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氨基胍对内毒素活化小鼠巨噬细胞L-arginine转运及CAT-2表达影响的实验研究: 2011年; 目的:通过氨基胍(AG)干预内毒素活化小鼠巨噬细胞RAW264.7模型,观察NO的产生、左旋精氨酸(L-Arg)转运以及碱性氨基酸转运体-2(CAT-2)mRNA的表达,旨在研究氨基胍对L-Arg跨膜转运及CAT-2表达的影响。方法:实验分为四组,即对照组,LPS对照组,AG组,AG+LPS组。接种RAW264.7细胞于培养板后,37℃、5%CO2培养箱培养24 h,将AG组和AG+LPS组换以含AG 1 mmol/L的DMEM培养液,30 min后四组均换以新鲜DMEM培养液,其中LPS对照组和AG+LPS组加入LPS,继续培养18 h,检测细胞合成NO水平、L-Arg摄取率和CAT-2 mRNA表达。结果:与对照组比较,AG预处理后的RAW264.7细胞,经LPS活化后NO水平、L-Arg摄取率、CAT-2 mRNA水平显著降低。结论:AG作为一种特异的诱生型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂,不仅可抑制iNOS的活性,而且还可以从基因水平上抑制L-Arg转运体CAT-2的表达,进而阻断L-Arg的跨膜转运和NO合成。; 黄传江黄骞宋添谋吴性江李秋荣李宁; 关键词：氨基胍左旋精氨酸

L-精氨酸转运体-2的siRNA表达载体的构建及鉴定: 2012年; 目的:构建氨基酸转运体-2(CAT-2)的靶向小分子干扰RNA(siRNA)表达载体质粒,并测序鉴定,为下一步研究靶向siRNA对CAT-2蛋白表达和L-argine/iNOS/NO通路的影响建立基础。方法:根据L-精氨酸转运体CAT-2的mRNA序列及siRNA设计原则,并经BLAST比对,设计合成4对siRNA寡聚单链DNA,退火成双链dsDNA,用载体构建试剂盒BLOCK-iTTMPol II miR RNAi Expression Vector Kit with EmGFP进行重组质粒构建,将4对dsDNA分别插入到siRNA表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR中,构建4个siRNA表达质粒,并转化至感受态细菌DH5。筛选阳性克隆并提取重组质粒后测序分析。结果:CAT-2的siRNA重组载体质粒测序结果证实表达载体构建成功。结论:L-精氨酸转运体CAT-2 siRNA表达载体质粒成功构建,为下一步研究靶向siRNA对CAT-2蛋白表达和L-arg/iNOS/NO通路的影响建立基础。; 黄传江黄骞罗冰吴性江李宁; 关键词：左旋精氨酸

顽固性便秘患者金陵术前后肠道菌群变化的研究被引量：24: 2012年; 目的研究顽固性便秘患者粪便和结肠黏膜菌群在行金陵术切除大部结肠前后的改变。方法采集健康人群及顽固性便秘患者术前、术后6个月粪便和结肠黏膜样本,提取总细菌核酸,应用实时荧光定量PCR技术对样本中优势菌群进行定量分析。结果定量PCR结果显示顽固性便秘组粪便及黏膜样本优势菌群数量较健康人群无显著区别(P>0.05);粪便样本中双歧杆菌属、乳酸杆菌属明显低于正常人群(P<0.05),黏膜样本中双歧杆菌明显低于正常人群(P<0.05)。术后6个月粪便样本中优势菌群数量较术前显著降低(P<0.05),黏膜优势菌群数量无显著变化(P>0.05),粪便及黏膜样本中双歧杆菌属和乳酸杆菌属的数量较术前显著上升(P<0.05),达到或接近正常人群水平。便秘组粪便样本中甲烷菌数量与正常对照组无显著区别(P>0.05);术后较术前也无显著变化(P>0.05),但显著少于正常对照组(P<0.05)。便秘组黏膜样本中甲烷菌数量显著少于正常对照组(P<0.05),术后则显著增多(P<0.05),达到正常对照组水平。结论金陵术外科治疗顽固性便秘缓解患者症状的同时,有助于结肠菌群结构恢复正常。; 冯啸波苏勇姜军汪志明黄骞胡雄辉李宁朱伟云黎介寿; 关键词：便秘结肠切除术肠黏膜

肠上皮细胞中性氨基酸载体B^0AT1的真核表达及稳定转染体系的建立被引量：2: 2009年; 目的:构建可表达人中性氨基酸载体B0AT1基因的真核表达载体,建立重组质粒转染的Hela细胞系,筛选出稳定表达人B0AT1的细胞株。方法:提取人正常小肠上皮细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增出B0AT1基因片段,EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切后,将其插入至真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组表达质粒pcDNA3.1-B0AT1,转化E.coliDH5α菌株感受态细胞,将阳性克隆脂质体法转染Hela细胞,经G418筛选获得稳定表达株,用RT-PCR法检测B0AT1基因的mRNA表达。结果:从小肠上皮细胞中成功克隆到人B0AT1基因。酶切和序列测定表明已成功构建真核表达载体pcDNA3.1-B0AT1,将此重组质粒转染的Hela细胞,可稳定表达人B0AT1基因,并筛选出稳定表达B0AT1的Hela细胞系。氨基酸摄取实验证实,转染pcDNA3.1-B0AT1的Hela细胞具有B0AT1基因的生物学活性。结论:重组人中性氨基酸载体B0AT1克隆成功,并在Hela细胞中获得稳定表达。; 黄骞钮凌颖王斌朱维铭李宁; 关键词：肠上皮细胞克隆基因表达

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国家自然科学基金(30801089)