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绵羊体细胞核移植去核前程序的优化被引量：2: 2017年; 目前绵羊体细胞克隆效率仍然很低,本研究拟对去核前的操作环节进行优化。主要为卵巢保存时间(3 h和3–5 h)、卵母细胞体外成熟时间(18 h和24 h)、供核细胞贴壁率(10%和30%)和盲吸法去核时间(16 hpm和18 hpm)等4个方面优化。以成熟率、融合率和重构胚胎发育能力作为评价参数。结果表明:在卵巢保存方面,卵巢保存3 h组卵母细胞成熟率显著高于3–5 h组卵母细胞成熟率(60.18%vs 52.50%)(P<0.05),重构胚胎发育力差异不显著(P>0.05);在体外成熟时间方面,体外成熟18 h组和24 h组卵母细胞成熟率差异极显著(53.81%vs 89.06%)(P<0.01),胚胎发育力差异不显著(P>0.05);在融合率方面,贴壁率30%组极显著高于贴壁率10%组(80.85%vs 57.69%)(P<0.01),在克隆胚胎发育率方面没有显著差异(P>0.05),具有贴比率差异性的细胞在细胞生长平台期表现出差异性;在去核时间方面,16 hpm组和18 hpm组胚胎卵裂率差异显著,囊胚发育力差异不显著(P>0.05),16 hpm组获得一只克隆羊,重复16 hpm获得4只妊娠克隆羊。组织微卫星序列经SDS-PAGE分析,DNA指纹与供体细胞相同。结论:去核前程序的优化保证了材料的质量,为提高克隆胚胎数量和质量奠定基础,可以获得体细胞克隆羊。; 郭延华张译元王立民唐红李迎利周平; 关键词：核移植克隆羊

8-细胞期显微注射获得高嵌合率的2n及4n小鼠囊胚: 2013年; 本实验通过对8-细胞期2n或4n胚胎进行单细胞显微注射单个IPS,结果可以获得高嵌合率的胚胎,2n和4n胚胎的嵌合率分别达到86.0%±8.4%和70.4%±18.1%,相比囊胚注射更易操作,此实验为进一步制备高嵌合率的小鼠做准备.; 王伟张波吴坤曹更生; 关键词：显微注射

一氧化氮对植物生长和抗逆的调节及其与脱落酸的相互关系被引量：4: 2013年; 保卫细胞可整合多种复杂的环境信号并通过气孔的开闭调节以适应环境变化.研究已证明一氧化氮(NO)作为信号分子介导脱落酸(ABA)诱导的气孔关闭和ABA抑制的气孔开放.讨论了植物中NO的产生及其信号作用,NO诱导的基因表达以及其与植物抗逆之间的可能作用机制;关注保卫细胞中NO与ABA信号级联的节点.对于保卫细胞中NO与ABA信号作用的研究将为通过提高植物水分利用效率而增强植物的抗旱性的生物技术提供理论基础.; 王伟韩栓王琳丹; 关键词：一氧化氮气孔运动水分胁迫

高校实验室技术人员素质教育刍议被引量：28: 2014年; 高校实验室是教学和科学研究的一个重要场所,是高校持续培养创新人才的基地,对大学开展实验教学和科研工作起着支柱性的作用。高校的发展建设,需要高水平、高素质且人员结构相对稳定的教学科研队伍,实验技术人员作为为学术支撑与技术服务的队伍,是不可或缺的力量。在现代化的高校实验室,实验技术人员不仅应具备良好的思想品德素质,还要具备科学理论素质和过硬的实验业务能力以及相应管理水平,这样才能更好地配合实验教学,培养出高质量人才。为满足实验教学和科学研究日益增长的需要,实验室技术人员应当不断地提高他们在职业道德、理论知识、专业技能和实验室管理方面的综合素质,从而更好地保证实验室工作顺利有序的进行。; 王伟张红岩韩拴赵翔曹更生郑合勋; 关键词：实验室素质教育

绒山羊细菌人工染色体重组及细胞转染系统: 2016年; 绒山羊(Cashmere goat)是一类以生产山羊绒为主的山羊品种,因其绒毛纤细有光泽、轻盈、保暖而备受青睐。绒山羊角蛋白关联蛋白(Keratin associated protein,KAP)和骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP)在羊绒纤维毛囊细胞的增殖和分化过程中起重要作用。为了提高山羊绒的产量和品质,对包含kap6.3,kap8.1和bmp4基因的细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC)进行研究。首先采用同源重组的方法对BAC进行修饰,其次将哺乳动物密码子优化过的Tol2转座子加入BAC中,最后采用Amaxa Nucleofector核转染技术将修饰过的BAC转入绒山羊成纤维细胞。结果表明成功构建了含有目的基因的BAC-Tol2载体。载体上包含UBC启动元件的egfp标记基因和真核筛选抗性neo基因,并且载体的两端加有loxp元件,为转染细胞后标记和抗性基因的去除作准备。载体转染细胞效率达到1%-6%,最高可达10%。成功获得了外源整合kap6.3、kap8.1和bmp4基因的细胞株,为以后克隆绒山羊作准备。研究表明,在BAC的修饰中应用Tol2转座子系统增加了电转染后的整合率,提高了BAC无错重组的效率和精确性。; 黄甜曹忠洋杨耀辉曹更生; 关键词：绒山羊电转染

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国家自然科学基金(31271597)