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粉尘螨生殖系统形态学研究被引量：4: 2008年; 粉尘螨Dermatophagoides farinae是一种重要的医学螨类。本文用光镜和扫描电镜研究了粉尘螨雌雄生殖系统的形态和结构。结果表明:雄性生殖系统由睾丸、输精管、附腺、射精管、阳茎及附属交配器官组成。睾丸位于血腔末端,不成对,精原细胞、精母细胞和精子依照精子发育的顺序有规则地分布在其内部。雌性生殖系统包括交配孔、囊导管、储精囊、囊导管、卵巢、输卵管、子宫、产卵管及产卵孔,其中卵巢由一个中央营养细胞和围绕其周围的卵母细胞组成。; 吴桂华刘志刚孙新; 关键词：粉尘螨生殖系统形态学扫描电镜

抗粉尘螨主要变应原Der f1单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2009年; 目的制备和鉴定鼠抗粉尘螨主要变应原Der f1的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)。方法利用重组Der f1蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。结果获得6株可稳定分泌鼠抗粉尘螨主要变应原Der f1的单克隆抗体,其Ig亚型均为IgG1,且6株单抗均具有良好的效价。ELISA和Western-blotting分析表明,该6株单抗均能识别重组Der f1蛋白和天然的粉尘螨提取物。其中,除了484不识别屋尘螨提取物,其他均能识别。结论成功制备了6株鼠抗粉尘螨主要变应原Der f1的单克隆抗体,为建立粉尘螨主要变应原Der f1检测及纯化方法奠定了基础。; 顾耀亮李佳娜陈家杰吉坤美刘志刚; 关键词：F1 粉尘螨主要变应原单克隆抗体

屋尘螨成螨形态的扫描电镜观察被引量：8: 2012年; 【目的】利用扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)观察屋尘螨Dermatophagoides pteronyssinus颚体、躯体、外生殖器及足等的形态结构。【方法】从床尘、枕尘中采集屋尘螨,分离出雌雄成螨,在体视显微镜下清洗处理活螨后,用SEM观察其外部形态特征。【结果】SEM照片显示,屋尘螨螯肢钳状,须肢扁平;体表具细密皮纹,似指纹状,纹间距小于2μm。外生殖器位于腹面正中,雌螨为产卵孔,雄螨生殖孔具1对叶状生殖盖。肛门呈纵行裂孔,雄螨具2个肛吸盘。雌螨足跗节末端各具爪垫1个,雄螨跗节Ⅳ具2个吸盘。【结论】本研究观察结果为尘螨鉴定提供了更多依据。; 赵学影刘晓宇李玲孙新刘志刚; 关键词：尘螨屋尘螨成螨扫描电子显微镜

标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量测定被引量：1: 2010年; 目的研制粉尘螨Ⅱ组变应原Der f 2单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),并建立双单抗夹心ELISA检测方法 ,测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量。方法应用基因工程方法获得粉尘螨变应原Der f2重组蛋白并通过亲和层析纯化,再免疫小鼠,利用间接ELISA筛选获得McAb杂交瘤细胞株并纯化、鉴定抗体的特异性;用一株单抗包被酶标板,同时用生物素标记另一株单抗,从而建立双单抗体夹心ELISA法;并用此法测定粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量。结果成功地获得了一株单抗3B12与屋尘螨抗原具有交叉反应,另外一株单抗3G7与屋尘螨抗原没有交叉反应,并建立了双单抗夹心ELISA方法测定Der f2的含量,其方法的检测限为0.5ng/mL,并在6.25ng/mL-300ng/mL范围内线性良好;标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量为100ng/10000BAU。结论成功制备了高效价抗Der f 2单抗,并建立了双抗体夹心ELISA检测方法。该方法具有很高的灵敏度,可以测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量,为临床应用奠定基础。; 吉坤美刘晓宇唐艳詹政科刘志刚; 关键词：F 单克隆抗体夹心ELISA

