内蒙古自治区自然科学基金(2010MS0513)
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 相关作者：王玉珍刘帅谢基明王宁飞蔡富娟更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学内蒙古自治区医院天津医科大学更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Rab7真核表达载体的构建及其在小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建Rab7的真核表达载体,研究其在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达。方法 RT-PCR方法分析Rab7在组织和细胞中的表达。以RAW264.7细胞的cDNA为模板,根据GenBank公布的小鼠Rab7全长序列设计引物,扩增Rab7基因的开放阅读框。将其与真核表达载体pcDNA3.1(-)连接,构建pcDNA-Rab7重组质粒。用脂质体将Rab7真核表达载体瞬时转染RAW264.7细胞,RT-PCR和Western blot法鉴定Rab7的过表达。结果 Rab7重组载体测序结果与GenBank中报道的Rab7序列的同源性为100%。RT-PCR和Western blot结果显示Rab7真核表达载体瞬时转染RAW264.7细胞后,Rab7表达显著增高。结论成功构建了Rab7真核表达载体。为今后研究Rab7在巨噬细胞中的功能奠定了基础。
- 蔡富娟谢基明康鸿斌孙晓琳王娜李云旭王玉珍
- 关键词：巨噬细胞真核表达载体过表达
- Rab7 GTPase负向调节巨噬细胞中poly I:C诱导的细胞因子的表达被引量：2
- 2011年
- 目的:通过构建Rab7的失活突变载体tRab7(Rab7T22N),研究Rab7失活突变后对poly I:C诱导的RAW264.7巨噬细胞中细胞因子的影响。方法:利用PCR定点突变法构建Rab7的失活突变载体Rab7T22N,将Rab7的真核表达载体及其突变体tRab7通过脂质体法瞬时转染RAW264.7细胞,通过Western blot方法检测Rab7的表达情况。poly I:C刺激转染细胞不同时间后检测细胞因子IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达变化。结果:Western blot检测结果显示,与转染空质粒的对照细胞相比,转染Rab7和tRab7的细胞中Rab7的蛋白水平显著增高。Rab7过表达后,抑制了巨噬细胞RAW264.7中poly I:C刺激后IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的产生,而Rab7失活突变体tRab7(Rab7T22N)过表达后显著促进了IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达。结论:Rab7抑制了poly I:C刺激的巨噬细胞中IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达,该抑制作用依赖于其GTP结合活性。本研究为进一步阐明Rab7在TLR3信号转导通路中的作用奠定了基础。
- 王玉珍谢基明王宁飞刘帅
- 关键词：IFN-ΒTNF-Α
- Rab7基因沉默对LPS活化的巨噬细胞中NO/iNOS的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:研究Rab7基因沉默后对LPS刺激的巨噬细胞系RAW264.7表达NO/iNOS的影响。方法:设计并化学合成三对靶向于Rab7基因的干扰RNA:siRNA1、siRNA2、siRNA3。应用脂质体法将siRNA瞬时转染RAW264.7细胞,通过Real-time PCR和Western blot方法检测转染后Rab7的沉默效果。通过MTT法分析瞬时转染siRNA后RAW264.7细胞的生长特性。以LPS刺激Rab7基因沉默后的RAW264.7不同时间,检测NO和iNOS的表达量变化。结果:与对照相比,转染Rab7干扰序列siRNA3后,Rab7蛋白水平表达最低,Real-time PCR的结果显示,Rab7的mRNA水平降低50%(P<0.05)。Rab7基因沉默后48小时显著促进了巨噬细胞RAW264.7的生长(P<0.01)。Rab7干扰后,LPS刺激RAW264.7细胞12小时NO的表达显著增高(P<0.05)。RT-PCR的结果和Real-time PCR的结果证实,Rab7干扰后iNOS基因mRNA的表达显著高于对照(P<0.01)。结论:巨噬细胞RAW264.7中转染siRNA3沉默Rab7基因的效果最好。Rab7沉默后促进了LPS活化的巨噬细胞中NO和iNOS的表达。该研究为进一步阐明Rab7在TLRs信号通路中的作用奠定了基础。
- 刘帅谢基明王玉珍宋亮王娜李云旭孙晓琳
- 关键词：脂多糖SIRNA诱导型一氧化氮合成酶一氧化氮
- 过表达Rab7基因对LPS和Poly I:C活化的巨噬细胞RAW264.7中iNOS/NO的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:通过建立稳定表达Rab7及其突变体的巨噬细胞系,分析稳定表达细胞系的生物学特性,研究Rab7及其突变体基因过表达后对LPS和Poly I:C刺激的巨噬细胞表达iNOS/NO的影响。方法:将Rab7及其突变体Rab7(T22N)的真核表达载体通过脂质体法转染RAW264.7细胞,G418选择性培养基筛选,建立稳定表达Rab7及Rab7T22N的细胞系。通过RT-PCR和Western blot方法鉴定稳定表达细胞系。通过观察细胞形态及MTT法分析稳定表达细胞系的生长特性。以LPS和PolyI:C刺激稳定表达细胞系,不同时间后检测NO和iNOS的表达量变化。结果:与转染空质粒的细胞相比,转染Rab7和Rab7T22N的细胞中Rab7的mRNA和蛋白水平都显著增高。Rab7过表达后引起细胞形态变化并显著抑制了细胞增殖,Rab7T22N过表达后促进细胞增殖。Rab7过表达后,巨噬细胞在LPS和Poly I:C刺激后分泌的iNOS和NO显著降低,而Rab7T22N过表达后iNOS和NO的分泌又恢复。结论:成功建立了稳定表达Rab7及其突变体的细胞系。Rab7过表达后抑制了细胞增殖,抑制了Poly I:C和LPS刺激后巨噬细胞中NO和iNOS的表达。该研究为进一步阐明Rab7在TLRs信号通路中的作用奠定了基础。
- 王宁飞蔡富娟刘帅宋亮谢业功王玉珍
- 关键词：脂多糖一氧化氮合酶一氧化氮
