广东省自然科学基金(990183)
- 作品数：10 被引量：13H指数：2
- 相关作者：马桂璋杨英张雪雁余琳汤郡更多>>
- 相关机构：广州医学院广州医学院第一附属医院中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金卫生部科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- EB病毒LMP1-CTAR2结构域的原核表达及蛋白质纯化被引量：1
- 2010年
- 目的:构建LMP1-CTAR2原核表达载体,纯化LMP1羧基端活化区2(CTAR2)蛋白。方法:通过RT-PCR技术从B95-8细胞中扩增EBVLMP1 CTAR2 cDNA,克隆至PGEM-T载体后测序。运用亚克隆技术构建PGEX-6P-3-CTAR2重组表达载体。用SDS-PAGE与western blot对表达产物进行鉴定,利用Sepharose 4B亲和层析柱对表达产物进行分离和纯化。结果:PCR扩增出225 bp的基因片段,测序结果与已知的LMP1 CTAR2序列吻合。成功构建PGEX-6P-3-CTAR2原核表达载体,western blot分析表明表达产物能与抗LMP1单克隆抗体特异结合。成功分离出Mr约37000的PGEX-6P-3-CTAR2融合蛋白,纯化出Mr约15000的LMP1 CTAR2蛋白。结论:成功获得EBV LMP1 CTAR2蛋白,可用于噬菌体筛库和CTAR2致瘤机制研究。
- 余琳张雪雁李孜
- 关键词：EPSTEIN-BARR病毒原核表达蛋白质纯化
- EB病毒LMP1与细胞信号转导被引量：1
- 2003年
- EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是Epstein和Barr于1964年最先从非洲恶性淋巴瘤组织培养中发现的一种病毒,在分类学上将EBV归入疱疹病毒γ亚科嗜淋巴细胞病毒属的DNA病毒.
- 张雪雁马桂璋
- 关键词：EBV信号转导
- EB病毒LMP1 CTAR23蛋白特异性结合短肽的筛选被引量：2
- 2010年
- 目的利用噬菌体12肽库筛选能与EB病毒(EBV)LMP1 CTAR23蛋白高效结合的短肽。方法利用亲和层析柱加酶切的方法纯化CTAR23蛋白,并用其筛选噬菌体12肽库。通过夹心ELISA法分析噬菌体克隆与CTAR23蛋白的亲和力。通过硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定,并对阳性克隆进行测序及序列分析。结果对12肽库进行3轮筛选后,噬菌体克隆具有良好的富集效果。ELISA提示筛选出来的噬菌体克隆能与CTAR23蛋白高效结合。硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100%,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列HVSLHKHYPTAS。结论噬菌体短肽HVSLHKHYPTAS为研究LMP1致瘤机理、开发拮抗LMP1蛋白的小分子短肽类药物奠定坚实的基础。
- 余琳张雪雁杨英
- 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白1噬菌体随机肽库
- EB病毒潜伏膜蛋白1羧基端活化区域2蛋白特异性结合短肽的筛选
- 2011年
- 目的 利用噬菌体12肽库筛选能与EB病毒潜伏膜蛋白1（LMPl）羧基端活化区域（CTAR）2蛋白特异性结合的短肽.方法 用纯化的CTAR2蛋白筛选噬菌体12肽库.通过夹心ELISA方法分析噬菌体克隆与CTAR2蛋白的亲和力.利用硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定,并对阳性克隆进行测序及序列分析.结果 CTAR2蛋白对噬菌体12肽库进行3轮筛选,第3轮的产率是第1轮的143倍[（3.0×10^-6）/（2.1×10^-8）],噬菌体克隆得到较好的富集.ELISA方法提示筛选出来的噬菌体克隆能与CTAR2蛋白高效结合.硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100％.测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列：GLKHHSPGLLLY.结论 筛选出与CTAR2蛋白特异性结合的短肽序列GLKHHSPGLLLY,为研究LMP1致瘤机制和开发拮抗LMP1蛋白的小分子短肽类药物提供实验依据.
