国家自然科学基金(81072329)
- 作品数：16 被引量：31H指数：3
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- 脱氧鬼臼毒素对美洲大蠊背侧不成对中间神经元电压依赖性钾电流的影响
- 2012年
- 目的:探讨脱氧鬼臼毒素(DOP)对美洲大蠊背侧不成对中间神经元(DUM)电压依赖性钾电流IK的影响。方法:采用全细胞膜片钳技术研究脱氧鬼臼毒素对美洲大蠊背侧不成对中间神经元电压依赖性钾电流的电流幅度,电流-电压关系以及激活曲线的影响。结果:DOP能够抑制电压依赖性钾通道电流的幅度,而且此抑制作用具有浓度依赖性(5、10、20、40μmol/L)。DOP抑制IK的半数抑制浓度(IC50)值为18.064μmol/L。20μmol/L DOP能使IK的电流-电压关系曲线下移,并能使IK的激活曲线向去极化方向移动。结论:DOP对美洲大蠊背侧不成对中间神经元(DUM)电压依赖性钾电流具有抑制作用,这可能是其杀虫作用的机制之一。
- 王立山李艳孙芹程洁高蓉肖杭
- 关键词：DOP电压依赖性钾电流膜片钳
- 六氯苯对PC-12细胞凋亡的影响
- 2011年
- 目的:探讨环境内分泌干扰物六氯苯对PC-12细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:采用体外细胞培养方法,5%CO2 37℃恒温条件下,将PC-12细胞培养于含10%灭活胎牛血清的高糖DMEM培养基中。0、1、10、20、100、200μmol.L-1六氯苯处理组,每组设3组复孔,培养24 h后应用Cell Counting Kit-8试剂盒进行六氯苯对PC-12细胞增殖和毒性分析;流式细胞术FITC-An-nexinV/PI双染检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色及倒置荧光显微镜拍摄细胞平片,观察细胞形态学改变;免疫印记法(Western blot)检测相关蛋白PLCγ及ERK蛋白磷酸化表达变化。结果:随着六氯苯浓度增加,细胞凋亡率升高,呈剂量依赖关系;Hoechst33258染色可见细胞核膨大、染色质边集浓染等凋亡特征;与对照组相比p-PLCγ及p-ERK1/2表达均降低,呈剂量依赖效用。结论:六氯苯能够诱导PC-12细胞凋亡,p-PLCγ及p-ERK1/2信号通路可能在此过程中发挥作用。
- 栾春业王强张晶徐艳肖杭张劲松
- 关键词：环境内分泌干扰物六氯苯PC-12细胞凋亡P-ERK1/2
- 趋化因子受体4在神经胶质瘤中的表达及血管生成中的作用被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)在神经胶质瘤中的表达及在血管生成中的作用。方法:通过免疫组化法检测正常或神经胶质瘤患者的瘤体组织标本CXCR4、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,其结果做方差分析及相关性分析;采用ELISA观察CXCR4的配体基质细胞衍生因子-1(stromal derived factor-1,SDF-1)对U87胶质瘤细胞系VEGF分泌的影响;同时利用多种处理方式(对照组、SDF-1处理组、CXCR4拮抗剂AMD3100处理组、CXCR4 RNA干扰处理组)作用于U87后,取其条件培养上清与人脐静脉内皮细胞系(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共培养,比较小管样结构(tubule-like structure,TLS)生成数量的变化。结果:神经胶质瘤中CXCR4、VEGF的表达量随着肿瘤恶性度的升高而增加,且二者呈线性正相关(P<0.01)。ELISA实验表明SDF-1可通过CXCR4促进VEGF的分泌(P<0.01)。成管实验提示CXCR4与胶质瘤血管生成相关。结论:CXCR4与神经胶质瘤恶性度相关,且其配体SDF-1可通过CXCR4影响VEGF的表达,将CXCR4拮抗或干扰明显影响胶质瘤血管增生,提示CXCR4可能为神经胶质瘤的治疗提供相应靶点和思路。
- 许余玲王军徐艳环飞肖杭
- 关键词：神经胶质瘤肿瘤血管血管内皮生长因子
