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乙型肝炎病毒X基因载体的构建及鉴定被引量：1: 2011年; 目的构建乙型肝炎病毒（HBV）X基因高效真核表达载体,为进一步研究乙型肝炎病毒X基因的功能及乙型肝炎病毒母婴垂直传播的可能机制奠定基础.方法设计并合成乙型肝炎病毒X基因的引物,以我国急性肝炎患者血清中获得的全长乙型肝炎病毒序列C基因型作为构建载体X基因序列的母板进行扩增,将扩增产物X基因连接到真核表达载体pcDNA3.1（＋）上,酶切图谱分析、PCR检测和扩增产物序列分析等鉴定所构建的真核表达载体.结果以重组载体为模板、用乙型肝炎病毒X基因引物PCR扩增得到的目的片段为500bp,与已知乙型肝炎病毒X基因大小相同,酶切后发现在500bp左右及5kb左右出现两条特异性条带,分别与已知X基因序列相同.结论成功构建了乙型肝炎病毒X基因真核表达载体,为进一步研究乙型肝炎病毒X基因的功能及宫内感染的可能机制奠定了基础.; 付逢萍白桂芹刘妍; 关键词：乙型肝炎病毒 X基因真核表达载体宫内感染

乙型肝炎病毒x抗原在HBV宫内感染中的作用机制被引量：1: 2012年; 目的研究高复制水平HBV血清感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3后细胞内乙型肝炎病毒x抗原(HBxAg)及其下游蛋白在细胞内的表达情况,探讨HBxAg在HBV宫内感染中的作用。方法对人早孕绒毛膜滋养细胞株JEG-3进行传代培养,将高复制水平乙型肝炎病毒血清(HBV-DNA定量为107～108拷贝/mL)与传代培养的JEG-3细胞共同孵育48～72h;逆转录-聚合酶链式反应检测细胞内HBx-mRNA水平;Western blot检测细胞内HBxAg的表达;免疫组化检测细胞内HBxAg表达以及细胞内磷脂酰肌醇激酶3(PI3K)的表达;流式细胞仪检测细胞内pAKT的表达。结果 HBV感染JEG-3细胞后,在细胞中检测到HBx-mRNA,并检测到HBxAg的表达,同时发现细胞内PI3K及pAKT的表达水平明显增加,经统计学分析,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HBxAg/PI3K/pAKT抗细胞凋亡途径是高复制水平HBV宫内感染的可能机制。; 白桂芹付逢萍唐瑶; 关键词：乙型肝炎病毒X抗原体外感染宫内感染

乙型肝炎病毒x蛋白在HBV宫内感染中的作用被引量：1: 2011年; 目的研究HBV(hepatitis B virus)感染胎盘和正常胎盘在HBxAg(hepatitis B x antigen)蛋白表达上的不同,探讨HBxAg在HBV宫内感染中可能发挥的作用。方法选择24例已证实发生宫内感染的HBsAg(hepatitis Bsurface antigen)阳性孕妇(感染组)和10例正常健康孕妇(对照组)的胎盘组织,应用免疫组织化学SP染色法,检测各组胎盘中HBxAg的表达,用TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果在HBV感染组的胎盘中可检测到HBxAg的表达,且高复制组(HBV DNA>1×103拷贝/mL)染色吸光度值明显高于低复制组(HBV DNA<1×103拷贝/mL),差异有统计学意义(P<0.05);HBV感染高复制组细胞凋亡指数低于低复制组和对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 HBxAg/抗细胞凋亡是HBV DNA高复制孕妇发生宫内感染的可能机制,而HBV DNA阴性孕妇存在不同的作用机制。; 白桂芹张凌燕付逢萍唐瑶; 关键词：细胞凋亡宫内感染

HBV阳性血清体外感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3的研究: 2011年; 目的建立乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）体外感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3的模型,探讨HBV宫内感染的可能危险因素.方法对人绒毛膜滋养细胞株JEG-3进行传代培养,将不同复制水平的HBV阳性血清与传代培养的JEG-3细胞在无人为干扰因素下共同孵育48~72小时,实时荧光定量PCR方法检测细胞内HBV-DNA的复制水平.结果在无人为干扰因素下,HBV阳性血清体外可感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3,正常人血清细胞中未能检测出HBV-DNA;低、中危组细胞内也未检测出HBV-DNA;高危组复制水平为4.56×103U/mL,极高危组复制水平为2.72×104U/mL,随着HBV阳性血清复制水平的提高,JEG-3细胞内HBV复制水平有升高的趋势.结论 HBV体外可感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3,HBV高复制水平可能是其宫内感染的独立危险因素之一.; 白桂芹付逢萍唐瑶卫萌; 关键词：乙型肝炎病毒体外感染 HBVDNA

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