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问号钩端螺旋体GGDEF和EAL/HD-GYP结构域蛋白生物信息学分析被引量：1: 2016年; 目的分析问号钩端螺旋体(钩体)环二鸟苷酸(Cyclic dimeric-GMP,c-di-GMP)调节相关的GGDEF和EAL/HD-GYP结构域蛋白生物信息学结果,为后续的功能研究奠定基础。方法 PSI-BLAST方法分析编码GGDEF和EAL/HDGYP结构域蛋白的基因;利用相应生物信息学软件对蛋白信号肽序列、跨膜序列、蛋白结构、同源性进行分析并构建目的蛋白进化树。结果问号钩体中22个蛋白分别含有GGDEF或EAL/HD-GYP结构域,多数蛋白均有感受器结构域和跨膜区。7个具有PAS输入感受器的GGDEF结构域蛋白进化较为独立,位于单独的一个分支,其余6个GGDEF结构域蛋白则分散在不同的分支上。4个EAL结构域蛋白和2个HD-GYP结构域蛋白进化上也较为独立,分别处于同一进化分支。3个GGDEF和EAL结构域耦合的蛋白在进化关系上更趋向于PDE活性蛋白。结论钩体具有多拷贝的合成和降解c-di-GMP相关蛋白编码基因,表明在钩体中c-di-GMP网络具有高度复杂性,同时反映出钩体对环境条件的改变具有复杂的应对机制。; 丁士标肖国辉孔亮亮严杰林旭瑷; 关键词：问号钩端螺旋体鸟苷酸环化酶

细菌HD-GYP结构域蛋白研究进展: 2017年; 环二鸟苷酸（cyclic diguanylate，c-di-GMP）是广泛存在于细菌中的第二信使分子，参与调节细菌的运动、黏附、毒力及生物膜形成等多种生理活动。c-di-GMP在胞内的代谢主要由含有GGDEF结构域的二鸟苷环化酶（diguanylate cyclase，DGC）和含有EAL或HD-GYP结构域的磷酸二酯酶（phosphodiesterase，PDE）调控。其中HD-GYP结构域蛋白是最近几年新发现的参与调控c-di-GMP的磷酸二酯酶，本文从HD-GYP结构域蛋白的结构、作用特点和生物学功能等方面进行综述。; 孔亮亮严杰林旭瑷; 关键词：磷酸二酯酶

问号钩端螺旋体磷脂酶C鉴定及其诱导巨噬细胞凋亡机制: 2013年; 目的：确定问号钩端螺旋体（简称钩体） LB361基因产物磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C （ phosphatidylinositol phospholipase C ，L-PI-PLC）功能及其诱导巨噬细胞凋亡的作用与机制。方法采用生物信息学技术分析问号钩体赖型赖株LB361基因序列中PI-PLC结构功能域。采用原核表达系统表达该基因产物（ rL-PI-PLC）。采用IP3荧光偏振试验了解rL-PI-PLC水解PIP2底物产生IP3的活性。采用实时荧光定量RT-PCR及Western blot法分别检测问号钩体赖株感染人THP-1巨噬细胞时LB361基因转录、表达及分泌情况。构建LB361基因转染THP-1细胞株，分别采用激光共聚焦显微镜法和流式细胞术，检测LB361基因产物THP-1通过IP3引起内质网钙释放，从而导致细胞胞内游离钙离子浓度（[ Ca2＋] i）升高并诱导细胞凋亡的作用。结果 rL-PI-PLC能水解PIP2产生IP3，其Km和Kcat值分别为199μmol/L和8．566×10-5 S-1。问号钩体赖株感染THP-1细胞后，LB361-mRNA及L-PI-PLC蛋白表达水平显著升高并外分泌。与未转染正常细胞比较，LB361基因转染THP -1细胞中IP3浓度及[ Ca2＋] i明显升高，从而引起部分 THP-1细胞发生[ Ca2＋] i 依赖性凋亡。结论问号钩体LB361基因产物是磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C，该酶在问号钩体感染巨噬细胞过程中可引起[ Ca2＋] i升高而导致细胞凋亡。; 张金良赵金方楼宏强林旭瑷严杰孙爱华; 关键词：问号钩端螺旋体巨噬细胞

