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microRNA-200c对3T3-L1前体脂肪细胞向脂肪细胞分化的调控作用被引量：2: 2017年; 目的探讨microRNA（miRNA）-200c对3T3-L1前体脂肪细胞分化的影响.方法利用实时PCR检测miRNA-200c在小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）向脂肪细胞分化过程及向骨细胞分化过程中的表达.通过将miRNA-200c类似物、miRNA-200c抑制剂转染至3T3-L1前体脂肪细胞,从而在细胞中增强或抑制miRNA-200c的表达,油红O染色检测转染后3T3-L1前体脂肪细胞诱导成熟后的脂滴形成情况.实时PCR检测转染后脂肪细胞特异性转录因子过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）和表征基因aP2在成脂过程中的表达变化.结果实时PCR结果显示,在小鼠骨髓MSCs诱导成脂后miRNA-200c表达升高（t=24.709,P＜0.01）,而诱导成骨后,miRNA-200c表达下降（t=8.783,P＜0.01）.转染miRNA-200c类似物后,3T3-L1前体脂肪细胞中脂滴明显增多,PPARγ和aP2表达显著升高（t=7.674、9.657,P均＜0.01）;转染miRNA-200c抑制剂后,3T3-L1前体脂肪细胞中脂滴明显减少,PPARγ、aP2表达显著降低（t=9.483、6.419,P均＜0.01）.结论 miRNA-200c能够促进3T3-L1前体脂肪细胞向脂肪细胞分化.; 李吉隆周杰王宝利; 关键词：微小RNA 脂肪细胞细胞分化

转化生长因子B受体Ⅰ影响脂肪细胞分化的研究: 2016年; 目的探讨siRNA下调转化生长因子β受体Ⅰ(TGFBRⅠ)基因表达后对ST2细胞向脂肪细胞分化的作用。方法设计并合成针对TGFBRⅠ的靶向si RNA作为实验组,以转染Control si RNA作为对照组。应用q RT-PCR检测并比较转染ST2细胞后各组TGFBRⅠm RNA的表达和脂肪细胞特异性转录因子CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)α、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ、脂肪细胞表征因子FABP4 m RNA的表达水平。诱导5 d后对2组细胞进行油红O染色,检测TGFBRⅠsi RNA对ST2细胞分化的影响。利用激光共聚焦显微镜观察脂肪细胞的染色情况并对细胞进行拍照。另外,用异丙醇萃取出油红O,测定油红O在波长520 nm处的光密度(OD)值,并进行组间比较。结果转染TGFBRⅠsi RNA后,ST2细胞TGFBRⅠ基因的表达水平明显下调,TGFBRⅠsi RNA能够促进脂肪细胞生成,增强C/EBPα、PPARγ及FABP4 m RNA表达;经成脂诱导5 d后,转染TGFBRⅠsi RNA的细胞产生的脂滴明显较Control si RNA组多,且OD值高于Control si RNA组。结论 TGFBRⅠsi RNA能有效促进脂肪细胞的分化,提示TGFBRⅠ可能是前体细胞向脂肪细胞分化的重要调控因子。; 杨永旭陈棣张欣王宝利; 关键词：脂细胞细胞分化

Nfic基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-20a靶向关系的验证被引量：3: 2016年; 目的构建核因子C(nuclear factor I-C,Nfic)基因3′非编码区(3′UTR)荧光素酶报告质粒,利用双荧光素酶报告基因验证micro RNA-20a(miR-20a)与其潜在靶基因Nfic的靶向关系。方法通过micro RNA靶基因预测软件Targetscan获取miR-20a与Nfic基因3′UTR潜在的互补结合位点;PCR扩增出Nfic基因3′UTR序列,将此序列克隆至荧光素酶报告载体p MIR-Report Luciferase;将重组荧光素酶报告质粒与miR-20a mimics(实验组)或NCmimics(对照组)共同转染293-AD细胞,收集细胞后通过双荧光素酶报告系统检测2组细胞的荧光素酶活性,从而对Nfic与miR-20a的靶向调节关系进行鉴定。将miR-20a mimics和NC mimics分别转染骨髓基质细胞系ST2,裂解细胞提取蛋白后采用Western blotting检测NFIC蛋白的表达水平。结果构建的重组荧光素酶报告质粒经酶切及测序鉴定正确。双荧光素酶报告基因检测显示,与对照组相比,miR-20a可以抑制Nfic 3′UTR报告基因载体的荧光素酶活性(P<0.05);Western blotting结果显示,与对照组相比,ST2细胞转染miR-20a mimics后NFIC蛋白表达水平明显下调。结论成功构建了Nfic基因3′UTR荧光素酶报告质粒,而miR-20a可以直接作用于Nfic基因3′UTR,抑制其荧光素酶活性。; 王珊李晓霞周杰王宝利; 关键词：微RNAS 骨髓基质细胞系荧光素酶报告基因