中国不同地理区域室内尘螨的调查研究被引量：37: 2010年; 目的为了解我国不同地理区域内床尘螨的种类分布及物种丰富度。方法使用真空吸尘器分别对我国南部(广州和深圳,n=172)、中部(上海和南昌,n=126)和北部(北京和沈阳,n=112)地区的不同居室类型(家庭、宾馆和学生寝室)的床尘进行了采集、尘螨形态学鉴定和统计分析。结果灰尘样品尘螨阳性率59%(242/410),分离出螨8467只。分属于11科21属。麦食螨科的屋尘螨和粉尘螨为我国室内优势螨种,其中屋尘螨占总螨数的百分比为:南部:27.8%,中部:46.6%,北部:38,2%。粉尘螨为:32.3%、28.0%和23.1%。在非麦食螨科螨类中,热带无爪螨在我国南部的床尘中具有较高的数量(17.4%)。其它占有1%以上的螨有腐食酪螨(南部:1.0%,北部:1.2%)和纳氏皱皮螨(南部:5.8%),马六甲肉食螨(南部:3.7%,中部:1.2%,北部:1.2%),普通肉食螨(中部1.2%),阳单梳螨(南部2.2%),基氏蠊螨(中部1.2%)等,不论是螨的阳性率(χ2=29.6,P<0.001)还是螨的密度(χ2=41.8,P<0.001),我国南部和中部地区都要高于北部地区。环境因子和螨致敏危险性之间的相关性分析表明,南部地区和中部地区床尘螨的致敏危险性分别为北部地区的7.4倍和8.6倍(P<0.001)。家庭和学生寝室床尘中螨的致敏危险性要显著高于宾馆。随着楼层的增高,螨的致敏危险性则显著下降(P=0.009)。结论初步查明我国不同地理区域室内尘螨的种类和分布,为尘螨过敏性疾病的防治提供依据。; 刘晓宇吴捷王斌李盟冉丕鑫刘志刚

粉尘螨变应原（Der f I）对DC2．4细胞的作用及其诱发哮喘机制的初步研究: 2009年; 分别通过对DC2．4细胞白介素-12（IL-12）和IL-10的ELISA检测，蛋白酶激活受体（PAR-2）的基因表达和丝裂原活化蛋白酶（MAPK）p44／42的磷酸化来观察Der f I对DC2．4细胞的作用及其诱发哮喘机制的初步研究。Der f I作用于DC2．4细胞的结果显示，Der f I可促进DC2．4细胞IL-10的分泌（P〈0．01），抑制IL-12的分泌（P〈0．05），但信号通路抑制剂U0126可以逆转细胞因子的分泌模式；促进磷酸化p44／42MAPK的表达（尤其是促进p42的磷酸化）；抑制PAR．2受体的表达并呈时间依赖性。Th1／Th2失衡及Th2细胞功能亢进是过敏性哮喘的免疫基础，3312型免疫应答可能是哮喘发生的机制之一。本研究中由于Der f I作用于DC2．4细胞后抑制初始T细胞向Th1细胞分化而促使其向Th2细胞分化从而促使Th2型免疫应答，进而诱发过敏性哮喘，信号通路p44142MAPK的磷酸化加强和PAR-2受体表达的抑制也在诱发过敏性哮喘过程中起到促进作用。; 沈小英朱清仙刘志刚李湘辉; 关键词：粉尘螨过敏性哮喘 MAPK PAR

重组屋尘螨2类变应原疫苗免疫治疗小鼠过敏性气道炎症的研究被引量：10: 2006年; 目的观察以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)材料为佐剂制备的重组屋尘螨2类变应原(rDerp2)纳米微粒疫苗(DEPN)对小鼠过敏性气道炎症的影响,并探讨其免疫治疗机制。方法制备PLGA-rDerp2纳米粒子并鉴定其特性。40只BALB/c小鼠随机分为5组,A组(对照组)均给予生理盐水(100μl)。B、C、D和E组腹部皮下注射屋尘螨粗浸液(10μg)免疫小鼠致敏,然后分别用PBS(100μl)、2mg空白PLGA粒子(emptyPLGA,EP)、100μgrDerp2、2mg的DEPN纳米疫苗(载有100μgrDerp2)皮下注射进行免疫治疗,连续免疫治疗3d,1次/d,各组用rDerp2(50μg)滴鼻激发,激发后第2天剖杀,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并对细胞进行总计数和分类计数;HE染色和PAS染色(PeriodicAcid-SchiffStain)观察小鼠肺部组织炎症和支气管黏液分泌;用ELISA检测BALF和脾细胞培养上清的细胞因子(IL-4、IFN-γ)和血清中变应原特异性IgG2a和IgE抗体浓度。结果B、C组肺部呈明显的变态反应性炎症,D、E组变应原诱导的肺部嗜酸粒细胞浸润和黏液分泌比B、C组显著减轻。BALF中的细胞总数B组比A组明显增多,分类细胞以中性和嗜酸粒细胞为主,超过50%。rDerp2特异性IgE抗体水平,D组(0.93±0.04)和E组(0.77±0.10)均低于B组(1.14±0.10)(P<0.01);特异性IgG2a抗体水平,D组(1.02±0.01)和E组(1.17±0.46)均高于B组(0.14±0.01)(P<0.01)。在BALF中,D组[(55.60±3.79)pg/ml]和E组[(48.60±4.50)pg/ml]IL-4水平均低于B组[(78.90±6.07)pg/ml](P<0.01);IFN-γ水平E组[(68.50±2.87)pg/ml]显著高于B组[(27.30±3.51)pg/ml](P<0.01)。脾细胞上清的IL-4水平,D组[(56.3±4.85)pg/ml]和E组[(40.2±4.36)pg/ml]显著低于B组[(81.20±6.84)pg/ml](P<0.01);IFN-γ水平,E组[(70.20±3.85)pg/ml]显著高于B组[(34.60±2.25)pg/ml]。结论DEPN免疫治疗可抑制小鼠肺部过敏炎症,其机制可能与调节Th1/Th2平衡有关。; 喻海琼刘志刚于琨瑛许卓谦丘劲; 关键词：屋尘螨变应原过敏性气道炎症小鼠