问号钩端螺旋体MazF蛋白对巨噬细胞的毒性作用分析被引量：1: 2013年; 目的了解问号钩端螺旋体（简称钩体）MazEF毒素-抗毒素系统中MazF蛋白对巨噬细胞的细胞毒性及其机制。方法采用原核表达系统表达问号钩体赖型赖株MazEF毒素-抗毒素系统中的MazE和MazF蛋白（rMazE和rMazF）。采用DNA和RNA降解试验确定rMazF的DNA或RNA酶活性以及rMazE抑制rMazF酶活性的作用。采用实时荧光定量RT-PCT、Westernblot和激光共聚焦显微镜法，分别检测问号钩体赖株感染THP-1单核细胞时mazE和mazF基因转录、表达及分泌情况。采用CCK-8法和流式细胞术检测mazF基因产物对THP-1细胞的细胞毒性及死亡方式。结果rMazF能水解问号钩体赖株和THP-1细胞的RNA，但无DNA酶活性，rMazE能抑制rMazF的RNA酶活性。感染THP-1细胞后，mazE-mRNA和mazF-mRNA及MazE和MazF蛋白表达水平显著升高，但仅有MazF蛋白外分泌。mazF基因产物对THP-1细胞有细胞毒性并引起细胞坏死。结论MazEF毒素-抗毒素系统中具有RNA酶活性的MazF蛋白是问号钩体的毒力因子，可引起感染的巨噬细胞坏死。; 张金良Komi-Koukoura Komi楼宏强林旭瑷严杰孙爱华; 关键词：问号钩端螺旋体毒素-抗毒素系统细胞毒性

c-di-GMP通过趋化调节蛋白CheB／CheR调控钩端螺旋体运动被引量：1: 2017年; 目的问号钩端螺旋体（简称钩体）是引起钩体病的重要病原体，人类通过带菌动物尿液污染的疫水或疫土而感染，趋化和运动系统在钩体感染过程中发挥重要作用。钩体基因组序列分析表明其中有数个趋化调节蛋白CheB和CheR的编码基因，但其具体的调控机制未知。方法Real-timePCR检测了钩体基因组中5个基因在钩体感染宿主细胞过程中mRNA的水平变化：T-A克隆了CheB和CheR的编码基因片段并构建了原核表达系统；检测了c-di-GMP浓度变化对CheB和CheR表达菌株表型的影响。结果在感染细胞60min后，cheBl的mRNA水平显著提高，cheB3也有一定程度的提高，而cheB2和cheR则无明显差异；成功构建了5个基因的原核表达系统，其中重组CheBl、CheB3和CheR2蛋白使大肠杆菌运动能力明显增强；在加入二鸟苷酸环化酶抑制剂和磷酸二酯酶抑制剂后，各表达菌株形成菌落大小与对照相比无明显不同，但CheB2菌落形态与对照相比出现明显褶皱。结论CheB和CheR可影响大肠杆菌的swarming运动能力，并受胞内c．di，GMP浓度的影响。; 孔亮亮肖国辉袁富迪严杰林旭瑷; 关键词：钩端螺旋体趋化

Meta-Analysis of Polymerase Chain Reaction in the Detection of Human Leptospirosis: 2020年; Leptospirosis,a major zoonotic disease widespread in the world,would infect humans and other animals by direct contacting with the soil or water contaminated by the pathogenic leptospires.This report analyzes the accuracy of polymerase chain reaction(PCR)assay used in the detection of leptospira specific genes in humans.Seventeen published articles which included 2526 samples satisfied all inclusion standards and were applied to meta-analysis.Pooled sensitivity and specificity were 0.73(95%CI 0.70-0.76)and 0.94(95%CI 0.93-0.95),respectively.Heterogeneity was statistically significant among studies,but none of the sources for heterogeneity(disease stage,PCR type,targeted genes)could adequately interpret this finding.Meta-regression advised that real-time PCR(qPCR)targeted 16 s rRNA would be the best choice for early detection of cases during the acute stage of the disease and was accounted as a good screening tool in all stages of the disease.; MA LinaMA YaLUO BailingMA BishuYAN JieLIN Xu'ai; 关键词：META-ANALYSIS SPECIFICITY

环二鸟苷酸信号系统研究进展被引量：3: 2014年; 所有生命体都会通过信号转导感应环境改变，并反映在代谢、生理及行为适应等方面。这些调控网络非常复杂，并依赖于许多不同组分之间的相互作用来协调产生适合的生化反应，其中一个重要的成分即是第二信使分子，第二信使通过细胞表面受体感受第一信使信号并传递给细胞内大分子。在细菌中c-di-GMP是参与调控细菌主要生理功能的第二信使分子之一，是由两分子的GTP在鸟苷酸环化酶作用下形成。生物信息学分析发现编码 c-di-GMP的基因广泛分布于原核生物尤其是革兰氏染色阴性的细菌中。; 王昭圆冯兆瑾金蕾严杰林旭瑷; 关键词：鸟苷酸环化酶信号系统信使分子细胞表面受体环境改变

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国家自然科学基金(81271781)

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