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天津市应用基础与前沿技术研究计划(07JCZI)
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相关作者:
张洁
张靖
康春生
王涛
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天津医科大学...
作者
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张庆瑜
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付彦超
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王涛
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康春生
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张靖
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张洁
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2009
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腺病毒介导的靶向P85和Akt1短发夹RNA对人胃腺癌细胞生长抑制作用的研究
2009年
目的构建靶向P85和蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,研究其对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的抑制效果。方法构建腺病毒载体rAd5-P+A,体外转染SGC-7901细胞后,以实时定量PCR和Westernblot分别检测P85和Akt1的mRNA和蛋白质的表达。以噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞法评价转染后胃癌细胞的增殖活性。构建裸鼠皮下荷瘤模型进-步观察rAd5-P+A对SGC-7901细胞生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果成功构建的rAd5-P+A重组腺病毒载体转染SGC-7901细胞后可显著抑制p85和Aktl的mRNA表达,而P85和Aktl蛋白表达量在转染48h、72h后分别下调57.5%、63.7%和67.8%、75.6%,与空白对照组和通用腺病毒对照(rAd5-HK)组相比,差异具有统计学意义(P=0.005,P=0.003)。与空白对照组和rAd5-HK组相比,SGC-7901细胞的增殖活性在rAd5-P+A转染后第2天明显下降(P〈0.001),且tAd5-P+A转染组进入S期的细胞数减少了5.9%-7.1%,而进人G0/G1期的细胞增加了12.1%~13.7%。裸鼠皮下荷瘤模型治疗实验也显示,rAd5-P+A可抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡。结论腺病毒介导的靶向P85和Aktl的shRNA可抑制人胃腺癌细胞的生长,这可能为胃腺癌靶向性联合基因治疗提供新的策略。
张靖
付彦超
康春生
张庆瑜
王涛
张洁
关键词:
胃腺癌
腺病毒载体
P85
短发夹RNA
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