湖北省科技攻关计划(2006AA202A05)
- 作品数：25 被引量：152H指数：6
- 相关作者：毕丁仁程国富张万坡谷长勤胡薛英更多>>
- 相关机构：华中农业大学湖北省农业科学院中国农业大学更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 禽流感病毒HA1蛋白的原核表达及其免疫原性的初步研究
- 2007年
- 从H9N2亚型禽流感病毒感染的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,RT-PCR克隆全长血凝素(He-magglutinin,HA)基因,并进一步克隆HA的主要抗原区HA1基因。将HA1克隆到原核表达载体pGEX-KG,与谷胱苷肽(GST)融合表达,表达的融合蛋白GST-HA1以包涵体形式存在。包涵体经变性、复性处理,Western blot分析表明,表达蛋白具有良好的免疫学活性。ELISA检测发现,GST-HA1只能与H9亚型禽流感病毒抗体发生反应,而与H5和H7亚型禽流感病毒抗体无交叉反应。进一步将纯化的融合蛋白与佐剂混合后免疫Balb/c小鼠,免疫小鼠体内产生了较高滴度的特异性抗体。制备的HA1蛋白特异性强,具有良好的免疫原性,为禽流感病毒的鉴别诊断和禽流感疫苗开发奠定了基础。
- 吴仁蔚张万坡胡思顺肖运财毕丁仁
- 关键词：禽流感病毒原核表达
- 湖北省禽白血病自然病例的病理学诊断及p53和Bcl-2基因表达情况的观察被引量：3
- 2007年
- 应用组织病理学和SABC免疫组织化学技术,对湖北省武汉市的2批14日龄和33日龄疑似禽白血病肉鸡进行了病理学诊断,并观察了病鸡肝肿瘤组织中p53基因和Bcl-2基因的表达情况。剖检可见病鸡肝、肾、脾均不同程度肿胀,组织病理学检查在肝、肾、心等脏器可见散在或聚集成团的骨髓瘤细胞,胞浆内充满球形的嗜酸性颗粒;在病鸡肝肿瘤组织中p53和Bcl-2基因均呈阳性表达,诊断为J亚群禽白血病(ALV-J),提示p53基因和Bcl-2基因与肉鸡J亚群禽白血病有关。
- 胡冬姣张丽娜李慧谷长勤程国富张万坡胡薛英周诗其
- 关键词：禽白血病病理学诊断P53基因BCL-2基因
- 鸡白细胞介素-6原核表达及双抗夹心ELISA方法的建立被引量：1
- 2011年
- 应用分子生物学技术原核表达ChIL-6,以ChIL-6重组蛋白为免疫原,按免疫程序分别制备兔抗和鼠抗IL-6重组蛋白的多克隆抗体。应用此抗体建立双抗夹心ELISA方法后,为了优化此方法本试验对该方法的最佳试验条件、标准曲线、重复性和初步应用进行确定。结果显示,经SDS-PAGE和Western-blot分析,表明ChIL-6在大肠杆菌中正确表达,为了建立检测ChIL-6的双抗夹心ELISA方法,本试验应用表达的重组蛋白制备兔抗和鼠抗多克隆抗体。建立的双抗夹心ELISA方法最佳反应条件为包被抗体的质量浓度为50mg/L,4℃过夜;酶标二抗稀释度为1∶400,37℃1h;应用该方法检测感染金黄色葡萄球菌后的ChIL-6,其结果与本实验室之前应用人的ELISA试剂盒检测的结果相似。结果表明,本试验建立的检测ChIL-6的双抗夹心ELISA方法可用于临床。
- 李卫彭俊平谷长勤胡薛英张万坡程国富
- 关键词：鸡白细胞介素-6原核表达
- 禽流感病毒NS1蛋白与鸡LY6E蛋白间的相互作用被引量：1
- 2008年
- 利用细菌双杂交系统,研究了禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)非结构蛋白(Nonstructurol1protein,NS1)和鸡淋巴细胞抗原复合体(LY6E)蛋白之间的相互作用。用RT-PCR方法克隆了AIV NS1基因和鸡LY6E基因的全长开放阅读框,将其克隆于细菌双杂交系统中的2个质粒中,成功构建了重组诱饵质粒pBT/NS1和重组目标质粒pTRG/LY6E。SDS-PAGE电泳表明,IPTG诱导后它们均得到正确表达。将重组质粒pBT/NS1和pTRG/LY6E共转化报告菌株,获得的阳性共转化子在含有3-AT和链霉素的组氨酸缺失的M9+筛选培养基上生长,表明AIV NS1蛋白和鸡LY6E蛋白之间存在相互作用,为AIV致病机制的研究提供了新的资料。
