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复合载体固定化大肠杆菌制备γ-氨基丁酸被引量：5: 2008年; 用卡拉胶与明胶复合载体固定大肠杆菌,优化了固定化细胞的制备条件,并利用该复合载体固定大肠杆菌细胞进行酶法制备γ-氨基丁酸的研究。实验结果表明,最佳工艺条件为:m(卡拉胶):m(明胶)=3:2,ρ(混合胶)=12g/L,ρ(KCl)=60g/L,固定化时间为3h,ρ(菌体)=80g/L,反应温度为37℃,转化体系pH=4.8,ρ(底物)=40g/L。固定化细胞在最适条件下比酶活高达10740U。包埋1.0g湿菌体的固定化细胞重复使用7次,可把42gL-谷氨酸完全转化为γ-氨基丁酸。; 沈俞刘均忠刘茜焦庆才; 关键词：卡拉胶明胶固定化细胞 Γ-氨基丁酸生物工程

水/有机溶剂双相体系中色氨酸合成酶酶法合成L-色氨酸被引量：6: 2011年; 在水/有机溶剂双相体系中,利用重组大肠杆菌DM206[pET28a-trpBA/BL21(DE3)]色氨酸合成酶催化L-丝氨酸和吲哚合成了L-色氨酸.考察了有机溶剂、有机相乙酸乙酯体积分数、反应温度、水相pH、底物L-丝氨酸与吲哚摩尔比、底物L-丝氨酸浓度、表面活性剂和酶添加量对色氨酸合成酶酶活的影响.结果表明,酶法最佳转化条件为:有机相溶剂为乙酸乙酯,乙酸乙酯的体积分数为2.5%,反应温度为35oC,水相pH值为8,底物L-丝氨酸与吲哚的摩尔比为1:1.2,底物L-丝氨酸浓度为100mmol/L,吐温80的质量分数为0.4%,反应介质中酶的添加量为20g/L.在此条件下酶促反应2.5h,L-丝氨酸转化率可达95%.; 徐礼生刘均忠王治元张宏娟刘伟刘茜焦庆才; 关键词：L-色氨酸 L-丝氨酸吲哚乙酸乙酯

酶法合成L-4-甲砜基苯丙氨酸被引量：4: 2010年; 以4-甲砜基苯丙酮酸和L-天冬氨酸为底物,利用重组大肠杆菌DM204(pGEX-KG-aspC/BL21)表达的天冬氨酸转氨酶酶法转化得到了L-4-甲砜基苯丙氨酸,优化得到的酶法最佳转化条件为:转化温度37℃,反应体系pH=8,底物4-甲砜基苯丙酮酸质量分数8%,质量分数0.6%的吐温80和10-4mol/L Mg2+对酶活有促进作用.在最佳工艺条件下经过12 h酶促反应,4-甲砜基苯丙酮酸摩尔转化率达95%.本研究利用化学生物法制备了L-4-甲砜基苯丙氨酸,为制备其它天然氨基酸衍生物提供了新思路.; 刘均忠熊吉滨赵根海刘茜焦庆才; 关键词：基因工程天冬氨酸转氨酶酶法合成氨基酸衍生物

粪肠球菌精氨酸脱亚胺酶酶学性质研究被引量：6: 2008年; 经硫酸铵分级沉淀、Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析、SephadexG-75凝胶柱层析从NJ402自溶细胞超声破碎液中提纯得到精氨酸脱亚胺酶(ADI),纯化倍数为34.5,活力回收率为31.4%,经SDS-PAGE以及Native-PAGE测定结果表明,ADI亚基分子量约为46kD,该酶非变性情况下的分子量约为190kD左右,该酶为同四聚体结构。酶学性质研究结果表明:ADI催化最适温度和最适pH分别为50℃和6.5,在45℃以下和pH5～8之间有很好的稳定性。ADI是L-型脱亚胺酶,具有严格的光学选择性,适当浓度的Mn2+、Mg2+、Co2+对ADI催化活力的促进作用较大,高浓度的Zn2+和Co2+对酶有一定程度的抑制作用,L-瓜氨酸对酶无抑制作用而L-鸟氨酸却表现出较强的抑制作用。ADI在最佳催化条件下作用于L-精氨酸的米氏常数为3.2686 mmol/L,最大反应速度为2.44 μmol/min。; 李成付李凯李加友焦庆才刘茜易立涛; 关键词：精氨酸脱亚胺酶分离纯化酶学性质

酶法转化制备L-瓜氨酸被引量：21: 2005年; 利用粪链球菌精氨酸脱亚胺酶转化L-精氨酸制备L-瓜氨酸。考察了菌龄、转化温度等多种因素对精氨酸脱亚胺酶活力的影响。酶法制备L-瓜氨酸的最适工艺条件是:菌体发酵时间20 h,转化温度37℃,转化液起始pH为6.0,ρ〔十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)〕=0.3 g/L使酶活提高了414%。c(Co2+)=10-3mol/L使酶活增高约50%,c(Cu2+)=10-2mol/L或c(Zn2+)=10-2mol/L使酶活下降约50%。Ca2+、Mg2+和Mn2+对酶活影响较小。; 曹瑜李加友焦庆才; 关键词：粪链球菌精氨酸脱亚胺酶 L-精氨酸

