国家自然科学基金(30471895)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
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- shRNA干扰技术沉默VEGF表达治疗血管内皮瘤的实验研究
- 2009年
- 目的构建血管内皮生长因子(VEGF)短发夹RNA真核表达质粒(shVEGF),观察其对血管内皮瘤细胞系(EOMA)细胞体外增殖及动物实验的影响。方法构建真核表达质粒pGenesil-3-shVEGF并转染EOMA细胞,采用CCK-8法检测shVEGF对EOMA细胞增殖能力的影响。建立EOMA细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分为对照组和shVEGF组,肿瘤出现后,隔日测量瘤体体积,并观察体积变化。结果转染48h后EOMA细胞增殖受到抑制。体内实验显示经shVEGF治疗后,裸鼠皮下移植瘤体生长缓慢,体积明显缩小。结论RNA干扰技术实现VEGF基因沉默,能明显抑制EOMA细胞增殖及体内肿瘤生长,提示shVEGF在血管内皮瘤、血管瘤等血管瘤样病变的生物治疗中可能有较好的应用前景。
- 许振起刘宇王衣祥张伟赵福运
- 关键词：血管内皮瘤血管内皮生长因子RNA干扰
- 重组腺相关病毒携带人血管内皮细胞生长因子121制备小鼠血管瘤模型的初步探讨被引量：3
- 2009年
- 目的探讨血管内皮细胞生长因子基因用重组腺相关病毒为载体移植制备血管瘤动物模型的可行性。方法构建重组腺相关病毒（recombinant adeo—associated virus，rAAV）介导的人血管内皮细胞生长因子（human vascular endothelial growth factor，hVEGF121）基因（rAAV—hVEGF121），并进行滴度测定。取10只小鼠，每只小鼠于左耳背部给以rAAV—VEGF121 1．0×10^11 VG／50μl，右耳背部给以等体积磷酸盐缓冲液（PBS）作为对照；隔天观察移植处皮肤颜色变化及肿胀情况，术后2、4、6、8、12周取注射处组织，行组织学检查。结果经酶切鉴定、聚合酶链反应（PCR）及基因测序证实rAAV包装质粒pSNAV—hVEGF121构建成功，经rAAV包装后测定滴度为2×10^15 VG／L。基因移植后2周所有小鼠均可见左耳背部开始发红，之后逐渐形成红色的小包块，12周时小包块面积最大，右耳背部未见变化。病理结果显示2周后移植处组织内新牛血管内皮细胞逐渐增多，8周后内皮细胞排列成血窦样结构，内含红细胞，CD-34染色提示增生细胞主要为血管内皮细胞。结论以重组腺相关病毒为载体的血管内皮细胞生长因子基因移植裸鼠可以产生稳定有效的血管瘤模型。
- 许振起王衣祥孟娟红张伟赵福运刘宇
- 关键词：血管瘤动物模型血管内皮细胞生长因子
- Avastin治疗小鼠血管内皮瘤的实验研究被引量：8
- 2009年
- 目的:利用血管内皮细胞瘤来源的细胞系EOMA来探讨Avastin治疗小鼠血管内皮细胞瘤的可行性。方法:利用CCK-8试剂检测不同质量浓度的Avastin(0、50、100、200 mg/L)对EOMA细胞增殖的影响。将EOMA细胞移植裸鼠制作动物模型,待肿瘤体积生长至100 mm3左右时,将动物随机分为2组,采取瘤内注射的方式给药,给药组按1 mg/kg体重给予Avastin,对照组给予等体积的磷酸盐缓冲液(PBS),每周给药2次,同时每周测量肿瘤体积及小鼠体重3次。实验结束时将小鼠处死,剥取肿瘤制作石蜡切片,免疫组织化学染色检测增殖细胞核抗原(PCNA),采用原位末端标记法TUNEL检测细胞凋亡,观察Avastin对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。小鼠处死前,在深度麻醉状态下行心脏穿刺取血收集血清,利用酶联免疫吸附实验检测各组小鼠血清中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达水平。结果:体外实验显示,Avastin能够抑制EOMA细胞的增殖,不同浓度Avastin的抑制率分别为24.21%、26.26%和34.58%。实验结束时,PBS对照组小鼠的肿瘤体积为(1 860.10±146.96)mm3,而Avastin给药组的肿瘤体积为(681.45±63.01)mm3(P<0.01),提示瘤内注射Avastin能明显抑制肿瘤的生长。免疫组织化学PCNA染色结果显示,Avastin可以抑制细胞增殖(P<0.05);TUNEL染色提示Avastin可以明显诱导细胞凋亡增加(P<0.01)。Avastin给药组血清中VEGF的水平为(594.65±118.79)ng/L,明显低于PBS对照组的(802.24±238.41)ng/L(P<0.05)。结论:实验结果提示,Avastin可以作为一种治疗血管内皮细胞瘤的安全有效的药物,或许可以考虑将其应用于其他血管瘤样病变的治疗。
- 许振起刘宇王依祥张伟赵福运
- 关键词：血管内皮瘤抗肿瘤药内皮生长因子内皮血管小鼠
