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国家自然科学基金(30901438)

作品数：4 被引量：17H指数：3
相关作者：栾正刚张晓娟马晓春更多>>
相关机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
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相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 4篇医药卫生

主题

  • 4篇细胞
  • 3篇蛋白
  • 3篇人脐静脉
  • 3篇迁移
  • 3篇迁移率
  • 3篇内皮
  • 3篇内皮细胞
  • 3篇高迁移率族蛋...
  • 2篇人脐
  • 2篇人脐静脉内皮...
  • 2篇脓毒
  • 2篇脓毒症
  • 2篇脐静脉
  • 2篇脐静脉内皮
  • 2篇脐静脉内皮细...
  • 2篇静脉内
  • 2篇静脉内皮
  • 2篇静脉内皮细胞
  • 2篇高迁移率族蛋...
  • 1篇短发夹RNA

机构

  • 4篇中国医科大学...

作者

  • 4篇栾正刚
  • 3篇马晓春
  • 3篇张晓娟

传媒

  • 2篇中华危重病急...
  • 1篇中国危重病急...
  • 1篇创伤与急危重...

年份

  • 1篇2015
  • 1篇2014
  • 1篇2013
  • 1篇2012
共 4 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
整合稳定靶向高迁移率族蛋白B1基因shRNA载体的人脐静脉内皮细胞株建立被引量：1
2012年
目的构建针对高迁移率族蛋白B1（HMGBl）基因的特异性RNA干扰载体，建立稳定转染该干扰载体的人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）。方法根据HMGBl基因的编码序列及短发夹RNA（shRNA）设计原则，设计并合成针对HMGB1基因的特异性shRNA，将其定向克隆到pRNA—u6．1／Neo载体中，同时设立阴性对照，重组载体经脂质体转染HUVEC；转染细胞经类氨基糖抗生素样物质G418筛选，采用实时荧光逆转录-聚合酶链反应检测HMGB1mRNA表达，蛋白质免疫印迹法检测HMGB1蛋白表达。结果酶切鉴定和测序证实，重组质粒shRNA序列与设计的片段完全一致。HMGB1基因特异性RNA干扰载体能够显著抑制HMGBl在HUVEC细胞中的表达（mRNA：0．4635±0．0342比1．0340±0．0352，蛋白：0．4510±0．0200比1．0210±0．0110，均P〈0．05）。结论成功构建了靶向HMGB1基因的shRNA真核表达载体pRNA—HMGB1，并获得了稳定表达靶向HMGB1基因的shRNA的HUVEC细胞株，为进一步研究HMGB1在HUVEC细胞株中的生物学功能和作用机制奠定了基础。
张晓娟栾正刚马晓春
关键词：高迁移率族蛋白B1人脐静脉内皮细胞转染脓毒症短发夹RNA
高迁移率族蛋白1在脓毒症中作用研究进展被引量：10
2014年
高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)是一种高度保守的DNA结合蛋白,与核小体结构的修复及基因转录调控密切相关。HMGB1由坏死细胞或活化的单核/巨噬细胞被动或主动释放至细胞外,并发挥促炎和修复作用。脓毒症是一种全身炎症反应综合征。发生脓毒症时,血清和组织中HMGB1浓度上升,HMGB1在其发生过程中扮演晚期促炎细胞因子的角色。在脓毒症和内毒素血症动物模型中,靶向给予HMGB1抗体或特异性拮抗剂可以改善预后。本文就HMGB1的结构、在细胞核内发挥的作用、释放过程和其在炎症反应及脓毒症中发挥的作用研究进展作一综述。
尹晓晗栾正刚
关键词：高迁移率族蛋白1脓毒症促炎细胞因子特异性拮抗剂
高迁移率族蛋白B1对人脐静脉内皮细胞增殖及迁移能力的影响被引量：3
2013年
