广东省农科院院长基金(201313)
- 作品数：10 被引量：51H指数：5
- 相关作者：宋长绪张乐宜蔡汝健李艳刘燕玲更多>>
- 相关机构：广东省农业科学院动物卫生研究所华南农业大学广州市食品检验所更多>>
- 发文基金：广东省农科院院长基金广州市科技计划项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 1株猪葡萄球菌强毒株的分离鉴定及致病性试验被引量：13
- 2015年
- 为确定广东省增城某猪场产房仔猪暴发渗出性皮炎的致病菌,从病猪心脏、肺脏、病变皮肤分离并纯化细菌,经形态学观察,镜检,生化特性及gap基因的序列分析,确定为猪葡萄球菌,命名为ZC-4株。药敏试验结果显示该菌株对头孢拉定、头孢唑啉、新生霉素高度敏感,对头孢噻肟、万古霉素、庆大霉素中度敏感,对青霉素、阿莫西林、磺胺类药物、链霉素、恩诺沙星等均耐药。对分离株毒素基因进行检测,结果显示,分离株携带ExhA毒素基因,测序结果表明,其编码区全长为822bp,编码274个氨基酸;氨基酸序列与丹麦分离株ExhA基因(AF515453)的同源性最高,为99.6%;遗传进化分析显示,分离株所携带的毒素基因与参考菌株猪葡萄球菌ExhA毒素基因聚类紧密,位于一个小的分支内。分离株致病性试验结果显示,分离株接种25日龄健康断奶仔猪后24h,病猪耳根、四肢内侧、背部、腹部、臀部、尾根等部位出现蜕皮并露出有液体渗出的鲜红创面,继而皮肤形成一层厚厚的结痂,说明该菌株具有较强的致病性。本试验为猪葡萄球菌疫苗的研制及致病机制研究提供了理论依据。
- 李艳张乐宜宋长绪
- 关键词：猪渗出性皮炎猪葡萄球菌
- 猪化脓隐秘杆菌的分离鉴定及病原特性研究被引量：8
- 2014年
- 从广东惠州某猪场患有心包炎和肺炎的病猪内脏器官分离到1株细菌，经形态学观察、生化特性分析，初步确定为化脓隐秘杆菌（Arcanobacterium pyogenes ）。利用 PCR 方法对16 S rRNA 基因以及毒力基因 plo、nanH、nanP、cbpA 基因进行扩增及序列测定。Blast 结果表明，该分离株的16 S rRNA 基因与GenBank 数据库中分离自野猪、牛、羊、林麝等动物的化脓隐秘杆菌的核苷酸序列同源性为91．6％～95．0％，证实该分离株为猪化脓隐秘杆菌（A．pyogenes）。毒力基因扩增出 plo、nanH、fimA 基因，未扩增出nanP、cbpA、fimC、fimG 基因。动物致病性试验显示该菌株具有较强的致病性。药敏试验结果显示，分离菌株对头孢唑啉、头孢拉定、头孢噻肟、新生霉素、阿莫西林、氨苄西林、万古霉素高度敏感，对强力霉素、恩诺沙星、阿米卡星、氧氟沙星中度敏感，对链霉素、磺胺异噁唑、四环素、庆大霉素、林可霉素、新诺明、诺氟沙星耐药。本研究为猪化脓隐秘杆菌的鉴定及其流行病学调查与防治提供了参考依据。
- 张乐宜蔡汝健宋长绪
- 关键词：化脓隐秘杆菌病原
- 猪源绿色气球菌的分离鉴定及16S rRNA基因序列测定与遗传进化分析被引量：7
- 2014年
- 为研究引起广东部分地区猪场仔猪发生急性死亡的致病菌及其系统发育地位,本研究从广东英德、惠州龙门、翁源、汕头等地区猪场急性死亡病仔猪中分离到6株呈α溶血的细菌。通过细菌形态学观察、生化特性鉴定、药敏试验、致病性试验以及16S rRNA基因的序列分析,确定为猪源绿色气球菌,分别命名为HD、WY、ZQ、LM、YD和ST。动物感染试验表明:6株分离菌株均具有不同程度的致病性;药敏结果显示:6株分离株均对头孢曲松、头孢唑啉、恩诺沙星、阿莫西林高度敏感,对新生霉素、利福平、阿米卡星、庆大霉素、多粘菌素B中度敏感,对其他抗生素均耐药;同源性及遗传进化分析结果显示:6株分离株与12株国内外参考菌株核苷酸同源性在93%以上,其中与澳大利亚分离自犬的15MS株同源性最高,为98.1%,与广西分离自猪的GXBL-1株同源性最低,为83.6%;6株分离株与广东分离株和澳大利亚分离株亲缘关系最近,暗示进化不存在明显的地域相关性。本研究确定了广东部分地区引起规模化猪场仔猪发生急性死亡的病原菌,为该菌引起的疾病的防治提供了依据。