1,25-二羟基维生素D_3抑制脂肪细胞分化作用的研究被引量：5: 2013年; 目的研究1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对脂肪细胞分化的影响及其机制。方法以间充质干细胞系C3H10T1/2为研究对象,将其分为6组,分别为对照组、诱导分化组和4个不同剂量的1,25(OH)2D3处理组。其中对照组加入溶媒,诱导分化组加入脂肪细胞诱导分化试剂,1,25(OH)2D3处理组除了加入脂肪细胞诱导分化试剂外,予以10-9、10-8、10-7、10-6mol/L 1,25(OH)2D3处理。处理后5 d进行油红O染色,RT-PCR检测脂肪细胞特异性转录因子和Wnt/β-catenin信号通路相关因子表达水平,Western blot检测β-catenin蛋白水平。结果1,25(OH)2D3能够强烈抑制脂肪细胞生成,阻断脂肪细胞特异性转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)α及脂肪细胞表征因子aP2 mRNA表达,下调Wnt/β-catenin信号通路抑制因子分泌性卷曲相关蛋白1(sFRP1)mRNA,上调β连环素(β-catenin)蛋白水平。结论1,25(OH)2D3强烈抑制脂肪细胞分化,该作用可能与其激活Wnt/β-catenin信号通路有关。; 关晓慧王君郭菲周杰王宝利; 关键词：脂细胞骨化三醇 Β连环素

甲状旁腺素（1-34）对破骨细胞抑制性凝集素表达的调节及信号转导机制: 2014年; 目的探讨甲状旁腺素（parathyroidhormone，PTH）（1_34）对UMRl06成骨细胞表达破骨细胞抑制性凝集素（osteoclastinhibitorylectin，OCIL）基因mRNA的调节及其信号转导机制。方法培养大鼠UMRl06成骨细胞，采用胛H（1—34）及蛋白激酶A（PKA）、蛋白激酶C（PKC）、钙离子、MAPK通路的激动剂或阻断剂干预细胞不同时间后，收集细胞提取总RNA，实时荧光定量PCR检测OCILmRNA的表达水平。结果PTH（1-34）以剂量和时间依赖方式促进OCILmRNA表达。10nmol／LPTH（1-34）作用6h后促进OCILmRNA表达，24h上调效应最显著，约为对照组[未加入PTH（1-34）]的2．8倍。PTH（1_34）对OCILmRNA表达促进作用的起始时间及高峰时间均晚于其对RANKL的诱导和对OPG的抑制。蛋白激酶A通路激动剂福司可林（FSK）、双丁酰基环腺苷磷酸（db．cAMP）及钙离子载体A23187均不同程度促进OCILmRNA表达，最大上调效应分别约为对照组的4．2、4．5和5．1倍。蛋白激酶C激动剂佛波酯（PMA）作用早期（2～6h）抑制OCILmRNA表达，作用6h后最大抑制率达50％；PMA作用后期（24h）对OCILmRNA的抑制作用逆转为促进效应。PKA阻断剂KT5720、钙调蛋白（CaMK）阻断剂W-7、钙调蛋白激酶Ⅱ阻断剂KN-62及丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）阻断剂PD98059均下调胛H（1-34）诱导的OCILmRNA表达，最大抑制率分别为56％、61％、63％和50％。各信号通路间存在交互作用。MAPK通路阻断剂PD98059减少PKA激动剂FSK或db—cAMP诱导的OCILmRNA表达，抑制率分别为98％和63％；但不影响A23187诱导的OCILmRNA水平增高。结论PKA通路、钙／钙调蛋白通路和MAPK通路可介导PTH（1-34）诱导的OCILmRNA表达。; 郑纺权金星王宝利; 关键词：甲状旁腺素破骨细胞基因表达凝集素类

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国家自然科学基金(81271977)

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