广东省自然科学基金(8151001002000022)
- 作品数：11 被引量：45H指数：3
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- 整合素αvβ_3在血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老中的变化
- 2012年
- 目的观察整合素αvβ3在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老中的变化。方法体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ(终浓度10-6mol/L)干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组。以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞增殖能力两种衰老标志物为主要观察指标。其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反应细胞的增殖能力;利用Western印迹法分析AngⅡ诱导HUVECs 0、12、24、36、48 h的整合素αvβ3表达的时间效应关系。结果与对照组相比,10-6 mol/L AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的(77.15±6.83)%;(81.80±0.92)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0～G1,证实细胞衰老;AngⅡ呈时间依赖性上调整合素αvβ3表达。结论 AngⅡ可以诱导HUVECs衰老,其机制可能与上调衰老细胞整合素αvβ3表达有关。
- 邹美圣刘凌刘泽
- 关键词：细胞衰老
- 小凹蛋白1在血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老中的变化
- 2011年
- 目的观察小凹蛋白1(caveolin-1,Cav-1)在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)衰老中的变化。方法体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,分为对照组、AngⅡ诱导组(用终浓度为10-6 mol/L的AngⅡ干预)。以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力两种衰老标志物为主要观察指标。采用免疫化学染色方法检测衰老相关β-半乳糖苷酶的活性,流式细胞术检测细胞周期来反映细胞的增殖能力;利用Western印迹法分析AngⅡ诱导HUVECs 0、12、24、36、48h的Cav-1表达的时间效应关系。结果与对照组相比,10-6 mol/L AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的(77.15±6.83)%;(81.80±0.92)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0-G1[(89.4±3.4)%],证实细胞衰老;AngⅡ呈时间依赖性上调Cav-1表达。结论 AngⅡ可以诱导HUVECs衰老,其分子机制可能与上调衰老细胞Cav-1表达有关。
- 邹美圣刘凌刘泽
- 关键词：小凹蛋白1人脐静脉内皮细胞细胞衰老动脉粥样硬化
- 不同浓度血管紧张素Ⅱ对人脐静脉血管内皮细胞衰老变化的影响
- 2011年
- 目的:观察不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)衰老及细胞存活率的变化情况。方法:体外培养HUVEC,随机分为对照组和含不同浓度AngⅡ组(10-8～10-5mmol/L)共5组,用含不同浓度AngⅡ的培养基孵育细胞48h,β-半乳糖苷酶染色法鉴定内皮细胞衰老状态;流式细胞技术分析细胞周期变化;分别用MTT法和CCK-8法检测细胞存活率变化情况。结果:AngⅡ培养细胞48h后,β-gal阳性染色率随着AngⅡ浓度的增加逐渐增多(P均<0.01);细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少;细胞存活率明显下降;与对照组相比,10-8和10-7 mmol/L AngII组无明显差异(P>0.05),10-6和10-5 mmol/LAngⅡ组有统计学差异(P<0.05)。结论:AngII诱导HUVEC衰老并呈剂量依赖性的抑制细胞增殖,提示细胞衰老程度随AngII浓度增加而加重。
- 王雪妮刘凌刘泽王鲁妮吴军王伟封菊香
- 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞衰老
- 血清甲状腺素水平及细胞免疫功能的增龄性变化被引量：3
- 2012年