- 张雪雁杨英余琳
- 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白1噬菌体随机肽库
- EB病毒LMP1 CCT蛋白特异性结合短肽的筛选
- 2006年
- 目的筛选能与EBVLMP1CCT蛋白高效结合的短肽。方法利用亲和层析和酶切的方法纯化CCT蛋白,并用CCT蛋白筛选噬菌体12肽库。通过夹心ELISA方法分析噬菌体克隆与CCT蛋白的亲和力。通过硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定。并对阳性克隆进行测序分析。结果对肽库进行3轮筛选后,噬菌体克隆具有良好的富集效果。ELISA方法提示筛选出来的噬菌体克隆能与CCT蛋白高效结合。硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100%,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列:IQMPPKWPWPAA。结论从噬菌体肽库中筛选到的噬菌体短肽IQMPPKWPWPAA为探讨LMP1致瘤机理、开发抗鼻咽癌短肽药物及基因疫苗奠定了实验基础。
- 余琳张雪雁杨英马桂璋
- 关键词：LMP1
- EB病毒LMP1蛋白CTAR23结构域的原核表达及纯化被引量：1
- 2004年
- 目的获得纯化的LMP1CTAR23结构域蛋白。方法用RT-PCR方法从B95-8细胞中扩增EBVLMP1CTAR23结构域的cDNA,将其克隆至PGEM-Teasy载体后进行测序鉴定。亚克隆至原核表达载体PGEX-6P-3,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导重组菌株表达。用SDS-PAGE与Westernblot对表达产物进行鉴定,用Sepharose4B亲和层析柱对表达产物进行纯化,PreScissionProteas酶对融合蛋白进行解离。结果扩增的LMP1CTAR23长度为357bp,测序结果与已知序列吻合。获得PGEX-6P-3-CTAR23原核表达菌株,Westernblot表明重组蛋白能被LMP1单克隆抗体特异结合。获得约42000u的PGEX-6P-3-CTAR23融合蛋白,分离纯化出约13000u的LMP1CTAR23蛋白。结论成功获得EBVLMP1CTAR23蛋白,为研究LMP1致瘤机制,研制生物抗癌药物奠定基础。
- 张雪雁杨英马桂璋
- 关键词：EB病毒LMP1原核表达
- EBV-LMP1 cDNA的克隆测序与原核表达质粒构建被引量：4
- 2002年
- 目的 克隆EBV LMP1cDNA ,构建EBV LMP1基因的原核表达重组质粒。方法 通过RT PCR技术从B95 8细胞中扩增EBV LMP1cDNA ,克隆至pGEM Teasy载体上并测序 ;利用引物上的BamHⅠ与HindⅢ酶切位点将LMP1基因插入载体pET 32a,转化JM10 9菌。提取质粒 ,限制性内切酶消化 ,琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果 扩增的LMP1cDNA长度为 115 8bp ,测序结果与已知序列吻合 ,重组原核表达质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子。结论 成功克隆了EBV LMP1cDNA ,并构建了pET 32a LMP1原核表达载体 。
- 林勇平吴淑华杨英汤郡马桂璋
- 关键词：LMP1CDNA原核表达
- Epstein-Barr病毒LMP1蛋白羧基端的克隆与原核表达被引量：2
- 2003年
- 目的 构建PGEX 6P 3 CCT原核表达载体 ,获得大量纯化的LMP1羧基端蛋白。方法 通过RT PCR技术从B95 8细胞中扩增EBVLMP1CCTcDNA ,克隆至PGEM Teasy载体上并测序。利用引物上的BamHI与EcoRI酶切位点将CCT基因插入PGEX 6P 3,转化大肠杆菌BL2 1 ,限制性内切酶消化鉴定。IPTG诱导重组菌株表达 ,用SDS PAGE与Westernblot对表达产物进行鉴定 ,并用Sepharose 4B亲和层析柱对表达产物进行纯化 ,PreScissionProteas酶对融合蛋白进行解离。结果 扩增的LMP1CCT长度为 5 97bp ,测序结果与已知序列吻合。重组子经酶切鉴定 ,获得PGEX 6P 3 CCT原核表达菌株 ,Westernblot表明重组蛋白能被LMP1单克隆抗体特异结合。获得约5 1kDa的PGEX 6P 3 CCT融合蛋白 ,分离纯化出约 2 1kDa的LMP1CCT蛋白。结论 成功获得EBVLM1CCT蛋白 ,为研究LMP1致瘤机制 。
- 张雪雁汤郡杨英马桂璋
- 关键词：LMP1原核表达
- 噬菌体展示肽库技术及其应用被引量：3
- 2006年
- 噬菌体展示肽库技术是将随机多肽文库表达于丝状噬菌体的表面,并通过亲和筛选的方法找到目的基因及其表达的肽段。该技术在抗原表位分析、蛋白质与蛋白质之间相互作用、疫苗的研制和多肽药物的开发等方面都显示了独特的优势。
- 余琳马桂璋
- 关键词：细菌噬菌体肽库表位蛋白质构象
- EBV-LMP1基因杆状病毒表达载体的构建及其在昆虫细胞中的表达被引量：2
- 2003年
- 目的 构建EBV LMP1基因的杆状病毒重组供体质粒 ,包装重组LMP1的杆状病毒 ,感染昆虫细胞进行表达。方法 先将已克隆的LMP1cDNA与线性化的pFASTBACHTb进行连接 ,使pFASTBACHTb LMP1与DH1 0BAC感受菌进行转座重组 ,利用抗性及蓝白斑筛选重组Bacmid/LMP1克隆 ,提取Bacmid/LMP1转染昆虫细胞Sf9包装杆状病毒 ,利用病毒感染Sf9细胞进行蛋白表达 ,通过免疫荧光、SDS PAGE和Western blot检测表达情况。结果 获得了重组LMP1的杆状病毒 ,细胞能表达出与LMP1单抗结合的蛋白 ,分子量为 6 3kDa左右 ,细胞可直接分泌LMP1蛋白至上清。结论 LMP1能在昆虫细胞中获得良好表达 。
- 林勇平吴淑华杨英汤郡马桂璋
- 关键词：LMP1杆状病毒表达系统昆虫细胞
