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具β-半乳糖苷酶转苷活性的植物乳杆菌的筛选和鉴定: 2013年; 以乳糖为唯一碳源,5-溴-4-氯-3-吲哚-β--半乳糖苷(X-gal)为显色剂,从健康婴儿粪便中筛选出6株产β-半乳糖苷酶水平较高,生长情况较好的菌株。在37℃下,通过发酵产酶,测定其邻硝基苯-β-D-半乳糖苷(ONPG)水解能力。通过形态学鉴定、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析,鉴定为植物乳杆菌。提取细菌总基因组并克隆出分解乳糖的基因lacLM,通过翻译后的氨基酸保守区域比对,鉴定该酶为糖苷水解酶家族2(GH2)。初步分析了氨基酸序列与其酶活大小的关系。; 姜金华顾青; 关键词：Β-半乳糖苷酶 RDNA 酶活

1株产细菌素乳酸菌的鉴定和细菌素的分离纯化被引量：16: 2013年; 从婴儿粪便中分离获得1株能够产生抑菌活性物质的菌株,经生理生化和16S rDNA鉴定,该菌为干酪乳杆菌,命名为Lactobacillus casei LZ55。在排除有机酸、过氧化氢的干扰后,该菌发酵上清液仍有明显的抑菌活性;而将发酵上清用蛋白酶K、胃蛋白酶和胰蛋白酶处理后抑菌活性丧失,表明该菌株产生的抑菌活性物质具有蛋白质性质,初步确定为1种细菌素。抑菌谱测定结果表明,该细菌素不仅能够抑制革兰氏阳性菌(单增李斯特氏菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等),而且能够抑制革兰氏阴性菌(大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、福氏志贺氏菌等)。通过大孔吸附树脂(XAD-2)初步提纯该细菌素,经SDS-PAGE试验分析,该细菌素分子质量为4.2 ku。; 张小美楼秀玉顾青; 关键词：乳酸菌细菌素纯化

清酒乳杆菌ZJ220产细菌素的研究被引量：8: 2015年; 从生鲜牛乳中分离获得1株能够产生抑菌活性物质的菌株,在排除有机酸、过氧化氢的干扰后,该菌发酵上清液仍有明显的抑菌活性。以蛋白酶K、胃蛋白酶和胰蛋白酶处理发胶上清液后其抑菌活性消失,试验表明该菌株产生的抑菌活性物质具有蛋白质性质,初步确定为一种细菌素。经生理生化和16S rDNA鉴定该菌为清酒乳杆菌,命名为Lactobacillus sakei ZJ220。细菌素经疏水洗脱、离子交换、凝胶过滤3步法得到纯化。经Tricine-SDS-PAGE分析该细菌素分子质量为6.0 ku。抑菌谱测定结果表明,该细菌素不仅能抑制革兰氏阳性菌,而且能抑制革兰氏阴性菌。经不同酸、热处理,该细茵素仍有较好的抑菌活性。; 沈雷赵乙桢刘晴张晨顾青; 关键词：清酒乳杆菌乳酸菌细菌素分离纯化

鼠李糖乳杆菌ZJ225细菌素的分离纯化及其特性研究被引量：10: 2015年; 从新鲜牛奶中分离筛选出1株有抑菌活性的乳酸菌,经形态学观察、生理生化分析及16S rDNA基因序列同源性分析,该菌为鼠李糖乳杆菌,命名为ZJ225。通过排除有机酸、过氧化氢对乳酸菌抑菌活性的干扰试验,该菌发酵上清液仍有明显的抑菌活性;而用胰蛋白酶处理后,该菌的抑菌活性几乎完全丧失,说明该菌产生的活性物质是一种细菌素。该菌具有很广的抑菌谱,不仅对革兰氏阳性菌(藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、单增李斯特菌、表皮葡萄球菌等)有抑菌活性,而且对革兰氏阴性菌(大肠杆菌、铜绿假单胞菌等)有抑菌作用,甚至对真菌类(酿酒酵母)也有一定程度的抑制作用。经XAD-1180大孔树脂初步分离纯化的细菌素在121℃处理10 min,仍保持很强的抑菌活性,说明该细菌素的热稳定性很好。通过SDS-PAGE蛋白电泳分析该细菌素分子质量为4.4 ku。; 赵乙桢沈雷孙亚链姜雄韬顾青; 关键词：鼠李糖乳杆菌细菌素分离纯化抑菌特性

抗烟曲霉乳酸菌菌株的筛选、鉴定及特性初步研究被引量：4: 2013年; 采用双层平板法从婴儿粪便中筛选出一株对烟曲霉具有抑制作用的菌株,通过形态学、生理生化特性及16S rDNA序列同源性分析,鉴定该菌株为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei),命名为LZ54。分别经pH、蛋白酶、XAD-2大孔树脂处理该菌株发酵液上清后,发现LZ54发酵液在酸性条件下具有较强的抗烟曲霉活性,但在碱性条件下其抑菌物质迅速失活;发酵液上清经胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶K处理后失去部分抑菌活性,表明该菌株发酵液中抗烟曲霉的物质具有蛋白质属性;发酵液经XAD-2大孔树脂处理后仍具有抑制烟曲霉活性,并通过SDS-PAGE方法测得该抑菌物质的分子量约为5 kD。; 楼秀玉张晨张小美沈雷顾青; 关键词：烟曲霉副干酪乳杆菌抗菌肽

1株分泌细菌素屎肠球菌ZJ19的筛选和鉴定被引量：11: 2014年; 从浙江大学医学院附属妇产科医院的健康初生婴儿粪便中分离获得76株乳酸菌,通过琼脂平板扩散法筛选到1株乳酸菌菌株,该菌不仅对革兰氏阳性菌,如单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有抑菌活性,同时对大肠杆菌、沙门氏菌、副溶血性杆菌等阴性菌也有较好的抑菌活性。通过排除有机酸、过氧化氢等的干扰后,该菌发酵液离心后的上清液仍有较强的抑菌活性,用蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶分别处理后该上清液均失去抑菌活性,由此确定该乳酸菌产生的抑菌活性物质具有蛋白质属性,为1种细菌素。该细菌素具有热稳定性,在pH 3.75,121℃热处理30 min,抑菌活性仍保持在80%以上。经过生理生化试验和16S rDNA序列分析,鉴定菌株为屎肠球菌,命名为Enterococcus faecium ZJ19。; 王净净顾青; 关键词：乳酸菌屎肠球菌细菌素

产细菌素乳酸菌原生质体融合被引量：6: 2017年; 原生质体融合是一种直接有效的生物技术手段,可以快速改变微生物性状。作为一种20世纪70年代发展起来的基因重组技术,它有着其它技术无可比拟的优势,可以克服种间的不育性,使融合子同时具有双亲的优良性状。植物乳杆菌ZJ316具有良好的抑菌性,本试验中通过原生质体融合技术进一步提高其抑菌活性。群体感应系统(QS系统)在细菌素调控合成过程中起着重要的作用。本实验室对植物乳杆菌ZJ316全基因组进行测序,发现其QS系统中缺少两个重要的调控基因:plnC和plnD。然而,通过PCR验证,发现另一株具有良好抑菌活性的植物乳杆菌ZJQ基因组中含有plnC和plnD基因,说明成功获得植物乳杆菌ZJ316与植物乳杆菌ZJQ原生质体融合子,增加了细菌素产量,提高了抑菌活性。; 姜雄韬顾青; 关键词：原生质体融合细菌素抑菌活性

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浙江省自然科学基金(Z3110399)