- 目的探讨血清甲状腺素水平与细胞免疫功能的增龄性变化。方法在完善SENIEUR协议的基础上筛选出78例高龄健康老年组（≥80岁）、128例非高龄健康老年组（60-79岁）、60例非老年健康体检组（20-59岁）。采用化学发光法检测血清甲状腺素水平；流式细胞仪检测外周血单个核细胞（PBMC）表面人白细胞抗原DR位点（HLA．DR）的表达，T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）的绝对值以及T细胞亚群CD4＋／CD8＋的比值；各组随机选择10例体检者，分离PBMC获得T细胞，用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测T细胞经体外植物血凝素（PHA）刺激后的增殖能力。结果3组健康体检者的血清三碘甲状腺原氨酸（T3）、四碘甲状腺原氨酸（T4）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离四碘甲状腺原氨酸（FT4）以及血清促甲状腺素（TSH）水平均无显著性差异（P〉0．05）；3组健康体检者的PBMC表面HLA-DR的表达以及外周血T细胞、NK细胞、B细胞数目的绝对值均无显著性差异（P〉0．05），CD4＋，CD8＋的T细胞亚群绝对值以及CD4＋／CD8＋比值无显著性差异（P〉0．05）；3组T细胞在体外经PHA刺激后其增殖能力有显著性差异，非老年健康体检组最强、高龄健康老年组最弱（P〈0．05）。结论在完善SENIEUR协议基础上选择研究对象，结果发现，健康体检者的血清甲状腺素水平随增龄无明显变化，外周血免疫细胞数量随增龄也无明显改变，但免疫细胞的功能随增龄明显减低。
- 张源源吴军刘泽李薇王小春张卫云彭艳冯德光刘凌王鲁妮刘坚
- 关键词：甲状腺激素免疫细胞
- 血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞衰老的诱导作用及对端粒酶活性的影响被引量：2
- 2012年
- 目的观察血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endo-thelial cell,HUVECs)衰老的诱导作用及对端粒酶活性的影响。方法体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ(终浓度10-6mol/L)干预,分为对照组和AngⅡ诱导组。β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反映细胞的增殖能力;用聚合酶链反应-酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)检测端粒酶活性。结果与对照组比较,10-6mol/L AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的(77.15±6.83)%;(71.10±6.81)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期多停滞于G0/G1期[(84.11±7.92)%],证实细胞衰老;与对照组相比,10-6mol/L AngⅡ诱导组端粒酶活性明显下降(P<0.01)。结论 AngⅡ可以诱导HUVECs衰老,其机制可能与抑制衰老细胞端粒酶活性有关。
- 刘泽邹美圣刘凌王鲁妮吴军王伟封菊香
- 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞衰老端粒酶
- 血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老及对炎症因子分泌的影响被引量：3
- 2013年
- 目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老及对白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的影响,进一步探讨AngⅡ在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生、发展过程中所发挥的作用。方法体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,用Ang Ⅱ(终浓度10-6mol/L)干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组。以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力2种衰老标志物为主要观察指标,其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反映细胞的增殖能力;酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养液中IL-6、TNF-α浓度。结果与对照组相比,AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的(77.15±6.83)%;(81.80±0.92)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0-G1[(89.4±3.4)%],证实细胞衰老;IL-6、TNF-α分泌增加(P均<0.01)。结论 AngⅡ可以诱导HUVECs衰老,其机制可能与IL-6、TNF-α分泌增加有关。
- 邹美圣刘凌刘泽王鲁妮吴军王伟封菊香
- 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞衰老白介素-6肿瘤坏死因子-Α
- 血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老及苦碟子注射液的干预研究被引量：8
- 2012年
