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人血清铜蓝蛋白水平变化及其意义的初步探讨被引量：3: 2006年; 目的通过测定78例糖尿病患者及36例正常人血清铜蓝蛋白(ceruloplasmin,CP)水平,探讨CP 在糖尿病发生发展中的意义。方法将受试对象分为4组,分别采用免疫终点法测定血清CP。结果糖尿病组血清CP水平显著低于正常对照组(P<0．05);糖尿病组治疗前血清CP水平较治疗后显著降低(P<0．01);1型和2型糖尿病患者血清CP水平差异无统计学意义(P>0．05);2型单纯糖尿病组与合并慢性并发症组血清CP 水平差异无统计学意义(P>0．10)。结论血清CP水平对于糖尿病患者的诊断及治疗效果的判断具有一定参考意义。; 崔晓波傅松滨; 关键词：铜蓝蛋白糖尿病血糖

人卵巢癌细胞及小鼠MTX抗性细胞中DMs大小的测定: 2006年; 目的测定肿瘤细胞及耐药性细胞中双微体(double minutes,DMs)的大小。方法应用PFGE(Pulsed field gradient gel electrophoresis)与Southern印迹杂交技术,对人卵巢癌细胞UACC-1598及氨甲蝶呤(Methotrexate,MTX)抗性的小鼠胚胎成纤维细胞中DMs的大小进行检测。结果发现UACC- 1598细胞中存在2．8Mb、2．1Mb及1．4Mb的DMs群体,提示多拷贝的扩增基因及其邻近的染色体区域经染色体断裂、易位及重排形成较大的DMs。同时,用浓度逐渐增高的MTX对小鼠胚胎成纤维细胞进行体外诱导,分离出富含DMs的不同MTX抗性程度的细胞群体。在MTX抗性细胞中检测到2．5Mb及1．4Mb的DMs群体,MTX100细胞中以1．4Mb的DMs群体为主,而MTX500细胞中以2．5Mb的DMs群体为主。结论MTX细胞中产生的扩增子结构在演化过程中趋向于寡聚化或多聚化形成较大片段的DMs。; 张钰邓新宇白静李璞傅松滨; 关键词：基因扩增双微体 PFGE

类风湿性关节炎相关基因PTPN22 C1858T在中国6个民族中的遗传多态性研究被引量：7: 2007年; 目的研究与类风湿性关节炎相关的PTPN22 C1858T在中国蒙古族、满族、达斡尔族、哈萨克族、回族和四川汉族6个民族中的遗传多态性。方法应用PCR—RFLP方法检测6个民族共539个个体中P即PTPN22 1858T等位基因频率。结果6个民族中PTPN22 1858T等位基因频率是0．0195（n=539）分布符合Hardy—Weinberg平衡；在蒙古族、满族、达斡尔族、哈萨克族、回族和四川汉族民族中PTPN22 1858T等位基因频率分别是0．0114、0．0143、0、0．0698、0．0216和0，且6个民族间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论获得了中国6个民族PTPN22 1858T等位基因频率数据，为评估中国不同人群对类风湿性关节炎的遗传易感性及流行病学研究提供了基本的数据。; 张志红张学龙陈峰白静傅松滨; 关键词：PTPN22 类风湿性关节炎基因多态性

重组P16蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及其功能研究: 2007年; 目的在原核细胞中表达P16蛋白并纯化，研究外源性P16蛋白对肿瘤细胞周期的影响。方法构建外源性P16融合蛋白的原核表达载体pQE31-p16。IPTG诱导大肠杆菌BL21菌株表达P16融合蛋白，通过亲和层析柱纯化目的蛋白，经Western-blot鉴定后，将P16蛋白转导入人肺腺癌细胞系A549中，利用免疫细胞化学方法对蛋白进行细胞内定位，同时绘制细胞生长曲线，并用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果所构建P16融合蛋白的原核表达载体pQE31-p16，可在大肠杆菌中稳定表达，通过纯化获得P16融合蛋白。利用lipofectamine^TM2000转染试剂可将P16蛋白转入A549细胞中，生长曲线与流式细胞术结果显示P16蛋白可抑制肿瘤细胞增殖。结论原核细胞表达的P16蛋白经纯化，转导进入A549细胞，可影响其生长周期，抑制A549细胞的增殖。; 江晖白静史忠诚傅松滨; 关键词：P16 融合蛋白细胞周期

