国家高技术研究发展计划(2006AA02Z498)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：姚文芳薛毅珑崔忻高宇红田磊更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院首都医科大学附属北京天坛医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 转染SV40永生化基因的正常成人肝细胞药物转化功能的测定
- 2010年
- 目的了解转染SV40基因对正常成人肝细胞药物转化功能的影响。方法高效液相色谱法检测肝细胞对利多卡因的转化能力;Western blotting法检测两种肝细胞内细胞色素P450的表达。结果转染前、后肝细胞中利多卡因的浓度两者的利多卡因转化率无明显差异;两组肝细胞在蛋白电泳后都出现了54kU的蛋白条带,表明两种细胞均能表达细胞色素P450,均具有P4502E的免疫反应性。结论转染永生化基因前后的正常成人肝细胞均具有药物代谢所必需的细胞色素P450酶蛋白,仍保持了正常成人肝细胞的代谢功能。
- 崔忻姚文芳薛毅珑
- 关键词：永生化人肝细胞药物代谢转染
- 转染SV40永生化基因正常成人肝细胞的形态观察被引量：1
- 2010年
- 目的了解转染SV40基因对正常成人肝细胞形态结构及特殊染色的影响。方法采用本组构建的含SV40永生化基因的正常成人肝细胞(rSSR#69/HL-7702肝细胞),以HE染色法、糖原染色法(PAS)和葡萄糖-6-磷酸酶染色(G-6-Pase)法,在光镜下观察该细胞的形态特征,以电镜法观察该细胞的超微结构。结果:光镜下比较转染前、后的正常成人肝细胞形态无明显差异;PAS染色均可见胞浆内有粉红色的糖原颗粒,G-6-Pase染色均可见胞质内有铁黑色颗粒;电镜下比较转染前、后的正常肝细胞的超微结构亦无统计学差异。结论:转染SV40永生化基因的正常成人肝细胞的形态结构与转染前无明显差异,仍具有糖原合成及葡萄糖代谢的能力。
- 崔忻姚文芳高宇红田磊潘静坤薛毅珑
- 关键词：永生化肝细胞
- 携带SV40T/HSV-tk基因永生化正常成人肝细胞的构建
- 2011年
- 目的构建永生化正常成人肝细胞为生物型人工肝提供安全有效的人肝细胞源。方法转染包装细胞,获得逆转录病毒;将该病毒感染正常成人肝细胞HL-7702;更昔洛韦毒性实验检测转染后肝细胞内HSV-tk基因;RT-PCR法检测转染后细胞内SV40T的mRNA;Western Blot法和免疫荧光染色检测转染后细胞内SV40T基因的蛋白表达。结果更昔洛韦检测转染后的肝细胞存活良好,而转染前的肝细胞死亡。RT-PCR法显示转染后的肝细胞内存在SV40T mRNA;Western Blot法和免疫荧光染色法显示转染后肝细胞内存在SV40T蛋白。结论转染后的正常成人肝细胞中含有SV40T和HSV-tk基因,并表达相关蛋白。
- 姚文芳崔忻田磊高宇红洪权薛毅珑
- 关键词：永生化逆转录病毒自杀基因
- 转染SV40永生化基因对正常成人肝细胞生长特性的影响被引量：1
- 2010年
- 背景:生物型人工肝采用猪肝细胞或肝癌细胞作为移植物来源存在动物源性疾病和致瘤性的担心,而正常成人肝细胞也具有一定的局限性。目的:通过检测转染前、后正常成人肝细胞的活率、生长曲线和细胞周期的变化,了解转染SV40永生化基因对正常成人肝细胞生长特性的影响。方法:培养不同时间的正常人肝细胞和永生化正常成人肝细胞,采用胎盘蓝染色和AO-PI染色,于培养后1～8d采用MT染色法计数细胞活率;用MTT比色法测定细胞的A值并绘制生长曲线;采用流式细胞术检测细胞的生长周期。结果与结论:3种染色法检测显示两种细胞的活率为95%～99%,存活率无明显差异。转染前、后的两种正常成人肝细胞的生长曲线无明显差异,均在培养3～5d时呈指数型生长,但转染后正常成人肝细胞较转染前增殖略快。采用流式细胞术测得的两种肝细胞的细胞周期:转染后肝细胞S期细胞占65.64%,G0～G1期细胞占34.36%,G2期细胞占0%;转染前肝细胞S期占21.27%,G0～G1期细胞占62.64%,G2期细胞占12.09%,提示转染后肝细胞的S期细胞明显增多,增殖能力增强。转染SV40永生化基因的正常成人肝细胞较转染前细胞的增殖活力增高,存活率无明显差异,提示转染后细胞增殖能力更强。
- 崔忻姚文芳罗芸高宇红薛毅珑
- 关键词：人肝细胞永生化
