兵团博士基金(2009JC05) 作品数:6 被引量:16 H指数:3 相关作者: 皮文辉 石国庆 张云生 梁龙 刘守仁 更多>> 相关机构: 石河子大学 新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室 新疆农垦科学院 更多>> 发文基金: 兵团博士基金 国家自然科学基金 国家留学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
不同荧光染料对绵羊FecB基因HRM分型效果影响的实验研究 被引量:4 2014年 高分辨率熔解曲线(HRM)是基于新型饱和荧光染料的基因分型技术,本实验旨在研究荧光染料类型、添加量以及添加方式对HRM分型效果的影响。实验分析了3种荧光染料(LC Green、JJ Green、SYBR Green I)、不同荧光染料浓度、染料添加方式对HRM分型差异的比较。结果表明:3个染料中LC Green效果最佳,JJ Green次之,而SYBR Green I不及前两种;染料添加量会对HRM分型产生较大的影响,染料添加量为0.8μL时为最优反应量;而染料添加方式对分析结果没有影响。 蒋立斌 张云生 杨华 杨永林 皮文辉 石国庆 冯训勇关键词:HRM FECB 绵羊 绵羊FecB基因非探针法HRM分型技术条件优化研究 被引量:3 2014年 本文通过对影响高分辨率熔解曲线(HRM)的因素分析,旨在建立适合绵羊FecB基因分型的最优反应体系。试验分别对扩增子长度、引物量、Mg2+浓度和模板量等因素进行研究。结果表明,不同因素都会对HRM分析结果有影响,绵羊FecB基因非探针法HRM分型的最优反应条件为:引物添加量0.6μL,Mg2+浓度2.4 mmol/L^3.2 mmol/L,模板量50 ng,以及扩增产物为115 bp。 蒋立斌 张云生 杨华 杨永林 皮文辉 田占伟 石国庆 冯训勇关键词:FECB基因 HRM 基因分型 TAL效应子应用研究进展 被引量:2 2012年 转录激活因子样效应子(transcription activator-like effectors,TALEs)是一类在植物病原黄单胞菌(plant pathogen Xanthomonas sp.)中发现的天然的DNA结合蛋白,它具有与目标DNA序列特异性结合的能力。随着研究的深入,TALEs的结构信息和特异性结合DNA序列的分子机理被破解,这就为人工设计构建TALE-DNA结构结合域提供了理论基础。人工构建的TALEs可以应用于各种各样的基因组工程,包括转录调控和基因组编辑。综述TALE的结构、TALE与DNA结合的分子密码,重点综述人工构建TALEs的应用,并对其未来的发展方向进行展望。 梁龙 皮文辉“Golden Gate”克隆法构建靶向载体 被引量:4 2013年 在同一反应体系内,利用IIS型限制性核酸内切酶和DNA连接酶进行"Golden Gate"克隆方法,将多个目的基因片段按照设定的顺序连接,实现多基因片段一步"无缝"连接。为编辑小鼠β酪蛋白基因位点,利用"Golden Gate"克隆法,构建了小鼠β酪蛋白基因位点同源重组靶向载体。 梁龙 杨华 杨永林 刘守仁 皮文辉关键词:DNA重组 GOLDEN 克隆法 利用TALE-TFs在小鼠成纤维细胞中激活β-酪蛋白基因启动子表达载体 2014年 目的利用TALE-TFs,在小鼠成纤维细胞中激活β-酪蛋白基因启动子,为检测β-酪蛋白基因启动子—目的基因表达框的表达结果,提供一种检测途径。方法将构建的TALE-TFs和β-酪蛋白基因启动子—Red报告基因质粒电转染进入小鼠成纤维细胞,通过荧光显微镜直接观察报告基因表达情况。结果与结论利用TALE人工转录因子,在小鼠成纤维细胞中能够激活β-酪蛋白基因启动子表达框,为替代乳腺上皮细胞表达验证系统提供了新的途径。 皮文辉 梁龙 唐红 张译元 郭延华 王立民 向春和 周平 刘守仁关键词:小鼠成纤维细胞 电转液L对绵羊成纤维细胞电转染条件优化 被引量:3 2015年 【目的】采用实验室配制的电转液L,优化绵羊成纤维细胞的转染效率。【方法】利用Lonza 4D—Nucleofector设备,针对实验室配制的电转液L,将P max绿色荧光蛋白表达质粒导入绵羊成纤维细胞中,通过流式细胞仪测定和荧光显微镜观测细胞转染效率。【结果】通过测定细胞转染效率,得到较佳电转方案:L电转液100μL悬浮绵羊成纤维细胞,采用CZ-167电转程序,质粒浓度4 g,2×106个细胞,电击一次,电转后37℃放置10 min可获得理想的转染效率。 李炜杰 杨娇 王聪慧 罗健 周平 黄威 姚建龙 何高明 皮文辉关键词:细胞转染 转染效率