肉桂提取物对粉尘螨杀灭的实验研究被引量：5: 2009年; 目的研究肉桂(Cinnamomum cassia Presl)不同溶剂提取组分对室内粉尘螨(Dermatophagoides farinae)的杀灭活性。方法肉桂粉碎后以石油醚、乙酸乙酯、甲醇为提取剂,分别用索氏提取法、浸渍法提取肉桂的不同有效组分;以作用浓度和作用时间为变量,分别用直接接触法测试肉桂石油醚、乙酸乙酯、甲醇提取组分对粉尘螨的杀灭活性,用熏蒸法测试肉桂石油醚、乙酸乙酯提取组份对粉尘螨的杀灭活性。结果直接接触法测试肉桂不同组分对粉尘螨杀灭活性的结果显示作用24h时肉桂石油醚提取组分和乙酸乙酯提取组分的LD50分别为4.64μg/cm2和1.44μg/cm2,甲醇提取组分对粉尘螨则不具有显著杀灭活性;从作用时间上看,石油醚组分作用时间最短,乙酸乙酯组分次之;熏蒸法测试结果显示肉桂石油醚、乙酸乙酯提取组分使用剂量为6.09μg/cm2和9.75μg/cm2时作用24h后对粉尘螨的致死率即达到100%。结论本文研究结果表明肉桂的石油醚和乙酸乙酯提取组分对粉尘螨具有良好的杀灭活性,呈剂量、时间依赖性,且与作用方式直接相关。; 李静吴海强刘志刚张彩芬艾梅; 关键词：粉尘螨杀螨

深圳地区粉尘螨Ⅱ类变应原基因的多态性分析及其表达蛋白的变应原性鉴定被引量：5: 2007年; 粉尘螨Ⅱ类变应原（DerfⅡ）是粉尘螨Dermatophagoides farinae主要变应原之一,可引发Ⅰ型变态反应。从深圳地区挑取活粉尘螨,经形态鉴定后纯培养,提取其总RNA,RT-PCR扩增出DerfⅡ基因,克隆到pMD18-T载体后测序。通过计算机软件分析该基因的多态性。将该目的基因克隆到pET-His表达载体上得到重组质粒pET-DerfⅡ。工程菌经IPTG诱导培养,表达DerfⅡ目的蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在。重组DerfⅡ蛋白通过6His-tag蛋白纯化系统进行分离、纯化,并进行Western blot检测该重组蛋白与对粉尘螨过敏患者血清中IgE的反应性。结果表明,克隆的5株深圳地区的DerfⅡ基因与GenBank公布的DerfⅡ（AB195580.1）核苷酸序列同源性为96.8%～99.3%,推导的氨基酸序列同源性为93.8%～98.6%。表达纯化的5种重组DerfⅡ蛋白经Western blot检测,表明都具有良好的变应原性。; 白羽吉坤美刘志刚蔡成郁; 关键词：粉尘螨变应原基因多态性原核表达

热带无爪螨体内特异性变应原定位被引量：1: 2009年; 【目的】探讨热带无爪螨Blomia tropicalis特异性变应原在体内的定位。【方法】制作热带无爪螨石蜡切片,HE染色后光镜观察其内部形态结构。选用对尘螨过敏患者的阳性血清特异性IgE抗体作探针,免疫组织化学染色分析其特异性抗原存在位置。【结果与结论】免疫组织化学染色可见热带无爪螨中肠、盲囊、结肠的肠壁和内容物及生殖腺等均有阳性反应。其中肠壁组织和肠腔内容物呈强阳性反应,提示肠为特异性抗原的主要存在部位。; 吴桂华刘志刚孙新杨峰巍; 关键词：变应原抗原定位免疫组织化学 HE染色

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广东省粤港关键领域重点突破项目(20054982207)

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