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人GST-PTEN融合蛋白的原核表达和纯化: 2008年; 目的构建人第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)原核表达质粒,使其在原核细胞中高效表达并进行纯化。方法将全长片段插入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组子pGEX-4T-1-PTEN,转化BL-21感受态细胞。经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达PTEN融合蛋白的可诱导性表达,通过SDS-PAGE电泳、Western印迹分析证实蛋白表达的特异性。并用谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-Stransferase,GST)亲和层析对融合蛋白进行纯化。结果成功构建了原核表达载体pGEX-4T-1-PTEN,并将PTEN融合蛋白的成功表达,通过SDS-PAGE电泳、Western印迹分析,证实了蛋白表达的特异性。并对蛋白进行了纯化,获得了GST-PTEN融合蛋白的纯品。结论成功表达、纯化了GST-PTEN融合蛋白,为进一步研究PTEN蛋白的功能及其与其它功能性蛋白的相互作用研究奠定了基础。; 冯智慧焦淑贤李长缨胡彬刘晓华; 关键词：原核表达融合蛋白蛋白纯化

血小板输注无效患者体内血小板反应性抗体特异性调查研究被引量：11: 2009年; 目的探讨血小板输注无效患者体内血小板反应性抗体的发生频率及其特异性。方法对48名血小板输注无效患者,利用MACE法筛查其血清中的血小板反应性抗体,进一步用PAK12诊断试剂MAIPA法鉴定血小板HPA抗体特异性。结果血小板输注无效患者中血小板反应性抗体的总检出率为50%(24/48),其中同种HLA抗体发生率为39.6%(19/48),占所有抗体检出的79.2%,同种HPA抗体的检出率为29.2%(14/48),而其中有64.3%(9/14)是与HLA抗体同时存在。检出的HPA抗体特异性有抗-HPA-3a(n=2),-5a(n=1),-5b(n=1),-2b(n=1),-4b(n=1);同时HPA抗体中有78.6%(11/14)是针对GPⅡb/Ⅲa,Ⅰa/Ⅱa和/或Ⅰb/Ⅸ的多反应性抗体。女性患者中检出抗体的比例55.2%(16/29)高于男性患者42.1%(8/19),但差异没有显著性统计学意义。结论血小板输注无效患者中血小板同种抗体以HLA抗体多见,但HPA抗体并不像之前报道的罕见。与高加索人群PTR患者血小板同种反应性抗体以抗-HPA-5b,-1b为主不同,研究发现中国人群PTR患者HPA同种抗体以HPA-3,-5系统抗体多见,同时检出了HPA-4b,-2b抗体。; 焦淑贤赵林周洪李长缨迟晓云孙波乔显森尹凤媛赵洪国; 关键词：同种抗体

山东半岛地区汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因及单体型多态性的研究被引量：15: 2010年; 目的研究山东半岛地区汉族人群HLA-A、B、DRB1等位基因多态性的分布特征。方法应用聚合酶链反应-直接测序分型(polymerase chain reaction sequence-based typing,PCR-SBT)法和序列特异性寡核苷酸探针杂交技术(Polymerase chain reaction and sequence-specific olignucleotide probe hybridizations,PCR-SSOP)高分辨试剂,对山东半岛地区865名无血缘关系的汉族健康人群HLA-A、B、DRB1进行基因分型。结果检出HLA-A、B、DRB1等位基因分别有33、73、43种,经统计分析这3个基因座分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05),A*3001-B*1302-DRB1*0701(7.61%)和A*3303-B*4403-DRB1*1302(1.674%)单体型是山东半岛地区汉族人群最常见单体型。结论山东半岛地区汉族人群HLA-A、B、DRB1基因座单体型分布具有高度的遗传多态性且有其自身分布特点。本研究获得的的HLA-A、B、DRB1基因座单体型分布数据及相关遗传参数资料,为HLA在人类学、免疫遗传学、法医学和其它的组织器官移植方面的应用和科学研究提供和积累了基础资料。; 刘晓华冯智慧胡彬李长缨迟晓云孙旭敏焦淑贤; 关键词：单体型汉族

