国家自然科学基金(31100645)
- 作品数：7 被引量：17H指数：4
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- 相关机构：新乡医学院新乡医学院第一附属医院新乡医学院第三附属医院更多>>
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- 甘露聚糖结合凝集素对Th17细胞诱导分化的影响被引量：1
- 2017年
- 目的 研究甘露聚糖结合凝集素（mannan-binding lectin,MBL）对辅助性T细胞17（T helper cell 17,Th17）诱导分化的影响.方法 通过MACS分选器从人新鲜脐带血液中分选获得CD4＋T细胞,对照组用anti-CD3 McAb和anti-CD28 McAb活化CD4＋T细胞并加入适当浓度的IL-6和TGF-β1作为诱导剂,在对照组的基础上加入不同浓度的MBL作为实验组,细胞培养72 h后,利用流式细胞术（FACS）检测各组中Th17细胞比例变化情况;Q-PCR分别检测未加MBL对照组和不同浓度MBL实验组Th17细胞核转录因子维甲酸孤儿受体-γt（retinoid-related orphan receptor-γ-t,RORγt）mRNA表达水平;ELISA检测各组细胞上清液中IL-17A的含量;FACS检测Th17细胞在MBL-/-小鼠和WT小鼠中的变化.结果 FACS分析表明,经体外72 h培养,与对照组相比,MBL能够显著降低Th17细胞的比例;Q-PCR结果显示,MBL能够显著降低RORγt mRNA的表达;ELISA结果显示,MBL能够显著降低IL-17A的表达水平;动物实验结果表明,与WT小鼠相比,MBL-/-小鼠CD4＋RORγt＋Th17细胞比例显著上升.结论 MBL能够抑制CD4＋T细胞向Th17细胞诱导分化.
- 陈晨张卫斌王艳杨琳马俊维王帅王凡平王明永
- 关键词：CD4^+T细胞THL7细胞诱导分化
- 甘露聚糖结合凝集素抑制肽聚糖刺激THP-1／CD14细胞产生的炎性反应及机制被引量：5
- 2012年
- 目的探讨甘露聚糖结合凝集素（mannan-bindinglectin，MBL）对肽聚糖（peptidogly—can，PGN）刺激佛波酯（PMA）活化的THP-1／CD14细胞产生TNF—α和IL-6影响。方法用PMA活化THP-1／CD14细胞，以不同浓度人MBL预处理2b后再用PGN刺激24h。收集培养上清，以ELISA从蛋白水平分析TNF-α和IL-6的产生。收集细胞提取总RNA，以RT—PCR从转录水平评估TNF—α和IL-6的表达。FACS分析MBL与THP-1／CD14细胞的结合，并进一步分析MBL对PGN结合THP-1／CD14细胞的影响，Western blot分析NF-κB的细胞核移位。结果ELISA检测发现，PGN可刺激PMA活化的各THP-1／CD14细胞分泌TNF-α和IL-6，高浓度MBL（10～20mg／L）可抑制PGN诱导细胞分泌TNF—α和IL-6；RT—PCR分析亦显示，MBL（20mg／L）对PGN诱导的TNF—α和IL-6的mRNA表达有不同程度的抑制作用；流式细胞术检测显示MBL能够与THP-1／CD14细胞以Ca^2＋依赖形式结合，PGN可竞争性抑制MBL结合THP-1／CD14细胞。MBL还可通过结合THP-1／CD14竞争性抑制PGN与THP-1／CD14的结合。Western blot分析显示，MBL对PGN诱导的NF—κB细胞核移位有显著的抑制作用。结论MBL通过配体结合抑制PGN诱导的THP-1／CD14细胞产生的细胞反应，提示MBL能够在PGN诱导的炎性反应中起免疫调控作用。
- 王凡平王明永杨建斌赵东方连荣徐素玲邵峰孙瑞利郭庆合李海斌郭继强宋志善