- 目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的诱导作用,及苦碟子注射液的干预作用。方法:体外培养HUVECs,用AngⅡ(在10-6mol/LAngⅡ的DMEM培养液中48h)干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组和苦碟子注射液组(给予AngⅡ刺激前1h先加用10%苦碟子注射液)。采用CCK-8法检测细胞存活率,以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力两种衰老标志物为主要观察指标。其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反应细胞的增殖能力;利用Western印迹法检测小凹蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)的表达。结果:与对照组比较,AngⅡ诱导组细胞存活率明显下降,β-gal阳性染色率明显增多,细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少,Cav-1蛋白表达水平明显上调,表明AngⅡ成功诱导了HUVECs衰老,而给予苦碟子注射液干预后上述变化改善。结论:苦碟子注射液可以延缓AngⅡ诱导HUVECs衰老,其作用机制可能与下调Cav-1蛋白表达有关。
- 邹美圣刘凌刘泽王鲁妮吴军王伟封菊香
- 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞衰老小凹蛋白-1苦碟子注射液
- 灵芝多糖对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞衰老的干预研究被引量：12
- 2012年
- 目的探讨灵芝多糖保护血管内皮细胞、抑制血管内皮细胞衰老的作用。方法采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立衰老模型,分为对照组、AngⅡ诱导组和灵芝多糖组(给予AngⅡ刺激前1 h先给予100 mg/L灵芝多糖)。采用CCK-8法检测细胞存活率,采用免疫化学染色方法检测衰老相关β-半乳糖苷酶活性,流式细胞术检测细胞周期来反映细胞的增殖能力。结果与对照组比较,AngⅡ诱导组细胞存活率明显下降,β-半乳糖苷酶阳性染色率明显增多,细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少,表明AngⅡ成功诱导了HUVECs衰老,而给予灵芝多糖干预后上述变化改善。结论灵芝多糖具有抑制内皮细胞衰老、保护血管内皮功能的作用。
- 邹美圣刘凌刘泽王鲁妮吴军王伟封菊香
- 关键词：血管内皮细胞细胞衰老Β-半乳糖苷酶灵芝多糖
- 人外周血单核细胞人白细胞抗原-DR表达和细胞因子水平的增龄性改变被引量：2
- 2011年
- 目的研究人外周血单核细胞(PBMC)人白细胞抗原DR的表达和单核细胞体外分泌细胞因子水平的增龄性改变。方法 352例不同年龄的体检者按年龄分为A组120例(20～69岁)、B组85例(70～79岁)、C组98例(80～89岁)、D组49例(90～102岁)。用流式细胞仪检测PBMC表面人白细胞抗原(HLA)-DR的表达;每组随机抽取10人,用ELISA方法检测经内毒素(LPS)刺激前后PBMC分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10等细胞因子的水平,并比较各年龄组PBMC表面HLA-DR表达的变化以及分泌TNF-α、IL-6、IL-10等细胞因子水平的变化。结果 A,B,C,D各组之间PBMC表面HLA-DR的表达有显著性差异(F=159.712,P=0.000),且不同年龄组人群PBMC表面HLA-DR的表达呈随龄性增加(r=0.744,P=0.000);LPS刺激前各年龄组人群PBMC分泌TNF-α,IL-6,IL-10细胞因子的水平无显著性差异(P>0.05);LPS刺激后各年龄组人群PBMC分泌TNF-α,IL-6,IL-10细胞因子的水平较LPS刺激前均有明显增高(P<0.05);将LPS刺激后各组PBMC分泌细胞因子的水平进一步行组内比较发现,与A组相比,B,C,D各组分泌TNF-α、IL-6的水平明显减低(P<0.05),分泌IL-10的水平明显增高(P<0.05。结论人PBMC细胞免疫功能呈随龄性改变,其表面HLA-DR的表达呈随龄性增加;LPS刺激前各年龄组人群PBMC分泌TNF-α、,IL-6,IL-10细胞因子的水平无显著性差异;而LPS刺激后,70岁以上老年人PBMC分泌TNF-α和IL-6的水平明显减低,分泌IL-10的水平明显增高。
- 吴军刘泽王鲁妮刘凌张源源冯德光彭艳李薇
- 关键词：外周血单核细胞HLA抗原细胞因子类
- 枸杞多糖对血管紧张素II诱导的血管内皮细胞衰老及P53和P16表达的影响被引量：14
- 2011年
- 目的观察枸杞多糖对血管紧张素I(IAngII)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)衰老及对细胞衰老相关基因P53和P16表达的影响,以探讨其抗衰老作用及机制。方法体外培养HUVECs加入终浓度10-6mol/LAngII诱导细胞衰老,建立内皮细胞衰老模型。实验分为空白对照组、AngII模型组和枸杞多糖组;β-半乳糖苷酶染色法鉴定内皮细胞衰老状态;流式细胞技术分析细胞周期变化;CCK-8法检测细胞存活率情况;Westernblotting法检测P53、P16蛋白的表达。结果 AngII模型组与空白对照组比较,β-gal阳性染色率明显增多,细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少,细胞存活率明显下降,P53、P16蛋白表达水平明显上调。给予枸杞多糖处理后改善了细胞衰老状态,β-gal阳性染色率减少,G0/G1期细胞减少,S期细胞逐渐增多,细胞存活率增多,P53、P16蛋白的表达较AngII组下调。结论枸杞多糖能够抑制AngII诱导HUVECs衰老,其作用机制可能是通过下调P53及P16的表达而实现的。
- 刘凌王雪妮刘泽王鲁妮吴军王伟封菊香
- 关键词：枸杞多糖血管紧张素II人脐静脉内皮细胞细胞衰老P16
