。经酶切、测序鉴定,小鼠VEGF-C基因3′UTR和CR均插入到pGL3-Promoter的XbaⅠ位点,插入序列碱基组成和插入方向均正确,获得载体pGL3-VEGF-C3′UTR和pGL3-VEGF-CCR。荧光素酶报告系统和定量RT-PCR检测显示,与pGL3-Promoter组比较,pGL3-VEGF-C3′UTR转染组荧光素酶活性和mRNA水平均显著降低,而pGL3-VEGF-CCR组与pGL3-Promoter组之间无显著性差异。结论VEGF-C基因3′UTR可以抑制荧光素酶的表达。
- 王俊郭燕章必成关华军陈正堂
- 关键词：血管内皮生长因子C荧光素酶淋巴管生成
- RNAi抑制Layilin表达对肺腺癌A549细胞体外侵袭和荷瘤鼠体内淋巴转移的影响被引量：5
- 2007年
- 背景与目的:透明质酸参与了多种肿瘤细胞的侵袭行为,Layilin是一种新发现的特异性透明质酸受体。本研究在发现Layilin表达于人肺腺癌A549细胞株的前期工作基础上,观察用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制Layilin表达后,对人肺腺癌A549细胞体外侵袭和体内淋巴道转移的影响。方法:构建能表达针对Layilin的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)的RNAi质粒(Layilin siRNA plasmid)和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNAi质粒(control siRNA plasmid),分别转染A549细胞,新霉素抗性筛选得到Layilin表达受抑制的A549-siLayilin细胞和Layilin表达未受影响的A549-siControl细胞。针对非转染(A549-nontransfec-tion)、A549-siLayilin、A549-siControl 3组细胞,分别采用RT-Real time PCR和Western blot技术检测Layilin表达,用Boyden小室实验检测细胞体外侵袭能力,用爪垫皮下种植淋巴结转移模型检测淋巴转移能力。结果:与A549-non-transfection组和A549-siControl组相比,A549-siLayilin组细胞Layilin表达减少,体外侵袭能力降低,体内淋巴转移率下降。结论:通过RNAi抑制Layilin表达后,能有效抑制透明质酸所诱导的A549细胞体外侵袭和裸鼠移植瘤淋巴转移。本研究为通过RNAi手段抑制Layilin表达,进而抑制肺腺癌淋巴转移提供了有益的思路。
- 卓文磊王彦陈正堂敖绪军
- 关键词：A549细胞淋巴道转移
- 非小细胞肺癌VEGF-C表达与淋巴管生成和淋巴转移关系的研究被引量：17
- 2006年
- 背景与目的近年来的研究表明,血管内皮生长因子C(VEGFC)通过与其配体(VEGFR3)的结合介导肿瘤淋巴管生成,是形成肿瘤淋巴道转移的最重要因素。淋巴道转移是非小细胞肺癌(NSCLC)常见的主要扩散途径。基于此,本研究用新的淋巴管内皮标志物podoplanin检测NSCLC组织中淋巴管,用淋巴管密度(LVD)表示淋巴管生成情况,探讨NSCLC内VEGFC表达与淋巴管生成和淋巴转移的关系。方法收集66例NSCLC和8例炎性假瘤组织标本,应用免疫组化检测VEGFC、podoplanin的表达,计算VEGFC阳性表达率及淋巴管密度值,分析两者的关系。结果NSCLC组织内VEGFC阳性表达率(75.8%)显著高于肺炎性假瘤(12.5%)(P<0.01),高中分化(76.3%)和低分化(75.0%)之间无显著性差异(P>0.05),淋巴结阳性组中VEGFC阳性率(86.5%)显著高于淋巴结阴性组(62.1%)(P<0.05)。NSCLC组织内LVD(20.4±5.9)显著高于肺炎性假瘤(10.9±4.9)(P<0.01);VEGFC阳性组LVD(21.3±6.0)显著高于VEGFC阴性组(17.7±5.1)(P<0.05),淋巴结阳性组LVD(21.9±5.9)显著高于淋巴结阴性组(18.5±5.5)(P<0.05)。结论淋巴管生成可能是NSCLC淋巴结转移的重要因素,VEGFC参与NSCLC淋巴管生成,从而促进淋巴结转移。
- 王艳朱波叶明福陈正堂
- 关键词：PODOPLANIN血管内皮生长因子C淋巴管生成
- 小鼠HuR真核表达载体构建及对Lewis肺癌细胞增殖和侵袭的影响被引量：1
- 2007年
- 目的构建小鼠同源的人抗原R(HuR)基因真核表达载体,观察HuR过表达对Lewis肺癌(LLC)细胞增殖和侵袭的影响。方法从LLC细胞中抽提总RNA,RT-PCR扩增HuR cDNA,基因工程方法将PCR片断克隆至真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点。重组质粒经EcoRI和SmaI双酶切鉴定和测序后,使用LipofectamineTM2000转染LLC细胞。Western blot-ting检测HuR在细胞中的表达。MTT和Transwell系统分别检测细胞增殖和侵袭能力。结果经酶切、测序鉴定,小鼠HuR基因正确插入到pEGFP-N1的多克隆位点,获得pEGFP-HuR;Western blotting显示转染组与未转染组比较,HuR蛋白表达、LLC细胞增殖能力和侵袭能力均显著增强。结论HuR过表达可提高肿瘤细胞的增殖和侵袭能力。
- 王俊郭燕章必成关华军陈正堂
- 关键词：HURLEWIS肺癌增殖
- 针对layilin的shRNA抑制透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外黏附和侵袭被引量：5
- 2006年
- 背景与目的透明质酸参与了多种肿瘤细胞黏附侵袭行为。layilin是一种新发现的与细胞骨架有密切联系的透明质酸受体。本研究的目的是观察针对layilin的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)对体外培养的人肺腺癌A549细胞layilin表达及受透明质酸诱导黏附侵袭行为的影响。方法设计和构建带有U6启动子的能产生针对layilin的shRNA的RNA干扰质粒,转染至A549细胞,以RT-PCR、Westernblot和免疫荧光检测A549细胞转染前后layilin表达,以平板黏附模型和Boyden小室模型检测A549细胞转染前后黏附和侵袭能力。结果和转染前相比,转染了RNA干扰表达质粒的A549细胞layilin表达明显减少(P<0.01),而且受透明质酸诱导而黏附于平板和穿过Boyden小室隔膜的A549细胞数皆明显减少(P<0.01)。结论针对layilin的shRNA能明显抑制透明质酸诱导的人肺腺癌A549细胞体外黏附和侵袭能力。
- 卓文磊王彦陈正堂
- 关键词：A549细胞
- 透明质酸黏素和肿瘤被引量：10
- 2005年
- 卓文磊陈正堂
- 关键词：肿瘤
