国家自然科学基金(39830300) 作品数:22 被引量:212 H指数:9 相关作者: 罗琛 吴清江 肖亚梅 林凯东 郑康 更多>> 相关机构: 湖南师范大学 中国科学院 武汉大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 高等学校骨干教师资助计划 国家科技重大专项 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
鲢和鳙单倍体和二倍体单个囊胚的细胞培养 2001年 对鲢、鳙单倍体和二倍体单个囊胚胚胎进行培养,结果表明,单倍体和二倍体细胞对培养条件的要求相差不大,其原代培养细胞的生长特点表现为新生细胞主要沿着组织块边缘重叠生长,向外扩展生长的速度非常缓慢,二倍体的鲢和鳙胚胎细胞培养物成活率相对高于单倍体,其中鲢二倍体胚胎细胞传代细胞占细胞培养数的18.06%。本结果对深入开展鲢、鳙核移植及胚胎干细胞研究具有积极意义。 俞小牧 童金苟 吴清江关键词:囊胚细胞 细胞培养 胚胎 Genetic discrimination for three gynogenetic clones of silver carp Hypophthalmichthys molitrix, based on restriction endonuclease analysis of Nd5-Nd6 region of mitochondrial DNA 被引量:1 2005年 Three artificial gynogenetic clones of silver carp were produced for the analysis of restriction enzyme digestion patterns of ND5-ND6 region from mtDNA of the clones. It is revealed that all intraclonal individuals shared completely the same digestion patterns but among interclonal individuals did not. The three clones were mixed and cultured in a pond together for two years, and restriction endonuclease digestion patterns of ND5-ND6 were used as genetic markers to assess the growth performance of each clone. 周建峰 叶玉珍 吴清江关键词:MTDNA GYNOGENESIS 快速建立鲢、鳙纯系的初步研究 被引量:12 2003年 运用随机扩增多态性DNA(RAPD)方法对雌核发育和人工转性鲢、鳙进行了遗传多样性的研究,并用长江天然鲢、鳙群体作为对照分析.在雌核发育鲢中,共得到187条带,其中19条为多态带,占10.16%,而对照组鲢共扩增205条带,有32个多态座位,占总带数的15.61%.在雌核发育鳙中共产生232条带,其中11条为多态带,比例为4.74%,而在对照组中共产生241条带,25条为多态带,比例为10.37%.遗传距离分析表明,雌核发育鲢和鳙的平均值分别为0.102和0.023.而对照组鲢和鳙遗传距离平均值分别为0.161和0.104,均高于雌核发育组.从聚类分析UPGMA树可以十分明显找到了遗传配型相似、可以作为纯系繁殖的生理雄性个体及其同胞姐妹雌核发育雌鱼,由此提出了快速建立鱼类纯系的新操作途径. 王忠卫 叶玉珍 周建峰 吴清江关键词:纯系 随机扩增多态性DNA 雌核发育 分子遗传标记 鱼类体细胞移核胚胎发育影响因素的探讨 被引量:2 2002年 将脱膜后的泥鳅 (Misgurnusanguillicaudatus)受精卵置于不同孵化液中孵化 ,结果表明 ,孵化液 1×Holtfreter中正常鱼苗和总鱼苗的孵化率最高 ,分别为 5 4 8%和 5 9 2 %。 1/ 2×Holtfreter、 1/ 10×Holtfreter、曝气冷开水和改变孵化液处理 ,正常鱼苗的孵化率差别不大 ,分别为 48 0 %、 49 6 %、 5 0 0 %和 48 8%。曝气冷开水畸形率最高 ,为 8 8%。PBS不适合用作孵化液。机械损伤对胚胎的孵化率无明显影响 (73 39%vs 75 70 % ) ,但对胚胎发育有明显的致畸作用 (8 0 6 %vs 0 )。以雌核发育鳙 (Aristichthysnobilis)尾鳍培养细胞作供体 ,泥鳅未受精卵作受体 ,微卫星标记分析表明 ,移核胚胎的核来源于供体核 ,受体卵中未除去的核被排斥。供体细胞培养代数严重影响移核胚胎的发育率。随着培养代数的增加 ,移核胚胎的发育率逐渐降低。继代核移植可提高移核胚胎的发育率 ,尤其是第 1次体细胞继代核移植 ,晚期囊胚的发育率急剧上升 (4 3 84%vs 7 6 9% ) ,说明继代核移植可促进受体卵对供体核的再程序化。