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国家自然科学基金(30901536)
国家自然科学基金(30901536)
作品数:
2
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相关作者:
李新钢
周伟
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王磊
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相关机构:
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人脑胶质瘤中EMP3和PCDH-γ-A11基因的甲基化调控
被引量:5
2010年
目的研究胶质瘤中EMP3和PCDH-γ—A11基因的启动子甲基化与mRNA表达的关系,分析其在胶质瘤恶性进展中的启动子甲基化调控机制。方法使用甲基化PCR(MSP)检测EMP3和PCDH-γ-A11基因在胶质瘤、正常脑组织及胶质瘤细胞株中的基因启动子甲基化情况;Real—timePCR检测部分胶质瘤中两个基因的mRNA表达情况;统计学方法分析其基因启动子甲基化、mRNA表达及临床情况间的关系。检测去甲基化试剂5-Aza—CdR对U251和SHG-44细胞株中两个基因启动子甲基化和mRNA表达的影响。结果在88例胶质瘤中,EMP3基因启动子甲基化发生率为47.7%(42/88),其甲基化率随胶质瘤恶性程度的增加而增高;PCDH-γ-A11基因启动子甲基化发生率为86.4%(76/88),其甲基化率随胶质瘤恶性程度的增加而降低。各级别胶质瘤中EMP3和PCDH-γ-A11基因的mRNA表达与正常脑组织相比均下调(P〈0.01)。U251和SHG-44细胞株中均检测到EMP3和PCDH-γ-A11基因的启动子甲基化,并且5-Aza—CdR能重新激活两个基因的表达。结论胶质瘤中EMP3和PCDH-γ-A11基因启动子甲基化可能导致了其mRNA表达下调。EMP3和PCDH-γ-A11基因启动子甲基化可能成为胶质瘤恶性程度和预后评价的分子生物学标记,也可为胶质瘤的基因治疗提供新的靶点。
姜政
周伟
李新钢
江玉泉
王磊
王东海
王新宇
李学恩
关键词:
神经胶质瘤
基因
甲基化
HIF-1α慢病毒干扰载体构建及GL261小鼠胶质瘤稳定沉默细胞系的建立
2013年
目的研究短发夹状RNA(shRNA)干扰慢病毒表达载体对小鼠胶质瘤GL261细胞系中乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的沉默效应。方法构建针对小鼠胶质瘤GL261细胞HIF-1αmRNA的不同干扰靶点的4个shRNA表达载体,筛选出HIF-1α基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的Oligo DNA,构建pLenti6.3-shR-NA3慢病毒载体感染靶细胞GL261,获得稳定沉默HIF-1α细胞株,利用实时定量PCR和Western blot方法检测稳定细胞株HIF-1α的沉默效应。结果成功构建了具有HIF-1α沉默效应的慢病毒干扰载体,通过倍比稀释测定干涉病毒滴度为1.15×108TU/mL。实时定量PCR和Western blot实验均证实慢病毒转染后,GL261细胞株中HIF-1α表达水平明显降低。结论针对HIF-1α基因不同位点的不同shRNA具有干扰效率的差异。特异性的shRNA可稳定地介导HIF-1α基因沉默。
徐洋洋
姜政
周伟
江玉泉
李新钢
关键词:
慢病毒
基因沉默
乏氧诱导因子-1Α
小鼠
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