- 双酚A对大鼠背根神经节神经元钙离子通道电流影响被引量：4
- 2012年
- 目的探讨双酚A对大鼠背根神经节(DRG)神经元钙离子通道影响。方法 SD大鼠,周龄4～6周,采用酶消化法急性分离大鼠背根神经节神经元,分别采用全细胞膜片钳技术和激光共聚焦技术记录钙电流和KCl激发钙瞬变的变化。结果双酚A(0.1、1、10、100μmol/L)呈浓度依赖性抑制大鼠背根神经节神经元钙电流,对钙通道的半数最大抑制浓度(IC50)为11.41μmol/L;10μmol/L双酚A显著改变Ca2+通道的激活特性,电流激活曲线去极化方向移动(P<0.05),该浓度双酚A同样可以抑制50 mmol/L KCL激发瞬时胞内钙浓度增加。结论双酚A对大鼠背根神经节神经元钙离子通道具有抑制作用。
- 王文娟王军钱文溢朱勤肖杭
- 关键词：钙通道激光共聚焦钙瞬变
- 两种Ames试验方法在槲皮素致突变试验中灵敏度的研究
- 2011年
- 目的:通过传统Ames试验与改进彷徨试验对槲皮素的致突变试验结果,比较两种试验的灵敏度。方法:Ames试验方法采用平板掺入法,选择3.2、16、80、400、2000μg/mL 5个剂量组的槲皮素在有或无代谢话化条件下处理鼠伤寒沙门氏菌株TA98和TA100 48小时后计数回复突变菌落数;改进彷徨试验采用96孔板法,选择0.128、0.64、3.2、16、80μg/mL 5个剂量组的槲皮素在有或无代谢活化条件下处理鼠伤寒沙门氏菌株TA98和TA100 24小时后计数变色孔数。结果:Ames试验结果显示槲皮素在80-2000μg/mL回复突变菌落数明显增加并超过对照2倍并有明显剂量反应关系,Ames试验结果阳性;改进彷徨试验结果显示槲皮素在0.64-80μg/mL变色孔数明显增加(P<0.01),并有剂量反应关系,结果为阳性;而在0.64-16μg/mL剂量下,改进彷徨试验能检测出阳性结果,而Ames试验未检测出阳性结果。结论:在较低浓度时,改进彷徨试验能检测出Ames试验检测不出的阳性结果,表明改进彷徨试验灵敏度较Ames试验高。
- 程洁靳苏香王军环飞肖杭
- 关键词：槲皮素AMES试验
- 应用ERKO小鼠研究雌激素受体在MPTP致帕金森病模型中的作用
- 2012年
- 目的:探讨雌激素受体(estrogen receptors,ERs)在帕金森病(Parkinson’s disease,PD)中的作用特点。方法:应用经典化学毒素MPTP腹腔注射制备小鼠PD模型,WT、αERKO和βERKO雄性小鼠随机分为Saline组和MPTP组,爬竿试验观察行为学改变,荧光定量PCR法检测纹状体和中脑ERα、ERβ、TH、DAT和VMAT2 mRNA表达的变化。结果:与WT相比,αERKO小鼠中多巴胺缺失程度更大,爬竿试验显示αERKO小鼠更早出现行为学异常。αERKO和βERKO小鼠中脑TH、DAT和VMAT2 mRNA表达均降低。WT小鼠MPTP染毒致PD模型后,纹状体和中脑ERαmRNA表达增加,ERβmRNA表达降低。MPTP致PD模型后,αERKO和βERKO小鼠TH和DAT mRNA表达变化情况与WT小鼠不同,βERKO小鼠VMAT2 mRNA表达变化情况与WT小鼠相同,但αERKO小鼠VMAT2 mRNA表达变化情况与WT小鼠不同。结论:ERs在黑质纹状体DA系统中有神经保护作用,ERα亚型在此过程中发挥着更重要的作用。
- 王强王宇钱文溢王军肖杭董海蓉丁海霞
- 关键词：雌激素受体基因敲除小鼠帕金森病
- 钾电流在甲基苯丙胺引起神经元损伤中的作用被引量：2
- 2013年
- 目的探讨甲基苯丙胺（Meth）对外向钾电流的影响及外向型钾通道在Meth引起的海马神经元损伤过程中的作用。方法以分离出的怀孕18dSprague—Dawley大鼠胎鼠的海马神经元作为实验对象，分为对照组和Meth处理组，采用全细胞膜片钳的实验方法，分别记录Meth处理后外向4-AP和TEA敏感型钾电流大小的变化。通过MTT和TUNEL的方法，观察Meth作用后引起的电流变化对海马神经元活力和凋亡的影响。统计分析利用单因素方差分析结合LSD-t检验，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果与对照组（n=10）比较[（87．4±12．