国家自然科学基金(30471870)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：北京市耳鼻咽喉科研究所首都医科大学更多>>
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- 喉癌多药耐药基因1表达沉默后紫杉醇诱导凋亡的研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究喉癌耐药细胞系(LSC-1/TAX)中MDR1基因表达被沉默后肿瘤细胞对紫杉醇凋亡诱导作用的反应变化。方法表达MDR1 shRNA的慢病毒颗粒转染喉癌耐药细胞系LSC-1/TAX,观察干扰前后紫杉醇诱导喉癌细胞的凋亡改变。采用琼脂糖凝胶电泳进行凋亡定性实验;Giemsa染色观察凋亡细胞的形态学改变;Annexin V-APC/7-AAD双染后,流式细胞仪对凋亡细胞进行定量。结果药敏组细胞发生早期凋亡百分比为(50.95±4.47)%,实验组为(51.04±3.96)%,耐药组为(8.60±1.25)%,对照组为(9.05±1.57)%。实验组与耐药组差异有统计学意义(P<0.05)。喉癌耐药细胞系中MDR1表达被沉默后,细胞对紫杉醇的敏感性提高,凋亡增加。结论表达MDR1 shRNA的慢病毒颗粒可有效地干扰喉癌耐药细胞系中MDR1基因表达,提高喉癌细胞对紫杉醇的凋亡敏感性。
- 黑虎韩德民房居高黄志刚陈晓红张伟张伟钟琦王鸿
- 关键词：喉肿瘤RNA干扰紫杉酚
- 逆转MDR-1小干扰RNA的慢病毒载体系统的构建和鉴定被引量：8
- 2007年
- 目的构建并鉴定表达MDR-1小干扰RNA的慢病毒载体系统并检测其对于喉癌多药耐药细胞系(LSC-1/TAX)多药耐药表型的逆转效果。方法根据MDR-1基因序列,设计3条寡聚核苷酸序列,合成互补DNA链,插入慢病毒表达质粒pLVTHM中,与pCMV-dR8.74和pMD2G共转染293T细胞,包装产生病毒颗粒。以RT-PCR、realtimePCR及Westernblot方法检测三条siRNA在人喉癌耐药细胞系(LSC-1/TAX)中的干扰效率,并采用MTT方法检测干扰前后化疗药物的敏感性。结果通过酶切和测序证实慢病毒载体构建正确,产生能够表达GFP和siRNA的慢病毒颗粒,浓缩滴度为>1×108TU/ml。三条siRNA均可以感染LSC-1/TAX细胞系,其中第三条siRNA敲减效果最佳。结论成功建立逆转MDR-1小干扰RNA的慢病毒载体系统,为逆转喉癌多药耐药表型的实验奠定了基础。
- 钟琦黄志刚房居高陈晓红张伟黑虎王鸿韩德民
- 关键词：喉肿瘤RNA干扰慢病毒属