目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖和迁移能力的影响。方法通过稳定转染的方法将pRNA—u6．1／Neo-对照和pRNA—u6．1／Neo—HMGB1短发夹RNA（shRNA）质粒转至HUVEC细胞，构建对照及HMGB1 shRNA细胞株，通过蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）和实时荧光逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）进行稳定转染细胞的鉴定，通过四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞株增殖情况，流式细胞仪检测细胞株周期的分布，划痕实验检测细胞株迁移能力。结果Western blotting及RT—PCR检测证明HMGB1 shRNA稳定转染的HUVEC细胞株构建成功，培养72h时细胞中HMGB1蛋白及mRNA表达较对照细胞明显降低（蛋白：0．436±0．027比1．017±0．038，T=12．180，P=0．000；mRNA：0．436±0．031比1．020±0．051，T=9．660，P=0．001）。MTF结果显示，HMGB1 shRNA稳定转染HUVEC细胞株2、3、4、5d的增殖能力比对照细胞株明显下降（2d：0．210±0．023比0．240±0．011，T=1．050，P=0．351；3d：0．240±0．022比0.361±0．030，T=3．203，P=0．033；4d：0．373±0．031比0．531±0．033，T=3．530，P=0．022；5d：0．441±0．031比0．602±0．030，T=4．180，P=0．106）。流式细胞仪检测结果显示，HMGB1 shRNA细胞株在s期的比例明显低于对照细胞株[（13．10±1．10）％比（21．12±1．20）％，T=4．950，P=0．001]。划痕实验结果显示，HMGB1 shRNA细胞株在细胞刮除后12h划痕愈合的细胞比例较对照细胞株明显降低[（21．07±3．33）％比（88．53±3．15）％，T=14．142，P=0．000]。结论HMGB1 shRNA能明显抑制HUVEC细胞的增殖和迁移能力。
张晓娟栾正刚马晓春
关键词：人脐静脉内皮细胞高迁移率族蛋白B1增殖迁移
短发夹高迁移率族蛋白B1真核细胞表达载体通过HOXA9下调人脐静脉血管内皮细胞表达E-选择素被引量：3
2015年
目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）基因表达对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）激活表达E-选择素的分子机制。方法将同源盒转录因子（HOXA9）小干扰RNA（siRNA）短序列转染至对数生长期的HUVEC，采用实时荧光定量聚合酶链反应（实时qPCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测其对HOXA9 mRNA和蛋白表达的影响；另设空白对照组和无意序列nonsilence阴性对照组。取已经稳定转染pRNA-u6.1/Neo-HMGB1 shRNA质粒的HUVEC（低表达HMGB1的HUVEC），采用实时qPCR法检测HOXA9和E选择素的mRNA表达；另设nonsilence转染组作为阴性对照。将HOXA9 siRNA转染至低表达HMGB1的HUVEC中作为共同转染组，采用实时qPCR法检测E-选择素的mRNA表达；以HMGB1 shRNA组和HOXA9 nonsilence组作为对照。结果①空白对照组HOXA9 mRNA（2-ΔΔCT）和蛋白（积分A值）表达分别为1.094±0.115和1.031±0.060。与无意序列nonsilence转染组比较， HOXA9 siRNA转染组可显著降低HUVEC细胞中HOXA9的mRNA和蛋白表达〔HOXA9 mRNA（2-ΔΔCT）：0.257±0.030比1.035±0.091，t＝14.010，P＝0.002；HOXA9蛋白（积分A值）：0.278±0.042比0.975±0.014，t＝27.310，P＝0.002〕。②与nonsilence转染组比较， HMGB1 shRNA转染上调了HUVEC中HOXA9 mRNA（2-ΔΔCT）表达（2.519±0.278比0.856±0.063，t＝10.100， P＝0.001），同时下调了E-选择素mRNA（2-ΔΔCT）表达（0.311±0.046比1.080±0.201，t＝7.415，P＝0.000）。③与HOXA9 nonsilence组及HMGB1 shRNA组比较，HMGB1 shRNA和HOXA9 siRNA共同转染后HUVEC细胞中E-选择素 mRNA（2-ΔΔCT）表达明显升高（3.445±0.428比1.085±0.212、1.004±0.104，t1＝8.507， t2＝9.603，均P＜0.001）。结论 HMGB1在HUVEC细胞核内可能通过HOXA9调节E-选择素的表达。
张晓娟焦丽丽栾正刚马晓春
关键词：E-选择素真核细胞表达载体
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