国家高技术研究发展计划(2006AA02Z4FO) 作品数:9 被引量:58 H指数:5 相关作者: 王志刚 许川山 任建丽 李兴升 李攀 更多>> 相关机构: 重庆医科大学附属第二医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 重庆市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
载10-羟基喜树碱脂质超声微泡的处方制备及一般特性研究 被引量:6 2009年 目的研究载10-羟基喜树碱(HCPT)脂质超声微泡的处方制备工艺,筛选出最佳处方制备载药微泡,研究微泡的一般特性及显影效果,并检测微泡的药物包封率和载药量。方法以机械振荡法制备载HCPT脂质超声微泡;采用正交试验优选处方;采用紫外分光光度法和反相高效液相色谱法测定微泡的包封率和载药量;在光学显微镜下计数并观察微泡的外观和分布情况;以马尔文激光粒径测量仪测量微泡粒径大小和Zeta电位;观察并比较微泡经^(60)Co射线灭菌前后其外观、形态、平均粒径和包封率的改变;并观察微泡在兔肝脏的增强显影效果。结果以最佳处方制备的载10-羟基喜树碱(2mg)微泡的药物包封率为86.70%,载药量为21.70%;浓度为(3.07±0.58)×109/ml,粒径范围为(1.10±0.20)μm,平均粒径为1.10μm;Zeta电位为-(3.90±0.80)mV;超声定向辐照微泡后,药物吸光度值明显增加;经^(60)Co射线灭菌后观察微泡形态、平均粒径及包封率无明显变化;静脉注射此载药微泡后,兔肝脏超声显影持续增强。结论采用机械振荡法制备的载HCPT脂质微泡,包封率和载药量较高,粒径分布均匀,体内显影效果好,有望实现实时监控下的体内定点靶向给药,为进一步研究奠定了基础。 严思静 李攀 袁佩 许川山 王志刚关键词:超声 造影剂 10-羟基喜树碱 穿膜肽TAT的固相合成及体外活性研究 被引量:3 2008年 目的以固相合成法合成穿膜肽TAT,并对合成产物进行活性评价。方法采用Nа-芴甲氧羰基(fluorenyl-methyloxyloxycarbonyl,FMOC)作为α-氨基的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成穿膜肽TAT。应用高效液相色谱和质谱仪测定其纯度及相对分子质量;荧光显微镜观察穿膜肽TAT介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,pEGFP)质粒在体外培养人脐静脉内皮细胞中的转染效果以评价穿膜肽TAT的生物活性;MTT法检测穿膜肽TAT与质粒DNA复合物对人脐静脉内皮细胞生长活性的影响。结果高效液相色谱和质谱鉴定所制备穿膜肽TAT的纯度为96.6%,相对分子质量1880。它能够携带质粒DNA穿过细胞膜进行基因转染,并对细胞活性无明显影响。结论采用Fmoc固相肽合成法可以成功地合成有生物活性的穿膜肽TAT。 任建丽 王志刚 张勇 李兴升 汪朝霞 张群霞 许川山关键词:固相多肽合成 活性研究 超声微泡造影剂在心血管疾病基因治疗中的应用 被引量:6 2007年 基因治疗心血管疾病成为研究的热点及方向,但由于担心病毒载体的安全性以及非病毒载体的低效性,基因治疗的发展缓慢。而超声微泡造影剂可作为一种新型的基因转染载体,为目前处于困境中的基因治疗带来了新的曙光,本文就超声微泡造影剂在心血管疾病基因治疗中的应用作一综述。 任建丽 王志刚关键词:超声微泡造影剂 心血管疾病 基因治疗 载药脂质超声微泡造影剂的制备及应用研究 被引量:27 2008年 载药脂质微泡是近年来国内外研究的热点之一,目前已制备出微米级及纳米级载药脂质微泡,本文就载药脂质超声微泡造影剂的特点、制备、应用、现存的问题及发展前景做一综述。 刘学兵 王志刚 许川山关键词:超声微泡造影剂 脂质 超声声学造影剂介导肝细胞生长因子基因转染的体外实验 被引量:5 2009年 目的研究超声声学造影剂促进肝细胞生长因子(HGF)基因在大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)中的转染效果。方法将HSC-T6接种在24孔板中,随机分为5组:①空白对照组(C);②单纯质粒组(P);③载基因超声声学造影剂组(M);④质粒+超声组(P+U);⑤载基因超声声学造影剂+超声组(M+U)。荧光显微镜及流式细胞仪检测pIRES2-EGFP/HGF在细胞内的表达及转染效率;MTT法检测该方法对HSC-T6生长活性的影响;Western Blotting检测HGF蛋白的表达。结果M+U组的绿色荧光强度及转染率均高于其他各组,并对细胞活性无明显影响,且HGF蛋白的表达均高于其他各组(P<0.05)。结论超声声学造影剂可提高基因在体外培养HSC-T6的转染效率,并对细胞活性无明显影响,为提高非病毒载体的转染效率提供一个新策略。 汪朝霞 王志刚 朱叶锋 李巧 康娟关键词:造影剂 基因转染 超声检查 脉冲超声辐照微泡增强脂质体介导基因转染的体外实验研究 被引量:1 2008年 目的探讨脉冲超声辐照微泡超声造影剂提高脂质体介导增强型绿色荧光蛋白质粒在肝癌细胞(HepG2)中转染率的可行性。方法将HepG2接种在24孔板中,随机分为以下6组:①空白对照组;②质粒+脂质体组;③超声+质粒组;④超声+质粒+微泡组;⑤超声+质粒+脂质体组;⑥超声+质粒+脂质体+微泡组。荧光显微镜及流式细胞仪检测增强型绿色荧光蛋白表达及转染效率;MTT法检测此转染方法对HepG2生长活性的影响。结果超声+质粒+脂质体组的转染效率最高,并对细胞活性无明显影响;而超声+质粒+脂质体+微泡组转染效率与超声+质粒+脂质体组比较差异无统计学意义(P〉0.05),但细胞活性与空白组比较差异有统计学意义(P〈0.05)。结论脉冲超声辐照可介导基因转染,并能提高脂质体基因转染效率。同时,在一定条件下,超声微泡造影剂可提高超声介导基因转染效率,此方法可为基因转染提供新的思路。 汪朝霞 王志刚 许川山 任建丽 李兴升关键词:微气泡 脂质体 基因转移技术