- 张万坡田文霞李建丽程国富毕丁仁
- 关键词：NS1蛋白蛋白相互作用
- 苏云金芽胞杆菌无晶体突变株对小鼠和雏鸡的安全性被引量：1
- 2007年
- 以苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB304为受试菌株,对小鼠和雏鸡进行安全性测试,考察BMB304在鸡肠道中的存留情况,以探索利用苏云金芽胞杆菌S-层表面展示系统研制热稳定性禽用口服活菌疫苗的安全性和可行性。小鼠腹腔一次性注射1010CFUBMB304菌液1.0mL,观察14d,未发现有急性毒性反应。小鼠饮用含BMB304108CFU/mL、107CFU/mL和106CFU/mL的饮用水28d,各组小鼠精神和饮食正常,剖检未见异常变化,各剂量组小鼠体重变化、脏器系数、血常规指标及血液生化指标与对照组无显著性差异。雏鸡24h内灌服1010CFUBMB304芽胞液1.0mL,14d内未出现急性毒性反应。饲喂雏鸡含BMB304芽胞108CFU/g、107CFU/g和106CFU/g饲料28d,雏鸡精神和饮食正常,剖检未见异常变化,各剂量组的日增重与对照组差异不显著。饲喂雏鸡含BMB304芽胞106CFU/g饲料3d后,经测定,芽胞能在肠道中萌发并至少存留5d但不超过7d。研究表明,苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB304对小鼠和雏鸡安全无毒,且能在鸡肠道内暂时定植,能被用于研制在细胞表面展示外源抗原并能常温长期保存的新型禽用口服疫苗。
- 刘梅胡思顺孙焕毕丁仁孙明
- 关键词：苏云金芽胞杆菌小鼠雏鸡安全性
- 新型鸭肝炎病毒感染雏鸭组织内病毒抗原的分布被引量：5
- 2007年
- 应用免疫组织化学方法,对人工感染新型鸭肝炎病毒雏鸭体内的病毒分布进行了动态观察。结果表明:接种后不同时间,在肝脏、脾脏、胰脏、胸腺和法氏囊组织中均可检测到新型鸭肝炎病毒抗原,而肾脏、心脏、脑组织中均未检测到病毒抗原。病毒抗原均位于阳性细胞的细胞质中。研究结果提示,感染雏鸭的肝脏和胰脏的组织病理变化与病毒的分布有关。
- 朱方伟谷长勤程国富苏敬良佘锐萍胡薛英
- 关键词：新型鸭肝炎病毒病毒分布
- 胶体金试纸条检测H9亚型禽流感病毒的研究被引量：30
- 2008年
- 对禽流感病毒H9亚型血凝素单克隆抗体4C4进行胶体金标记,喷涂于玻璃纤维上制成金标垫,鸡抗AIVIgG和羊抗鼠IgG分别包被于硝酸纤维素(NC)膜上作为检测线和质控线,制作禽流感H9亚型免疫层析检测试纸条。验证结果表明,试纸条操作简单,肉眼于10 min内可判定结果,对H9亚型禽流感病毒及其标准血凝抗原具有高度特异性,与其它亚型禽流感病毒标准抗原及其它禽类病毒没有交叉反应,检测灵敏度比HA试验高4倍以上。试纸条在室温保存6个月、4℃保存12个月,其特异性及灵敏度没有明显变化。对实验室送检及临床采集的共311份喉头拭子进行检测,结果与本室研制的禽流感ELISA试剂盒总符合率为92%,随机选取10份阳性样品经病毒分离证实无一误检。结果证明,本研究建立的H9亚型禽流感病毒免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合用于H9亚型禽流感病毒的现场检测及鉴别诊断。
- 彭伏虎王政张进良张文通张展英胡思顺肖运才毕丁仁
- 关键词：禽流感病毒H9亚型单克隆抗体
- 氯气中毒对小鼠主要脏器水通道蛋白4表达的影响被引量：1