改良抗原捕获ELISA在血小板抗体检测及配型中的应用被引量：4: 2008年; 目的探讨改良抗原捕获ELISA(MACE)在血小板抗体检测及配型中的应用。方法采用MACE分别检测青岛地区医院送检48例血小板输注无效(PTR)患者血清中的血小板同种抗体和32例特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者血浆中的血小板自身抗体,并为PTR患者进行血小板配型。结果PTR患者血小板同种抗体检出率为50%(24/48),其中同种HPA抗体阳性率为29.2%(14/48),同种HLA抗体阳性率为39.6%(19/48),抗-HLA占所有免疫性抗体的70.4%(19/24)。ITP患者血浆游离抗体检出率62.5%,其中抗体阳性者全部检出自身抗体,而且全部有抗自身HPA抗体。选择配合性血小板52个治疗量输注,输注后24小时CCI值为(11.35±2.78)×109/L,总有效率82.3%。结论MACE法可以常规应用于PTR患者的血小板抗体检测及配型;MACE法检测血浆中游离的血小板自身抗体可做为辅助诊断ITP的一种方法。; 焦淑贤朱建芳丛培芳周洪温振科孙波乔显森尹凤媛; 关键词：血小板抗体血小板输注无效血小板减少性紫癜特发性

青岛地区汉族人群HPA-1—5,15多态性分布研究被引量：27: 2008年; 目的研究青岛地区汉族人群人类血小板抗原(HPA)1-5,15抗原分布多态性。方法采用PCR-SSP方法对青岛地区918名无血缘关系固定血小板无偿捐献者进行HPA1-5及HPA-15系统的基因分型.结果各被检系统等位基因频率分别是1a=0.9940,1b=0.0060,2a=0.9319,2b=0.0681,3a=0.5822,3b=0.4178,4a=0.9897,4b=0.0104,5a=0.9804,5b=0.0196,15a=0.4913,15b=0.5087;HPA基因频率分布与国内资料比较,HPA-1与北方人群(河南),HPA-2与南方人群(四川)差异有统计学意义;与台湾人群HPA-2,-4,与日本人群HPA-2,-3,-5,与美国黑人HPA-1,-2,-5,与白人HPA-1,-4,-5,-15分别有统计学显著性差异。结论青岛地区汉族人群HPA分布具有本地人群特点。本组HPA数据分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,可以作为北方汉族人群HPA基因分布频率数据库和青岛本地化血小板供者HPA资料库。; 焦淑贤刘晓华迟晓云孙旭敏李长缨胡彬杨志夏丛培芳; 关键词：人类血小板抗原基因频率血小板供者

青岛地区已知HLA和HPA分型血小板供者库的建立及临床应用被引量：22: 2010年; 目的建立青岛市已知HLA和HPA分型的无偿机采血小板供者库并用于解决血小板输注无效(PRT)患者的血小板输注。方法采用PCR-SSO流式磁珠法和PCR-SSP法分别对青岛地区无偿机采血小板捐献者1 800人进行HLA-Ⅰ类(A,B位点)、HPA-1—-5,-15基因分型,针对不同免疫状态的PTR患者比较3种不同配型法(血小板随机交叉配型法、抗原特异性配合法、抗原阴性选择法)解决血小板输注无效的效果。结果在高致敏(群体反应性抗体PRA>60%)患者中,HLA和或HPA特异性配型效果较好;轻度致敏(PRA<60%)患者随机交叉,抗原阴性选择,抗原特异性配型方案效果相似。不考虑ABO血型的因素1 800名的血小板供者库可以使99%的患者在库中找到至少1例HLA完全相合的供者,理论估算的供者库规模被不同表型的患者库中检索结果证实。结论理论上青岛本地化已知分型血小板供者库规模需达到6 000人左右可以有效解决血小板输注无效患者的血小板输注问题。只有重度致敏的患者需要HLA完全相同的供者,而轻度致敏的患者可以选择随机交叉配合或抗原阴性选择方案。; 焦淑贤迟晓云冯智慧刘晓华孙波周洪胡彬尹凤媛乔显森李长缨赵林; 关键词：HLA HPA 血小板输注无效

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山东省医药卫生科技发展计划项目(2005034)