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登革2型病毒E蛋白基因的酵母表达: 2017年; 为研究登革病毒与蚊虫相互作用的分子机制,本研究对DENV-2的E蛋白基因进行了毕赤酵母分泌表达。首先,经RT-PCR方法克隆DENV-2的E蛋白基因,将克隆的基因与表达载体pPICZaB连接以构建表达重组子;并经酶切、PCR、测序筛选实验鉴定正确重组子。然后,重组子经氯化锂法转化毕赤酵母菌KM71H获得转化子;经抗生素、表型鉴定、PCR筛选得到Muts型的多拷贝转化子。最后,经甲醇诱导基因表达,Western-blotting方法鉴定蛋白表达情况及最佳表达时间。本研究对DENV-2的E蛋白成功进行了分泌表达,并且确定其表达最佳发酵时间为96 h;为进一步研究登革病毒与蚊虫相互作用的分子机制奠定了基础。; 刘美德刘美德冀霞杨正国罗森赵瑞君赵瑞君; 关键词：登革2型病毒 E蛋白分泌表达毕赤酵母

白纹伊蚊T7噬茵体展示cDNA文库的构建: 2012年; 为筛选白纹伊蚊与相关蚊媒病毒相互作用的基因，本文构建了白纹伊蚊Aedes albopictusT7噬菌体展示eDNA文库，分离与纯化白纹伊蚊mRNA，所得mRNA经反转录合成双链cDNA后，在双链cDNA末端加上定向EcoRI／HindIn接头使其两端分别带EcoRI和Hind11I黏性末端；接着用MiniColumn纯化收集300bp以上的双链cDNA片段连接于T7 Select 10—3b载体；经体外包装后，以BLT5403为受体菌构建1v7噬菌体展示cDNA文库。所建文库的库容量经测定为1．7×10’pfu／mL，扩增后文库滴度为2．5×10^（15）pfu／mL。对从原始文库中随机挑取的50个噬菌斑进行PCR鉴定，重组率为95％以上；阳性克隆片段长度分布在200～2000bp，其中有90％的插入片段大于300bp。本文所构建的白纹伊蚊T7噬菌体展示cDNA文库，满足cDNA文库的基本要求，可以用于筛选白纹伊蚊与相关蚊病毒相互作用的基因。; 冀霞赵瑞君刘美德赵彤言; 关键词：白纹伊蚊

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国家自然科学基金(30800958)