广东省医学科学技术研究基金(A2006237)
- 作品数：4 被引量：12H指数：3
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- 相关机构：中山大学附属第二医院中山大学广东药科大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
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- 阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡对端粒酶及端粒结合蛋白的影响被引量：4
- 2006年
- 目的探讨端粒酶和端粒结合蛋白(TRF)在细胞凋亡过程中的作用机制。方法甲基噻唑四唑法(MTT)检测阿霉素对舌鳞癌Tca8113细胞的抑制作用。通过姬姆萨染色和流式细胞仪观察和检测5mg/L阿霉素诱导凋亡情况;利用酶联免疫吸附实验分析端粒酶活性;采用免疫组化和免疫荧光标记法观察和检测TRF表达及其水平。结果5mg/L阿霉素处理Tca8113细胞5d和7d后,出现明显凋亡;端粒酶活性降低呈时间依赖性;TRF在细胞核内表达,其表达水平无统计学意义(P>0.05)。结论阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡可降低端粒酶活性,但不改变TRF表达水平。
- 胡晓文黄洪章谢谦
- 关键词：阿霉素舌肿瘤端粒酶
- 阿霉素诱导鸟嘌呤-四链体形成对Tca8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应的影响被引量：4
- 2007年
- 目的探讨阿霉素诱导端粒重复序列核苷酸形成G4及其抑制Tca8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应的功能作用。方法通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移实验来分析不同质量浓度的阿霉素对d(TTAGGG)3、d(TTAGGG)4和d(TTAGGG)5迁移速度的影响以及对d(TTAGGG)4、d(TTAGAG)4、d(TTAGGG)5和d(TTAGGGT)电泳的影响;用二甲基硫酸盐(DMS)甲基化保护实验分析d(TTAGGG)4和d(TTAGAG)4中G的甲基化作用;利用经典端粒重复序列扩增法(TRAP)和改良TRAP-G4检测法分析阿霉素抑制Tca8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应的特点。结果质量浓度为5.00μg/mL阿霉素可使部分线性d(TTAGGG)4和d(TTAGGG)5转变成有二级结构的复合物,呈现为新的高速迁移条带。质量浓度为1.25μg/mL阿霉素可保护端粒重复序列中G免遭甲基化作用。质量浓度为2.50、1.25μg/mL阿霉素在TRAP检测中可部分抑制端粒延伸反应,而在TRAP-G4检测中可完全抑制端粒延伸反应。结论阿霉素可通过诱导端粒重复序列形成分子内G4结构抑制端粒酶介导的端粒延伸反应。
- 胡晓文黄洪章余东升
- 关键词：阿霉素TEA8113细胞
- 阿霉素诱导鸟嘌呤-四联体形成对Tca8113细胞端粒酶及细胞周期的影响
- 2008年
- 目的:探讨阿霉素影响端粒酶活性、端粒酶mRNA表达、细胞周期及周期蛋白表达的分子作用机制。方法:采用端粒重复序列扩增法(TRAP)、改良TRAP-G4法和RT-PCR法检测Tca8113细胞端粒酶活性变化、端粒酶hTERT和TP1mRNA水平;流式细胞仪分析细胞周期;采用Western印迹法测定CyclinB1和CyclinA表达水平。采用SPSS10.0软件包对数据进行t检验。结果:所有实验浓度阿霉素均可降低Tca8113细胞端粒酶活性,当端粒酶作用底物变为5′-(GGGATT)3GGGTT-3′时,端粒延伸反应完全受到抑制;5μg/ml阿霉素作用24h后,hTERT和TP1mRNA表达降低,CyclinB1表达明显增强,G2/M期细胞百分率显著下降。结论:阿霉素抑制端粒酶活性、降低端粒酶表达、影响细胞周期及CyclinB1表达的作用机制与其诱导鸟嘌呤-四联体形成有关。
- 胡晓文黄洪章余东升
- 关键词：阿霉素TCA8113细胞端粒酶细胞周期
- 阿霉素对Tca8113细胞端粒酶活性及端粒结合蛋白表达的影响被引量：4
- 2008年
- 目的观察阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡对端粒酶活性及端粒结合蛋白(TRF)表达的影响;探讨端粒酶和TRF在细胞凋亡途径中的作用机制。方法通过Tca8113细胞MTT实验,确定后续实验中阿霉素作用浓度。将Tca8113培养细胞分成用药组和对照组,培养5d和7d后,利用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用Giemsa染色进行凋亡形态学观察;通过端粒酶酶联免疫吸附实验对端粒酶活性进行定性和定量分析;利用免疫组化和免疫荧光标记法分别检测TRF表达和表达水平。结果5μg/ml阿霉素作为后续研究的作用浓度。在5μg/ml阿霉素作用5d和7d后,用药组细胞凋亡率分别为(36.4±1.7)%和(54.2±2.1)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);Giemsa染色显示用药组出现明显凋亡细胞;TRAP检测结果表明,用药组端粒酶活性降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);端粒酶活性随阿霉素作用时间延长而降低(P<0.05);用药组与对照组细胞均有TRF表达,在细胞核内呈均匀蓝染状态,而在诱导凋亡细胞核和凋亡小体内呈点状弥散分布,但两组间TRF表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡使其细胞内端粒酶活性受抑制,TRF表达特点发生改变,但未改变TRF表达水平。
- 胡晓文黄洪章谢谦
- 关键词：阿霉素TCA8113细胞端粒酶端粒结合蛋白
