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河南省高校科技创新团队支持计划(2009HASTIT010)
河南省高校科技创新团队支持计划(2009HASTIT010)
- 作品数：13 被引量：135H指数：7
- 相关作者：刘兴友潘耀谦朱国坡郭延锋高均伟更多>>
- 相关机构：河南科技学院河南农业大学石河子大学更多>>
- 发文基金：河南省高校科技创新团队支持计划国家自然科学基金河南省杰出人才创新基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡传染性支气管炎病毒(IBV)ZZ2004株核衣壳蛋白基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2014年
- 本研究旨在克隆并表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的核衣壳蛋白(N)。根据IBV ZZ2004株的N基因设计1对引物,提取IBV ZZ2004株的RNA,利用RT-PCR技术扩增大小约1.23kb的片段,将其插入克隆载体pGEM-T构建pGEMT-N。将pGEM-T-N用EcoRⅠ和XhoⅠ进行双酶切,将酶切后的N基因片段克隆到表达载体pGEX-6P-1,转入大肠杆菌BL21(DE3)菌中,经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳,结果显示外源基因获得了表达且为可溶性蛋白;Western blotting检测结果显示N蛋白可与相应的IBV ZZ2004阳性血清发生特异性反应,结果表明N蛋白有一定的生物活性。本研究为IBV诊断试剂盒及新型IBV重组亚单位疫苗研制奠定基础。
- 贺会利徐敏余娟魏小兵闫艺婷勾肖晶刘兴友
- 关键词：核衣壳蛋白可溶性表达
- 鸡传染性支气管炎病毒弱毒株ZZ-V_(35)在鸡胚中的增殖规律被引量：1
- 2015年
- 为了研究鸡传染性支气管炎病毒弱毒株(IBV ZZ-V35)在鸡胚中的增殖规律,用尿囊腔接种法给11日龄的SPF鸡胚接种IBV ZZ-V35弱毒,并构建了阳性质粒,采用Taq Man探针实时定量PCR(real-time PCR)法建立了标准曲线,分别检测感染鸡胚尿囊液中36、48、52、56、60、64、68、72、76、80、88、96、120、144h的病毒含量。结果显示,在鸡胚发育不同的时间点IBV ZZ-V35弱毒的拷贝数分别为1.416×106、1.791×106、2.056×106、3.027×106、3.664×106、1.854×106、1.380×106、1.109×106、7.976×105、5.408×105、2.958×105、2.512×105、4.365×104、1.130×104。研究发现,IBV ZZ-V35弱毒的拷贝数在60h达到最高值,即3.664×106。这为IBV ZZ-V35弱毒株疫苗的研究提供了新的依据。
- 闫艺婷潘耀谦王青勾肖晶刘静黄亚明杨激辉刘兴友
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒鸡胚尿囊液增殖规律
- 实时荧光定量PCR技术原理与应用被引量：47
- 2010年
- 实时荧光定量PCR(real-ti me fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术,它具有特异性强、PCR污染少、自动化程度高等特点。作者就实时荧光定量PCR技术的主要原理及目前在分子生物学领域,病原体和肿瘤等方面的检测和诊断应用进行了概述。
- 周晓丽朱国坡李雪华王艳玲刘兴友
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 细胞凋亡常用检测方法的研究进展被引量：14
- 2010年
- 近年来,细胞凋亡一直是生命科学和医学领域各专业的研究热点。作者综述了细胞凋亡的形态学、生物化学及分子生物学、酶学、免疫学和流式细胞仪法等常用的细胞凋亡检测方法,并对各种方法的优点及局限性进行了简要概述。
- 郭延锋高均伟朱国坡刘兴友
- 关键词：细胞凋亡