泥鳅和大鳞副泥鳅 (Paramisgurnusdabryanus)未受精卵作受体 ,其移核胚胎发育率无明显区别 (7 6 9%vs 7 0 2 % )。 刘同明 俞小牧 叶玉珍 王忠卫 周建峰 吴清江关键词:影响因素 鱼类 体细胞 核移植 胚胎发育 人工雌核发育草鱼染色体倍性的鉴定 被引量:6 2001年 运用经典的红细胞及细胞核体积大小测量方法以及流式细胞仪 ,检测了人工诱导雌核发育草鱼染色体倍性与 DNA含量 .雌核发育草鱼红细胞体积为 (333.5± 41.94) μm3 ,细胞核体积为 (2 0 .7± 2 .378) μm3 ;与所测普通草鱼 :红细胞体积 (34 3.8± 5 0 .1) μm3 ,细胞核体积 (2 1.2± 1.98) μm3 ,没有显著差异 .雌核发育草鱼 DNA含量 (2 C)平均为 2 .2 3pg,普通草鱼 DNA含量 (2 C) 2 .2 0 pg,两者无显著差异 .研究结果表明 。 肖亚梅 罗琛 刘筠 冯浩关键词:人工雌核发育 草鱼 染色体倍性 流式细胞仪 人工雌核发育草鱼近交F_1代线粒体DNA限制性内切酶分析 被引量:1 2004年 结合差速离心法、饱和酚/氯仿/异戊醇抽提等技术,提取并纯化了雌核发育草鱼近交F1代的线粒体DNA(mtDNA).用8种限制性内切酶对mtDNA酶切分析.结果表明:雌核发育草鱼近交F1代mtDNA分子大小为16.77kb,除无sall酶切位点外,其余7种酶EcoRI、BalI、XbaI、BamHI、PstI、XhoI各产生4、4、3、3、3、2、2个切点,与已报道的普通草鱼一致,雌核发育草鱼近交F1代与普通草鱼间未检测出限制性片断长度多态性差异.这表明,雌核发育草鱼F1代与普通草鱼mtDNA遗传结构具有同一性. 肖亚梅 罗琛关键词:雌核发育 草鱼 MTDNA 限制性内切酶 鲤的微卫星引物对草鱼基因组分析适用性的初步研究 被引量:53 2003年 运用微卫星DNA-聚合酶链反应(STR-PCR)基因分型技术,选取已发表的28对鲤的微卫星引物,探讨鲤的引物用于草鱼基因组微卫星分析的可能性。通过优化PCR反应条件,消除了影子带和异源核酸双链分子两类微卫星相关假阳性带对STR-PCR分析的干扰。在此基础上,筛选出7对引物可在湘江野生草鱼基因组中扩增出特异性条带,占总数的25%;其中的4对引物(约占总数的14.3%)在8尾湘江野生草鱼小群体中即检测到了个体间等位基因的多态性。这些初步的结果表明鲤的微卫星引物可以用于草鱼基因组的分析。 林凯东 罗琛关键词:微卫星引物 草鱼 基因组分析 STR-PCR 微卫星DNA 硬骨鱼类细胞核移植的研究进展 被引量:6 2000年 自 1997年世界首例体细胞核移植绵羊”多莉”诞生以来 ,动物细胞核移植引起世界范围内人们的关注。硬骨鱼类具有很多优点 ,是研究核移植良好的材料。作者综述了硬骨鱼类细胞核移植技术的发展和完善以及在核质互作、细胞核发育全能性、鱼类育种及纯系建立等方面的应用 。 刘同明 吴清江关键词:硬骨鱼类 细胞核移植 鲤鱼3个亚种线粒体DNA ND5/6区段的PCR-RFLP分析及亚种间分子标记的确立 被引量:20 2003年 从鲤鱼3个亚种(Cyprinus carpio carpio,Cyprinus carpio haematopterus和Cyprinus carpiorubrofuscus)中选出具代表性的品系共10个,运用PCR方法,扩增出2.4 kb的mtDNA ND5/6区段.共用9种限制性内切酶进行酶切分析,结果表明,每个亚种拥有一种单倍型,有4种限制性内切酶(Dde I,Hae III,Taq I和Mbo I)酶切后产生了能将3个亚种区分开来的诊断性限制性酶切位点.可利用其作为鉴定3个亚种的遗传标记和遗传育种的辅助手段. 周建峰 王忠卫 吴清江关键词:鲤鱼 亚种 线粒体DNA PCR-RFLP分析 分子遗传标记 草鱼基因组DNA一些RAPD位点的遗传分析及分子标记筛选 被引量:7 2006年 RAPD技术的实验结果很容易因实验条件和反应参数的不同而造成差异。为了建立能通用的草鱼基因组多态性分析RAPD分子标记体系,需要利用RAPD位点按照孟德尔共显性规律遗传的特点,用不同遗传背景的材料对多态性的RAPD位点进行统计遗传学比较分析以判断其真实性。为此,本实验选择具有遗传多态性的湘江流域草鱼群体和经连续两代人工诱导雌核发育获得的雌核发育草鱼品系,对一些可能作为草鱼基因组DNA分子标记的RAPD位点进行了遗传学比较分析。所用的10条多态性随机引物共检测到30个多态性RAPD位点。两个不同遗传背景群体的遗传统计对比分析结果表明:这30个多态位性位点在湘江流域草鱼群体和雌核发育草鱼群体中的分布符合孟德尔遗传规律,可以作为草鱼基因组DNA分析的可靠分子标记。本实验的观察结果还表明:在人工诱导雌核发育过程中,存在RAPD位点的快速丢失现象,两次人工诱导雌核发育过程中共丢失了17个多态性位点。因此,加强对自然水体中草鱼种质资源多样性的保护和利用各种现代生物学技术纯化、筛选和组合优良性状基因,是草鱼遗传育种中同样重要和不可或缺的两个方面。 刘正华 陈金辉 黄明敏 郑康 罗琛关键词:草鱼 多态性位点 分子标记