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天津市应用基础与前沿技术研究计划(07JCZDJC07700)
作品数:
2
被引量:2
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张靖
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2009
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靶向性蛋白激酶B1和环氧合酶-2shRNA腺病毒载体的构建和在人胃癌细胞的表达
被引量:2
2009年
目的构建靶向性蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)和环氧合酶-2(COX-2)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,观察其在人胃癌细胞株SGC-7901中的表达。方法利用同源重组技术构建重组腺病毒载体pGSadeno—Akt1+COX-2(pGSadeno—A+C),经酶切及测序鉴定后转染人胚肾细胞HEK293包装成为重组rAd5-A+C腺病毒,并测定病毒的滴度。体外转染人胃癌细胞株SGC-7901后,Real—timePCR和蛋白印迹分别检测Akt1和COX-2mRNA和蛋白质的表达。结果成功构建rAd5.A+C重组腺病毒,测定包装的病毒滴度为1.0×10^10pfu/ml。转染组Akt1和COX-2mRNA表达明显下调,其ACt值分别是(12.26±0.05)和(5.41±0.09),比rAd5-HK空载组(10.63±0.02)、(3.75±0.08)和对照组(10.57-1-0.02)、(3.73±0.08)增高(P〈0.01),而空载组和对照组比较ACt值无明显变化(P〉0.05)。同样转染组Akt1和COX-2蛋白表达量与空载组和对照组比较分别下调70.5%和63.7%(P〈0.01),空载组和对照组比较Akt1和COX-2蛋白表达差异无统计学意义(P〉0.05)。结论靶向性Akt1和COX-2的shRNA腺病毒载体可以特异性抑制Akt1和COX-2的表达,可能成为胃癌靶向性Akt1和COX-2基因治疗的新策略。
张靖
付彦超
康春生
张庆瑜
关键词:
胃癌
环氧合酶2
短发夹RNA
腺病毒载体
靶向蛋白激酶B1和环氧合酶2短发夹RNA对胃腺癌细胞生长的作用
2009年
目的研究靶向蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)和环氧合酶2(COX-2)短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体对SGC-7901人胃腺癌细胞生长的作用。方法构建腺病毒载体pGSadeno—Akt1+COX-2(rAd5-A+C),体外转染人胃癌细胞株SGC-790/后,噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞术评价转染后胃癌细胞的增殖活性。裸鼠皮下荷瘤模型进--步观察,Ad5-A+C对SGC-7901生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术检测肿瘤细胞的原位凋亡。结果构建的rAd5-A+C重组腺病毒载体转染SGC-7901后,胃癌细胞的增殖活性明显被抑制。细胞周期分析显示对照组和空载组在G0/G1期,S期和G2/M期的细胞数占细胞总数分别为49.8%、35.2%、15.0%和50.8%、36.5%、12.7%;而治疗组在G0/G1期、S期和G2/M期的细胞数占细胞总数的68.1%、21.8%和10.1%。裸鼠皮下荷瘤模型显示rAd5-A+C可抑制肿瘤的生长和诱导细胞的凋亡。结论腺病毒介导的Akt1和COX-2shRNA可抑制人胃癌细胞的生长,这可能为胃癌靶向性联合基因治疗提供了新的策略。
张靖
付彦超
康春生
张庆瑜
王涛
张洁
关键词:
蛋白激酶类
环氧化酶2
腺病毒载体
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