小鼠H_2B-GFP真核表达载体的构建与鉴定被引量：4: 2006年; 目的构建小鼠H2B-绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体,为动态观察小鼠细胞中染色体的形态变化,从而进一步研究小鼠耐药细胞中双微体(DMs)的形成机制提供有效的分子工具。方法利用RT-PCR的方法获得小鼠H2B cDNA,以羧基端插入pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO载体上,构建H2B-GFP真核表达载体,经菌液PCR、酶切及DNA测序鉴定插入片段大小、方向及序列的正确性,提取质粒转染小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3进行鉴定。结果经菌液PCR、酶切和测序,证明小鼠H2B-GFP真核表达载体含有大小、方向及序列正确的H2B cDNA片段,转染NIH3T3后在细胞核中表达。结论成功构建了同时携带有G418筛选位点及多酶切位点的小鼠H2B-GFP真核表达载体,为其在小鼠体外培养细胞中的表达奠定了基础。; 孙文靖马琳琳韩菲菲任聪傅松滨; 关键词：绿色荧光蛋白真核表达载体小鼠

Y染色体STR位点及其在人类学研究中的应用被引量：23: 2006年; 人类Y染色体STR位点由于其独特的遗传学特点在重构父系进化历史等方面有着重要的应用价值。本文就Y染色体STR位点的特性以及它们在人类学研究中的应用作一综述。; 孙海明傅松滨; 关键词：Y染色体

EGF通过激活FAK—PI3K／AKT途径促进肺癌细胞增殖被引量：3: 2007年; 目的探讨在EGF处理下，FAK—PI3K／AKT途径促进A549细胞增殖的作用。方法应用MTr法检测细胞的增殖，使用Western印迹检测FAK397位点及AKT的磷酸化水平，并应用RNAi干涉技术探讨各途径间的关系。结果MTT法证明EGF可以通过PI3K／AKT途径促进A549细胞的增殖，Westem印迹检测显示EGF处理可以促进FAK397位点和AKT的磷酸化。FAKRNAi结果表明EGF通过磷酸化FAK激活PI3K／AKT途径。结论EGF可以通过激活FAK—PI3K／AKT途径促进A549细胞增殖。; 阿友孟祥宁刘改云傅松滨; 关键词：EGF FAK P13K AKT

肺癌细胞系A549抗失巢凋亡的研究被引量：4: 2007年; 目的研究FAK调节肺癌细胞系A549抗失巢凋亡的功能和信号通路。方法应用光镜观察，Hoechst33342染核、电镜、Western印迹、RNA干涉技术、P13K的抑制剂，对FAK调节肺癌细胞A549抗失巢凋亡的功能和信号通路进行研究。结果发现肺癌细胞系A549具有抗失巢凋亡的能力；A549细胞悬浮培养时，FAKtyr-397／861／925的活性随时间的延长逐渐增加后降低，磷酸化的P13K和AKT表现出与其一致的活性变化；通过RNA干涉实验发现干涉组比对照组细胞出现明显的凋亡现象，同时P13K／AKT的磷酸化水平下降；P13K的抑制剂组比对照组出现更多的凋亡细胞。结论FAK在肺癌细胞A549抗失巢凋亡中发挥了重要作用，其抗失巢凋亡的机制是通过激活下游P13K／AKT通路来实现的。; 刘改云孟祥宁王佳曦赵育桢王哲傅松滨; 关键词：失巢凋亡肺癌 FAK P13K/AKT

不同转移能力肺腺癌细胞系AGZY83-a和Anip973的比较蛋白质组学研究被引量：1: 2007年; 目的寻找高低转移能力肺癌细胞中潜在的蛋白标记以更好的解释肺腺癌转移机制。方法用双向电泳的方法对高低转移能力肺腺癌细胞系AGZY83-a和Anip973进行了比较蛋白质组学分析。选取差异较大的候选差异表达蛋白进行基质辅助激光解析／电离飞行时间质谱仪（MALDI—TOF—MS）分析并鉴定。结果双向电泳胶图分析结果说明两细胞系的蛋白表达差异具有统计学意义。MALDI—TOF—MS鉴定证实这3个蛋白分别为Stathmin 1蛋白、磷酸甘油酸变位酶1（PGAM1）和热休克蛋白27（HSP27）。结论在高转移细胞系Anip973中，HSP表达显著升高，Stathmin 1和HSP27表达显著下降，这3种蛋白与肿瘤的发生和恶性程度密切相关。; 王帅郭昌龙原伟光王哲白静傅松滨; 关键词：肺腺癌蛋白质组学 2-DE

亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性及其与疾病的关系被引量：10: 2007年; 亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）在叶酸和同型半胱氨酸代谢、DNA甲基化和DNA合成等方面起重要作用。MTHFR基因突变造成酶活性和耐热性降低，导致高半胱氨酸血症和DNA结构异常，从而影响多种疾病的发生。现已发现MTHFR基因多态性与心脑血管疾病、出生缺陷和一些肿瘤等多种疾病存在相关性。; 毛仁芳范义辉白静傅松滨; 关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性疾病

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国家教育部博士点基金(20040226001)

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