5）pA／pF]，Meth处理组（n=7）细胞外向4-AP敏感型钾电流密度明显增大[（120．1±19．6）pA／pF，P〈0．01]，且呈剂量依赖性。MTT结果表明，Meth明显降低细胞的活力（48．72±4．38）％，与对照组（100．07±3．36）％比较，差异具有统计学意义，而钾通道抑制剂4-AP（61．39±3．15）％以及胞外高浓度K^＋溶液（78．25±9．42）％，能有效抑制Meth引起的细胞损伤。TUNEL实验进一步表明，Meth能引起海马神经元的凋亡，而4-AP和胞外高浓度K^＋溶液对Meth引起的细胞凋亡具有保护作用。结论Meth引起外向4-AP敏感型钾电流增大，进而可能导致海马神经元的损伤。
- 蒋雷王军高蓉肖杭张劲松
- 关键词：甲基苯丙胺
- 应用ERKO小鼠观察双酚A对雄性小鼠睾丸与附睾的影响及雌激素受体的作用特点被引量：5
- 2013年
- 目的探讨双酚A(BPA)对雄性小鼠生殖系统的影响及雌激素受体(ERs)的作用特点。方法野生型(WT)、雌激素受体基因敲除(αERKO和βERKO)小鼠随机分为对照组和BPA组100μg/(kg·d),连续经口灌胃染毒30 d后,观察小鼠睾丸和附睾脏器系数、精子畸形率以及睾丸组织形态学变化。荧光定量PCR法检测睾丸和附睾中ERs mRNA表达的变化。结果 BPA使WT雄性小鼠附睾脏器系数降低,精子畸形率升高,睾丸组织形态学观察,发现有病理变化。当BPA作用于αERKO和βERKO小鼠后,附睾脏器系数也降低,精子畸形率也升高,睾丸组织形态学也出现病变。荧光定量PCR实验发现BPA可使睾丸和附睾中ERαmRNA表达降低、睾丸中ERβmRNA表达降低。结论 BPA能够对雄性生殖系统产生毒性作用,ERα和ERβ在此过程中可能起了重要作用,这为BPA等环境雌激素毒性机制提供了依据。
- 王强钱文溢刘景丽陆荣柱程洁王军肖杭
- 关键词：双酚A
- 应用ERKO小鼠观察雌激素对痛觉的影响及ERs的作用特点
- 2011年
- 目的:探讨雌激素通过ERs对痛觉的影响。方法:WT、αERKO和βERKO小鼠随机分为去卵巢加17β-E2组(OVX+17β-E2)和去卵巢组(OVX+Oil),甩尾热痛仪和热痛刺激仪测痛,并应用福尔马林致痛模型评价雌激素对痛觉的影响。结果:将WT小鼠卵巢切除后给予外源性雌激素,发现17β-雌二醇(17β-E2)对甩尾痛阈和缩足痛阈没有影响,敲除ERα或ERβ后甩尾痛阈和缩足痛阈也没有变化;17β-E2能够降低福尔马林炎症性痛实验的Ⅱ相反应,但对Ⅰ相反应无影响。进一步应用ERKO小鼠模型观察ERα和ERβ的作用特点发现,较WT小鼠,βERKO雌性小鼠在福尔马林炎症性痛模型Ⅱ相疼痛反应行为的时间减少,而在Ⅰ相反应中没有差别;αERKO小鼠福尔马林炎症性痛实验与WT比较没有明显差异。结论:雌激素可以影响慢性炎性痛,可能与影响急性痛进程无关。ERβ亚型在雌激素调节痛觉传递和调制过程中发挥着重要作用。
- 丁海霞王强王宇王军刘景丽董海蓉肖杭
- 关键词：雌激素受体基因敲除小鼠痛觉
- TEA敏感型钾电流在gp120引起的海马神经元损伤中的作用
- 2015年
- 目的:探讨gp120对TEA敏感型钾电流的作用以及该电流在gp120引起神经元损伤中的作用。方法 :分离怀孕18d SD大鼠胎鼠的海马神经元作为实验对象,分为对照组和gp120处理组,利用全细胞膜片钳的方法记录外向延迟钾电流的变化,通过MTT和TUNEL的方法分别观察gp120处理后神经元的活力和凋亡情况。Western blot观察Kv2.1钾通道的蛋白表达变化以及在TEA敏感型钾电流中的贡献度。结果:gp120能引起外向钾电流明显增大,具有浓度依赖性,其中TEA敏感型成分参与了外向钾电流的增大。此外,MTT和TUNEL实验发现,gp120能引起神经元活力的下降和凋亡,而钾通道抑制剂TEA能缓解由gp120引起的细胞损伤。进一步实验表明,gp120可上调TEA敏感型成分中Kv2.1钾通道的表达,且其特异性抑制剂Gx TX-1E能显著抑制神经元中TEA敏感型钾电流成分。结论:TEA敏感型钾电流参与了gp120引起的神经元损伤过程,其重要组成成分Kv2.1通道蛋白上调,提示该通道蛋白可能参与了gp120引起的细胞损伤。
- 余鹏飞蒋雷钱文溢周景王易欣肖杭王军
- 关键词：GP120海马神经元