反胶束萃取精氨酸脱亚胺酶被引量：7: 2008年; 报道了用反胶束体系萃取精氨酸脱亚胺酶(ADI)的研究结果,为精氨酸脱亚胺酶的分离纯化提供了一种方法。在反胶束体系中采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)作为表面活性剂,正辛烷和丁醇作为溶剂及助溶剂。考察了水相pH、振荡时间、离子强度、表面活性剂浓度及精氨酸脱亚胺酶质量浓度等因素对精氨酸脱亚胺酶分离纯化效果的影响。实验结果表明,当c(CTAB)=0.01 mol/L,pH=7,振荡时间15 min,体系中用于反萃取的c(NaCl)=0.75 mol/L,且起始粗酶质量浓度控制在30 g/L时,通过辛烷/丁醇/CTAB反胶束体系的萃取和反萃取,ADI酶液萃取率E达到85%,比活达到1.107 U/mg,是起始酶液的4.52倍。; 李凯李成付李加友刘茜焦庆才; 关键词：精氨酸脱亚胺酶反胶束萃取分离纯化

丝氨酸脱氨酶酶法拆分DL-丝氨酸被引量：3: 2013年; 利用pET28a为载体在宿主细胞BL21(DE3)中重组表达了大肠杆菌丝氨酸脱氨酶,以L-丝氨酸为底物,研究了其酶学性质,考察了温度、起始pH、底物质量浓度等因素对酶促反应的影响,并利用丝氨酸脱氨酶酶法拆分了DL-丝氨酸。结果表明,丝氨酸脱氨酶重组表达成功;丝氨酸脱氨酶最佳反应条件为37℃,pH=9.0,底物质量浓度40 g/L;0.3 g菌体细胞酶法拆分100 mLρ(DL-丝氨酸)=80 g/L反应液需8 h,其中,L-丝氨酸摩尔转化率达98%。; 高吉刘均忠李卉刘茜焦庆才; 关键词：酶法拆分生物工程

中试规模制备L-茶氨酸及其衍生物被引量：9: 2005年; 报道了中试规模制备L-茶氨酸和L-谷氨酰胺的一种方法。以廉价的L-谷氨酸为原料,采用邻苯二甲酰基作为保护基,保护L-谷氨酸的α-氨基,醋酐回流10 m in使其分子内脱水生成N-邻苯二甲酰-L-谷氨酸酐,在常温、常压条件下,分别与2 mol/L氨水和2 mol/L乙胺水溶液反应生成中间产物N-邻苯二甲酰-L-谷氨酰胺、N-邻苯二甲酰-L-茶氨酸,中间产物在室温条件下与0.5 mol/L水合肼反应48 h脱除保护基,分别以57%、61%的收率得到L-谷氨酰胺和L-茶氨酸。; 钱绍松陈然刘毅吴晓燕李加友焦庆才; 关键词：L-谷氨酰胺 L-谷氨酸

乙酰鸟氨酸脱乙酰酶固定化细胞拆分D,L-缬氨酸被引量：7: 2009年; 报道了一种利用具有乙酰鸟氨酸脱乙酰酶活性的固定化细胞拆分D,L-缬氨酸的新方法. 该酶促反应最适条件： pH=6, 反应温度50 ℃, 底物N-乙酰-D,L-缬氨酸浓度200 mmol/L, 固定化细胞用量0.2 g/mL（或100 U/mL）. 0.1 mmol/L CoCl2条件对该酶促反应有显著的激活作用. 在以上条件下反应2～3 h, 测得产物L-缬氨酸浓度95 mmol/L. 该固定化细胞连续10次使用, 平均转化率为90.8%（以N-乙酰-L-缬氨酸计）, 显示出了良好的工业化应用前景.; 张飞熊吉滨刘均忠刘鹏刚焦庆才; 关键词：固定化细胞

青霉素酰化酶法制备D-丙氨酸被引量：1: 2008年; 报道了青霉素酰化酶法制备D-丙氨酸的研究结果,为D-丙氨酸的制备提供了一种方法。考察了pH、温度、DL-丙氨酸与苯乙酰氯的摩尔比、反应时间对制备结果的影响。确定了制备N-苯乙酰-DL-丙氨酸的最佳反应条件:pH=9.5,n(DL-丙氨酸)∶n(苯乙酰氯)=1.1∶1;酶促反应最佳条件为:pH=7.5,温度37℃条件下反应6h,其产物为N-苯乙酰-D-丙氨酸和苯乙酸的混合物。该混合物用c(HC l)=6 mol/L的盐酸高温回流6 h得D-丙氨酸盐酸盐,再经717阴离子树脂处理得D-丙氨酸。光学纯度为95.3%,总收率为72.5%。; 李天童刘鹏刚刘茜焦庆才; 关键词：固定化青霉素酰化酶 DL-丙氨酸 L-丙氨酸拆分生物工程

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国家技术创新计划(02CJ-13-01-16)

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