国家自然科学基金(39800156)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：第四军医大学西京医院更多>>
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- 鼠源性血管抑素基因转染对人肝癌细胞体内致瘤力的影响及新血管抑制作用被引量：2
- 2001年
- 目的 研究血管抑素血管他丁 (angiostatin)基因转染人肝癌细胞系HCC772 1,对肿瘤细胞体外生长、周期分布、形态以及体内致瘤力的影响 ,探讨血管抑素的作用机制。方法 应用定向克隆技术构建鼠源性血管抑素血cDNA基因真核表达载体 pcDNA3 .1( + ) angio ,酶切鉴定和测序。采用脂质体基因转染技术将真核表达载体导入人肝癌细胞系HCC772 1,新霉素G4 18筛选抗性克隆 ,设置转染空载体细胞为阴性对照和未转染细胞为空白对照。通过RNA点杂交和流式细胞荧光免疫检测血管抑素的表达 ,测定细胞生长曲线 ,计算细胞倍增时间 ,流式细胞仪检测细胞周期分布。建立动物模型 ,观察转染前后肿瘤细胞致瘤力的改变。免疫组化检测肿瘤组织微血管密度 (MVD)和血管抑素体内表达。结果 成功构建带有碱基序列正确的血管抑素基因片段的重组真核表达载体 pcDNA3 .1( + ) angio。分别转染脂质体 /pcDNA3 .1( + ) angio和脂质体 /pcDNA3 .1( + )的实验组 ,HCC772 1肝癌细胞和阴性对照组经G4 18筛选 ,3 0d后均得到稳定的抗性细胞克隆 ,空白对照组在筛选 1周后全部死亡。实验组HCC772 1细胞在体内和体外均表达目的蛋白 ,而对照组细胞中无表达。与对照组相比 ,虽然实验组细胞在体外的生长速度和细胞周期分布未发生明显改变 ,但在体?
- 吴静张德新杨静华樊代明
- 关键词：血管生成血管抑素基因转染肝癌细胞肿瘤抑制