- 张乐宜李艳蔡汝健刘燕玲蒋智勇宋长绪
- 关键词：绿色气球菌RRNA遗传进化分析
- 猪伪狂犬病毒的分离鉴定及其gE、TK全基因序列遗传变异分析被引量：7
- 2016年
- 将分离到的8种PRV分离株的g E、TK基因与国内外的毒株进行核苷酸及氨基酸的序列同源性分析,结果发现,分离毒株的gE、TK基因与15株国内外已发表的代表毒株核苷酸及氨基酸的序列同源性分别为97.3%~99.9%、98.7%~99.9%;遗传进化分析结果表明,分离毒株与国内近年分离自不同省份的代表毒株亲缘关系较近,与国外分离的代表毒株亲缘关系较远;而对gE、TK基因氨基酸主要变异位点分析表明,gE和TK基因都有一些位点已经发生突变。结果表明猪PRV广东部分地区分离毒株已发生变异,为规模化猪场对猪伪狂犬病的净化以及疫苗的选择提供参考。
- 王宇李段张乐宜刘燕玲王磊徐铮宋长绪
- 关键词：PRVTK
- 猪葡萄球菌脱落毒素ExhC基因的克隆及原核表达被引量：2
- 2014年
- 为研究猪葡萄球菌表皮脱毒素Exh C基因的分子特征及其原核表达产物的免疫学活性,利用PCR技术从猪葡萄球菌广东增城分离株(GDZC株)扩增出表皮脱落毒素Exh C基因,测序与序列比较分析显示,其编码区全长为837bp,编码279个氨基酸,与国内外猪葡萄球菌和松鼠葡萄球菌表皮脱落毒素Exh C基因的核苷酸同源性、氨基酸同源性均为100%。将Exh C基因克隆于pET-28a(+)表达载体中,经测序正确后,重组质粒转入大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定和Western blot分析。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,其分子质量大小约为32ku,与预期大小一致。Western blot分析表明,Exh C重组蛋白能与猪葡萄球菌GDZC株的阳性血清发生特异性反应,说明表达的GDZC株Exh C重组蛋白具有良好的免疫学活性。
- 张乐宜吴坚文蔡汝健李艳蒋智勇刘燕玲宋长绪
- 关键词：猪葡萄球菌C基因原核表达
- 猪葡萄球菌EXHC、SHETA基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测被引量：1
- 2014年
- 为分析猪葡萄球菌脱落毒素EXHC和SHETA基因结构并预测其所编码蛋白的结构和功能,本试验根据GenBank已报道的猪葡萄球菌脱落毒素EXHC和SHETA基因序列分别设计了1对特异性引物,从猪葡萄球菌GDZC株中扩增获得EXHC和SHETA基因片段,大小分别为1007和971bp。序列分析结果表明,EXHC基因与猪葡萄球菌丹麦分离株（GenBank登录号：AF515455）及猪源松鼠葡萄球菌河北分离株（GenBank登录号：JF755400）的核苷酸序列、氨基酸序列同源性均为100.0%,而与其他葡萄球菌脱落毒素基因的核苷酸、氨基酸序列同源性分别为3.3%~53.9%和7.9%~44.2%。SHETA基因与日本分离株（GenBank登录号：AB036768）的核苷酸序列同源性为96.2%,氨基酸序列同源性为98.4%,在保守区共有31个碱基发生突变。利用DNAStar软件对EXHC和SHETA蛋白结构进行分析,结果显示EXHC基因编码的蛋白为亲水性蛋白,SHETA基因编码蛋白为疏水性蛋白,抗原性较差。本研究从猪葡萄球菌GDZC株中成功扩增获得EXHC和SHETA基因片段并对其编码的蛋白结构进行了预测,证实了中国分离的猪葡萄球菌同时携带有EXHC和SHETA2种毒素基因,为进一步研究猪葡萄球菌的致病机理及毒素之间的相互作用提供了理论依据。
- 张乐宜李艳蔡汝健蒋智勇刘燕玲宋长绪
- 关键词：猪葡萄球菌
- 猪红斑丹毒丝菌GZ株的分离鉴定及序列分析被引量：4
- 2014年