- 鸡传染性支气管炎病毒变异机制及致弱方法研究进展被引量：7
- 2013年
- 因鸡传染性支气管炎病毒(IBV)基因组RNA聚合酶缺乏校正功能和其特有的套式转录方式,IBV容易发生变异,导致新的变异毒株不断出现,使现有的疫苗难以完全满足预防的需要,这就要求根据流行特点不断研究新的疫苗。根据IBV的变异机制,利用鸡胚连续传代、改变生长温度和基因工程方法可人工获得致弱的IBV毒株,为研究IBV弱毒疫苗毒株奠定基础。论文就近几年来IBV的变异情况及致弱方法研究进展做一综述,为更好的预防IBV提供参考。
- 陈明艳余娟潘耀谦郭东光陈伶俐徐敏贺会利魏小兵刘兴友
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒
- 沉默病毒编码的miRNA——新型抗病毒治疗法研究进展被引量：1
- 2012年
- miRNA是一类在转录后水平调节基因表达的非编码RNA。病毒编码的miRNA在调控病毒基因自身表达及病毒与宿主相互作用方面起着重要作用,这一类miRNA有助于提高病毒的致病性。因此,通过使用与病毒miRNA互补的单链核苷酸即抗miRNA寡核苷酸(anti-miRNA oligonucleotides,AMOs)来抑制病毒miRNA的表达,从而沉默其功能达到抑制病毒复制的效果,这可能成为一种治疗病毒性感染的新方法。文章描述了研究较深入的病毒miRNA与其功能及AMOs的修饰方式,并讨论了AMOs应用的可能性。
- 夏银可潘耀谦朱广蕊刘兴友
- 关键词：反义寡核苷酸RNA干扰
- 鸡传染性支气管炎病毒研究进展被引量：20
- 2014年
- 鸡传染性支气管炎病毒(IBV)主要侵害鸡的呼吸系统和泌尿生殖系统,可以引起鸡的呼吸道症状、肾脏损害、产蛋量和蛋的品质下降。由于IBV基因组的RNA酶缺乏严密的校正功能,容易发生变异,使该病毒的基因型、血清型复杂,给该病的防控带来很大的困难,从而给养殖业造成了重大经济损失。从2003年起对IBV的分子生物学方面的研究也成了热点,寻找防控此病的有效措施。论文概述了近年来在IBV的基因组、结构蛋白、分子诊断及反向遗传学技术等方面的研究进展,为IBV的研究和防控提供参考。
- 贺会利魏小兵欧长波徐敏闫艺婷刘明成勾肖晶刘兴友
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒基因组结构结构蛋白分子生物学诊断
- 荧光定量PCR方法的原理及其在研究病毒在动物体内分布规律的应用被引量：12
- 2010年
- 研究病毒在动物体内的分布情况,主要是为了掌握病毒在动物体内的生长繁殖规律,找到病毒的靶细胞和靶器官,为进一步研究其致病机理和防制技术提供试验依据。荧光定量PCR法具有定量准确、特异性强、自动化程度高等特点,是研究病毒分布规律的主要方法之一,作者综述了此方法的原理及应用。
- 高均伟郭延锋王三虎潘耀谦王丽荣朱国坡刘兴友
- 关键词：荧光定量PCR病毒
- 传染性支气管炎病毒的分子生物学特性及其弱毒疫苗的研究进展被引量：5
- 2015年
- 传染性支气管炎是一种急性、高度接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为B类疫病,对世界养禽业的发展造成了严重威胁。目前,传染性支气管炎的主要预防措施仍然是接种疫苗,但由于传染性支气管炎病毒具有血清型众多、变异速度快且交叉保护性弱等特点,使得传染性支气管炎的防制一直是养禽业面临的重大难题。文章主要对传染性支气管炎病毒的分子生物学特征及其弱毒疫苗的发展历程和免疫策略等方面进行了阐述,以期为新型传染性支气管炎弱毒疫苗的开发及应用提供科学参考。
- 闫艺婷勾肖晶刘静黄亚明杨激辉刘兴友
- 关键词：传染性支气管炎病毒S蛋白M蛋白N蛋白
- 鸡胚成纤维细胞原代培养及应用被引量：16
- 2010年
- 原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学研究的许多方面。论文综述了近年来有关鸡胚成纤维细胞的培养技术,如鸡胚的取材、细胞的分离、纯化和培养,同时介绍了应用进展和未来研究方向。
- 朱国坡周晓丽郭延锋李瑞芳高均伟陈仕均王丽荣刘兴友
- 关键词：鸡胚成纤维细胞原代培养纯化
