吉林省科技厅科研基金(20050705-6)
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 相关作者：刘锋龚守良董丽华李艳博许一多更多>>
- 相关机构：吉林大学中日联谊医院吉林大学吉林大学第一医院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- pEgr-hp53体外稳定转染联合辐射对人肺腺癌A549细胞周期进程及增殖的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨pEgr-hp53重组质粒体外稳定转染联合辐射对人肺腺癌A549细胞周期进程及增殖的影响,阐明其抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法脂质体包裹重组质粒pEgr-hp53体外转染A549细胞,G418筛选稳定表达细胞株并扩增培养,采用细胞计数法检测肿瘤细胞增殖速度,流式细胞术检测肿瘤细胞周期的变化。结果经pEgr-hp53体外转染A549细胞10到20d,G418筛选得到稳定表达的细胞株,联合X射线照射可明显抑制A549细胞的体外增殖,细胞周期进程明显改变,G1期和G2期发生阻滞。结论提示pEgr-hp53体外稳定转染联合辐射可使人肺腺癌A549细胞周期阻滞于G1期和G2期,并可抑制肿瘤细胞增殖,本研究为提高肿瘤放射治疗效果提供新的治疗方案奠定了理论基础和实验依据。
- 董丽华刘锋李艳博龚守良
- 关键词：人肺腺癌细胞基因治疗
- 重组质粒pcEgr-hp53的构建及在A549和SKOV-3细胞中电离辐射诱导p53基因和蛋白的表达
- 2009年
- 目的构建重组质粒pcEgr-hp53,并探讨其在A549和SKOV-3细胞中的辐射诱导表达及抗癌作用。方法将野生型p53 cDNA全长插入pcDNA3.1质粒多克隆位点,用Egr-1启动子替代pcDNA3.1质粒CMV启动子,构建成pcEgr-hp53重组质粒;通过脂质体介导转染法将重组质粒pcEgr-hp53和pcDNA3.1分别转染入A549和SKOV3细胞株,并经G418筛选稳定克隆并扩增培养。采用RT-PCR和流式细胞术的方法检测了不同剂量X-射线照射转染后的A549和SKOV-3细胞p53基因转录水平和蛋白表达的变化。结果经限制性内切酶酶切鉴定,辐射诱导表达载体pcEgr-hp53构建正确。与0 Gy比较,A549-hp53和SKOV-3-hp53经0.5-5 Gy照射后,p53 mRNA水平增高;A549-hp53在2-5 Gy后,p53蛋白表达显著增高(P<0.01),SKOV-3-hp53其蛋白表达随剂量(0.5-5 Gy)增加而明显增加(P<0.05-P<0.01)。A549-hp53与A549-vect相同照射剂量组比较,其p53蛋白表达在0.5 Gy照射后明显下降(P<0.05),2-5 Gy照射后明显增高(P<0.01);SKOV-3-hp53与SKOV-3-vect相同照射剂量组比较,其蛋白表达在0 Gy时增高,0.5-5 Gy照射后明显增高(P<0.01)。结论X-射线可激活早期反应生长因子Egr-1,无论肿瘤细胞p53基因状态如何,均可诱导其下游基因p53 mRNA及其p53蛋白表达增强。
- 刘锋董丽华李艳博龚守良
- 关键词：EGR-1基因A549SKOV-3P53MRNA
- 体外稳定转染的重组质粒pEgr-hp53联合辐射对人卵巢癌SKOV-3细胞周期进程及增殖的影响
- 2008年
- 目的：探讨体外稳定转染的pEgr-hp53重组质粒联合辐射对人卵巢癌SKOV-3细胞周期及增殖的影响，阐明其抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法：脂质体包裹重组质粒pEgr-hp53和pcDNA3.1体外转染SKOV-3细胞所表达的SKOV-3-hp53和SKOV-3-vect分别接受0、0．5、2．0和5．0 GyX射线照射，即8个实验组，通过绘制生长陆线评价肿瘤细胞增殖速度，流式细胞术检测肿瘤细胞周期进程的变化。结果：与0 Gy组比较，体外稳定转染的SKOV-3-hp53经不同剂量x射线（0．5、2．0和5．0 Gy）照射后2d细胞数均明显降低（P〈0．05或P〈0．01），并随照射剂量的加大和照后时间的延长下降更为明显；与0 Gy组比较，G0／G1期细胞百分数均明显增高（P〈O．001），G2／M期不同程度降低。SKOV-3-hp53照射组细胞数均明显低于其相应的SKOV-3-vect照射组，0．5 Gy照后4～8d、2．0 Gy照后2d和5．0 Gy照后6d细胞数均明显降低（P〈0．05或P〈0．01）；G0／G1期细胞百分数明显增高（P〈O．01），G2／M期明显下降（P〈0．01）。结论：体外稳定转染的pEgr-hp53联合辐射可使人卵巢癌SKOV-3细胞周期阻滞于G1期，并抑制肿瘤细胞增殖。电离辐射激活Egr-1启动子，使p53基因表达增强，加强了对肿瘤细胞生长的抑制作用。
- 董丽华刘锋李艳博龚守良
- 关键词：细胞周期细胞增殖
- pcEgr-hp53稳定转染联合X射线诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及相关凋亡蛋白表达变化
- 2008年
- 目的：探讨辐射诱导表达载体pcEgr-hp53体外稳定转染人肺腺癌A549细胞后联合X射线照射,诱导细胞凋亡的作用及相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表达的变化。方法：以脂质体介导携有外源野生型p53基因的辐射诱导表达载体pcEgr-hp53和pcDNA3.1,体外转染A549细胞,筛选稳定转染的细胞克隆并扩增培养,所表达的A549-hp53和A549-vect分别接受0、0.5、2和5Gy X射线照射,即8个实验组,采用TUNEL法和流式细胞术检测稳定转染联合辐射对细胞凋亡和Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表达变化的影响。结果：A549-hp53组加不同剂量照射与0 Gy组比较,其百分数均明显增加（0.5-5Gy,P〈0.05-P〈0.01）,Bcl-2蛋白表达在0.5-5Gy时明显下降,而Bax蛋白明显增加（P〈0.05-P〈0.01）,caspase-3蛋白表达在2-5Gy时明显增加（P〈0.01）;A549-hp53照射组不同剂量照射,与A549-vect相应照射剂量组比较,其百分数在0.5Gy时无明显差异,在2-5 Gy时为（P〈0.01）,Bcl-2蛋白表达明显下降（0.5Gy,P〈0.01;2-5Gy,P〈0.05）,Bax和caspase-3蛋白表达0.5-5Gy时明显增加（P〈0.05-P〈0.01）。结论：体外p53基因转染联合X射线照射可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Bax、caspase-3表达上调,具有显著的肿瘤抑制作用。
- 董丽华许一多刘锋龚守良
- 关键词：X射线A549细胞细胞凋亡
