黑龙江省科技厅青年科学基金(QC2010051)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技厅青年科学基金黑龙江省教育厅资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 牛γ干扰素基因的表达及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2011年
- 为了获得牛γ干扰素表达产物及其多克隆抗体,利用分子生物学软件分析GenBank公布的牛γ干扰素的氨基酸序列,针对这一基因序列设计了一对特异性引物,并从牛脾脏淋巴细胞提取基因组总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增出IFN-γ基因,与pMD18-T载体连接后进行酶切、PCR扩增以及序列测定和分析,并将其连接到pQE-30原核表达载体中,命名为pQE30-IFN-γ,转化到大肠埃希菌x-LI Blue感受态细胞,1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导表达,经纯化后免疫接种小鼠,用ELISA测定小鼠血清中抗体效价。结果表明,RT-PCR扩增到510 bp的片段,重组蛋白大小为22 ku,与预期大小相符。Western blot分析结果表明,重组蛋白能与His-tag的单克隆抗体反应,说明该蛋白具有良好的免疫活性。用ELISA测定小鼠血清的抗体效价均在1∶32 000以上,说明该蛋白免疫效果较好,为下一步研究干扰素的功能奠定了基础。
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- 关键词：克隆
- 牛γ-干扰素基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
- 2011年
- 根据GenBank发表的牛γ-干扰素基因设计1对特异性引物,从牛脾脏淋巴细胞提取基因组总RNA,采用反转录?聚合酶链式反应(reverse transcriptase-PCR,RT-PCR)技术扩增出IFN-γ基因,与pMD18-T载体连接后进行酶切、PCR鉴定及序列测定和分析,并将其连接到pQE-30原核表达载体中,命名为pQE30-IFN-γ,转化到大肠杆菌x-LI Blue感受态细胞,IPTG(1.0 mmol/L)37℃诱导表达。结果显示,对重组质粒进行PCR鉴定,扩增到510 bp片段,重组蛋白大小为22 ku,与预期大小相符;Western blotting分析结果表明,重组蛋白能与抗His-tag单克隆抗体反应,为下一步研究干扰素的功能奠定了基础。
- 宋佰芬刘哲曹宏伟马金柱徐闯崔玉东朱战波黄玉兰
- 关键词：干扰素基因克隆
- 牛干扰素γ蛋白在Vero细胞中的表达及其抗病毒活性
- 2013年
- 目的在Vero细胞中表达牛干扰素γ基因,并对其抗病毒活性进行鉴定。方法将牛干扰素γ全基因克隆至pcDNA3.1(+)载体,构建重组表达质粒,经PCR及双酶切鉴定,将鉴定正确的阳性质粒通过脂质体法转染Vero细胞,分别采用间接免疫荧光和Western blot法检测细胞转染效率和干扰素γ蛋白的表达,采用细胞病变抑制试验检测其抗病毒活性。结果间接免疫荧光显示绿色荧光,表明牛干扰素γ蛋白在Vero细胞中得到表达,转染效率约为50%;Western blot检测可见相对分子质量约为22 000的目的条带,进一步验证了该蛋白的表达;细胞病变抑制试验显示细胞病变明显减少,表明表达的干扰素γ蛋白具有明显的抗病毒活性。结论成功在Vero细胞中表达了牛干扰素γ蛋白,其具有明显的抗病毒作用。
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- 关键词：VERO细胞抗病毒活性