- 2010年
- 以昆明小鼠为研究对象,探讨氯气中毒对小鼠主要脏器(心、肝、脾、肺、肾和脑)水通道蛋白4表达的影响。将40只30日龄昆明小鼠随机分为试验组和对照组,用氯气诱发中毒性肺水肿模型,剖检观察各脏器病理变化。并运用免疫组化法(SABC)检测各脏器中水通道蛋白4的表达。结果显示试验组出现肺水肿的临床症状,除肝脏外其他脏器水通道蛋白4的表达明显高于对照组(P<0.01),HE染色见水肿典型病变。结论得出氯气中毒致使小鼠主要脏器的水通道蛋白4的表达上升,这可能与水通道蛋白4的转运水的功能直接有关。
- 谢长清程国富严攀胡薛英张万坡谷长勤
- 关键词：氯气小鼠水通道蛋白4
- 麻鸭和樱桃谷鸭的CD3ε、CD4、CD8α基因ORF克隆及序列分析被引量：5
- 2009年
- 【目的】分析比较中国部分品种鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列,为研究CD3ε链、CD4和CD8α链的结构和功能及其抗体的应用提供依据。【方法】利用RT-PCR,对麻鸭、樱桃谷鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列克隆测定,应用Clustal(X1.83)和DNAstar生物学软件分别与GenBank上公布的北京鸭CD3ε(AF378704)、CD4(AF378701)和CD8α(AF378373)基因ORF序列进行序列分析。【结果】麻鸭、樱桃谷鸭、北京鸭CD3ε和CD4基因ORF序列及所编码的氨基酸同源性为99%;北京鸭和麻鸭CD8α基因ORF序列同源性为99%,与樱桃谷鸭的同源性为95%。麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF序基因编码的氨基酸完全一致,与樱桃谷鸭的CD8α存在16处位点差异,其中胞外区有15个氨基酸的差异,使亲水性、抗原性以及此区域位于蛋白质表面的可能性都有明显差异。从遗传发生树得出樱桃谷鸭、北京鸭、麻鸭CD3ε和CD4的ORF序列相互之间的遗传关系近;樱桃谷鸭、麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF序列之间的遗传关系较远。【结论】樱桃谷鸭、北京鸭、麻鸭CD3ε和CD4的ORF序列遗传变异性低,樱桃谷鸭与麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF之间具有较高遗传变异性。
- 李卫白家媛许媛媛谷长勤张万坡程国富陈敏胡薛英
- 关键词：CD4CD8Α
- 禽多杀性巴氏杆菌脂蛋白E基因的原核表达及其对小鼠的免疫原性被引量：8
- 2011年
- 根据禽多杀性巴氏杆菌ATCC12 948株脂蛋白E基因(plpE)序列设计一对特异性引物,经PCR从禽多杀性巴氏杆菌C48-1株中扩增获得了全长plpE基因,大小约1kb。将plpE基因片段插入原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒pET-plpE。转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达获得了重组蛋白plpE。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白plpE约为37.8kD,与预期大小相符。Western blot检测结果表明,重组蛋白plpE能与C48-1菌体阳性血清发生特异性反应,用重组蛋白plpE免疫小鼠,二免后2周用10LD50 C48-1菌株攻毒即获得了100%的保护,表明该蛋白具有良好的免疫原性,为进一步的交叉保护性试验研究和禽霍乱亚单位疫苗研制奠定了基础。
- 崔卫涛胡思顺王延昭周晓芬李自力肖运才毕丁仁
- 关键词：禽巴氏杆菌原核表达免疫原性