- 2013年11月从广州某猪场发生急性败血症死亡的母猪心脏、肺脏、脾脏分离到1株病原菌，经形态学观察、培养特性、生化特性及16SrRNA、spaA基因测序，确定为猪红斑丹毒丝菌，命名为GZ株。结果表明，该菌株对阿莫西林、利福平、庆大霉素、头孢类抗生素高度敏感，对其他药物广泛耐药，对BALB／c小鼠的致死剂量为1．5×10^8cfu／mL。测序结果与NCBI收录的猪红斑丹毒丝菌进行Blast比对分析，16SrRNA基因与不同地区分离自人、蛋鸡、猪、白海雕、野猪、野兔、鼠等动物的同源性为95．9％～99．8％。spaA基因与NCBI收录的分离菌株核苷酸同源性为98．9％～99．9％，氨基酸同源性为99．5％，3处发生突变，其中，第36位缬氨酸突变为亮氨酸，第203位异亮氨酸突变为蛋氨酸，第257位亮氨酸突变为异亮氨酸；与1998年和2006年日本1a型Fujisawa株的核苷酸同源性最高，为99．8％，因此确定分离的GZ株为1a血清型。
- 张乐宜蔡汝健蒋智勇宋长绪
- 关键词：RRNA
- 猪伪狂犬病病毒双重PCR鉴别方法的建立被引量：3
- 2015年
- 根据Gen Bank已发表的猪伪狂犬病毒(PRV)的g B、g E基因序列,分别设计了2对特异性引物,建立了一种鉴别诊断猪伪狂犬病病毒野毒与疫苗毒的双重PCR检测方法。应用该方法可从野毒基因组中扩增出与预期大小相符的2条特异性条带,分别为122 bp(g E)和246 bp(g B);从疫苗株基因组中仅扩增出1条特异性条带,为246 bp(g B)。结果显示,该方法灵敏度高、特异性强,适用于PRV的临床诊断和流行病学调查。
- 李艳李段向蓉刘燕玲蒋智勇张乐宜蔡汝健李春玲
- 关键词：伪狂犬病病毒双重PCR
- 猪伪狂犬病排毒情况与gE、gB抗体之间的关系研究被引量：2
- 2018年
- 采集猪伪狂犬病野毒阳性场和阴险场各阶段猪群的血清、乳汁、唾液等样品,用ELISA检测血清gE和gB抗体水平,结果显示,阳性场gE总阳性率为56.7%,其中只有哺乳母猪和1周龄仔猪群的gE呈阴性,6~24周龄猪群gE阳性率从52.9%上升至100%,经产和后备母猪群阳性率高达90%~100%;gB总体阳性率为88.8%,母猪群和公猪阳性率达100%,从1周龄仔猪阳性率100%逐渐降至10周龄育肥猪的40%,之后又快速升高到100%。阴性场gE阴性,gB总体阳性率为38.9%,2~12周龄猪群的gB逐渐转阴,14~20周龄猪群阳性率在20%~75%之间,母猪和公猪群gB阳性率达100%。用RT-PCR检测样品中的核酸,阳性场中脐带血的阳性率最高、达到80%,之后是初乳、为33.3%,其他拭子样品带毒率较低、0.55%~6.21%不等,阴性场样品均未扩增出gE基因片段。研究结果说明,阳性场与阴性场相比,PRV带毒、排毒途径多样,以母猪垂直传播为主,PRV排毒不仅与gE抗体存在相关性,还对母源抗体和免疫抗体产生干扰,表现在母源抗体和免疫消退期gE和gB抗体异常升高。
- 李段王磊梁鹏帅张乐宜刘燕玲徐峥宋长绪
- 关键词：PRV排毒
- 广东省猪圆环病毒2型毒株分离及全基因序列分析被引量：6
- 2014年
- 为了解广东省猪圆环病毒2型（PCV2）的流行、变异及进化情况,对2013年广东省多个猪场发生PCV2感染的病猪血清进行PCV2病毒分离,参考GanBank上已发表的PCV2全基因序列,设计3对引物,用PCR方法扩增其全基因序列,测序并进行序列分析.结果分离到9株PCV2毒株,全基因序列长度都为1 767 bp.同源性分析表明,9株PCV2分离株核苷酸同源性为93.6％～99.4％,与2012年分离株同源性为94.5％～99.7％,与2011年分离株同源性为94.2％～99.7％,与GenBank中其他PCV2分离株的同源性为93.2％～99.7％.9株PCV2的ORF2核苷酸及其推导的氨基酸序列同源性分别为89.0％～99.9％和86.4％～ 100％,存在一定的变异.基因型分析表明,有5株属于PCV2d,3株属于PCV2b,1株属于PCV2a.对2011-2013年分离的PCV2基因组特征进行分析,发现PCV2核苷酸序列比较稳定,与世界其他分离株也具有较高的同源性.
- 孟张丽梁鹏帅夏平安刘燕玲李艳蒋智勇蔡汝健宋长绪
- 关键词：猪圆环病毒2型全基因序列
