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国家自然科学基金(30972599)
作品数:
3
被引量:4
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相关作者:
缪晓辉
徐文胜
赵克开
陈玉
汪菁
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相关机构:
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缪晓辉
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徐文胜
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乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测的临床应用
被引量:3
2011年
HBV共价闭合状DNA(covalently dosed circular DNA,oocDNA)是HBV复制的初始模板。近年来,随着以选择性实时荧光PCR技术为代表的各类cccDNA检测技术日渐成熟,以及临床医生对cccDNA检测临床意义认识的不断提高,cccDNA检测已从基础研究逐渐进入到临床应用。
赵克开
缪晓辉
关键词:
乙型
抗药性
肝衰竭
乙型肝炎病毒共价闭合环状DNAYMDD位点基因序列自然变异的检测与分析
被引量:1
2012年
HBV共价闭合环状DNA(covalentlyclosedcircularDNA,cccDNA)是病毒转录和复制的原始模板,并能长期稳定地存在于被感染的肝细胞核内。目前,抗病毒治疗难以完全将其清除,寻找细胞核内早期出现的耐药变异cccDNA,可为初始联合抗病毒治疗策略提供关键证据,从而降低发生耐药的可能。本研究应用套式PCR结合直接测序法检测85例未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者肝内HBVcccDNA的YMDD位点,并对YMDD变异株进行克隆分析,了解变异株所占的比例。并用同样方法检测血清及肝组织HBV松弛环状DNA(relaxedcircularDNA,rcDNA)的YMDD位点,探讨其与cccDNA变异的关系。
汪菁
陈玉
徐文胜
缪晓辉
关键词:
乙型肝炎病毒
自然变异
HBVCCCDNA
基因序列
YMDD变异株
联合抗病毒治疗
乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA与松弛环状DNA对核苷(酸)类药物耐药变异的比较
2012年
目的了解肝细胞内HBV共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)核苷(酸)类药物耐药变异的情况,并比较其与松弛环状DNA(rcDNA)耐药变异的异同。方法取40例慢性HBV感染肝移植患者的部分肝组织,采用十二烷基硫酸钠一蛋白质沉淀法结合DNA提取试剂盒分离提取肝内的HBV cccDNA和rcDNA。将抽提产物用不降解质粒的ATP依赖DNA酶酶切纯化后,用跨HBV基因组双链缺口并涵盖常见核苷类耐药位点(rt169~rt250)的引物行单轮PCR或套式PCR选择性扩增cccDNA。另用不跨双缺口的引物PCR扩增肝组织内的HBV rcDNA和患者肝移植术前的血清HBVrcDNA。用直接测序法对上述扩增产物进行基因测序并分析核苷(酸)类药物耐药位点的检出情况。结果40例患者中,31例肝组织内检测到HBVcccDNA,35例肝组织检测到HBVrcDNA,21例肝移植术前血清中检测到HBVrcDNA。测序结果显示,2例肝组织内cccl)NA、rcDNA和血清rcDNA均检测到rtM204I变异;有2例患者肝内cccDNA、rcDNA分别存在rtM204I、rtQ215H变异,而血清rcDNA未检测到相应变异;3例血清中分别存在rtM204V、rtM204V、rtV173L+rtL180M+rtM204V变异,而肝内cccDNA和rcDNA未检测到相应变异。结论慢性HBV感染者肝细胞内cccDNA可出现核苷(酸)类药物耐药变异,且肝组织内的cccDNA、rcDNA耐药变异株与血清中的rcDNA耐药变异株不完全一致。
陈建山
徐文胜
赵克开
倪武
缪晓辉
关键词:
肝炎病毒
乙型
核苷酸类
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