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素肽聚糖THP-1
- 模式抗原Mannan-TTC的制备及免疫原性分析
- 2013年
- 目的:制备高免疫原性的模式抗原Mannan-TTC,分析其免疫原性。方法:将甘露聚糖(Mannan)与破伤风毒素C片段(TTC)蛋白进行化学交联,SDS-PAGE分析交联产物。用混合淋巴细胞反应检测DC负载Mannan-TTC刺激同种异体T细胞增殖的能力;WST-1和ELISA检测TTC特异性CD4+T细胞的增殖和分泌IFN-γ的能力;小鼠免疫后,用ELISA检测TTC特异性抗体水平。结果:成功交联Mannan与TTC,获得模式抗原Mannan-TTC。该交联产物能通过活化树突状细胞(DC),不仅增强了对同种异体T细胞增殖的能力,而且显著增强TTC抗原特异性的CD4+T淋巴细胞增殖及分泌细胞因子IFN-γ。动物免疫实验则显示,该交联产物能刺激小鼠免疫细胞产生TTC抗原特异性的抗体,但与单纯TTC抗原刺激相比,无显著性差异。结论:所获Mannan-TTC抗原免疫原性好,能显著增强细胞免疫应答,为研究体内外抗原提呈、免疫应答提供了良好的模式抗原。
- 王凡平王明永赵东方马淑君余文发杜继英丁肖华朱琳琳谭静赵永新毛光兰申家辉
- 关键词：甘露聚糖免疫原性
- 甘露聚糖结合凝集素诱导DC成熟机制分析被引量：6
- 2012年
- 目的:探讨甘露聚糖结合凝集素(Mannan-binding lectin,MBL)诱导人外周血单核细胞(Mo)来源树突状细胞(DC)成熟的机制。方法:从健康成人外周血分离Mo,常规方法体外诱导未成熟DC(imDC),FACS分析DC成熟过程中MBL对CD分子表达的影响,进一步分析MBL与imDC的结合情况;RT-PCR分析DC表面模式识别分子Toll样受体-2(TLR2)和Toll样受体-4(TLR4)的表达;凝胶电泳迁移率法(EMSA)和Western blot分析NF-κB的活性及细胞核移位。结果:FCM分析表明,MBL能够使DC表面CD83、CD86及MHC分子表达升高;MBL能够以Ca2+浓度依赖关系与imDC细胞结合;RT-PCR结果表明MBL能够减少DC表面TLR2和TLR4的表达。EMSA和Western blot分析结果显示,MBL能够增强NF-κB活性及细胞核移位。结论:MBL可通过直接结合imDC表面分子来影响DC模式识别分子的表达并调节信号分子NF-κB活性,提示MBL能够通过配体结合调控DC分化成熟,揭示了MBL调节DC分化成熟有关信号途径。
- 王凡平王明永杨建斌赵东方王红坡邵峰孙瑞利郭庆合凌明智赵永新宋士军郭继强
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素树突状细胞TOLL样受体NF-ΚB免疫调节
- 甘露聚糖结合凝集素(MBL)对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的调节作用及机制被引量：3
- 2020年
- 目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的调节及其机制。方法体外诱导3T3-L1前脂肪细胞成脂分化,同时给予不同浓度的MBL(0、1、10、20μg/ml)干预。CCK-8法检测细胞增殖能力变化,油红O染色和细胞内甘油三酯含量测定法分析脂质积累情况。Western blot及qRT-PCR检测脂肪细胞成脂分化相关因子PPARγ及C/EBPα的蛋白质及mRNA表达水平。Western blot分析脂肪合成调控信号分子Akt的表达及磷酸化。结果实验组各浓度MBL(0、1、10、20μg/ml)对3T3-L1前脂肪细胞增殖都无影响。3T3-L1前脂肪细胞诱导分化3 d,甘油三酯检测发现MBL处理组细胞内甘油三酯水平下降,并呈剂量依赖关系;油红O染色结果进一步显示,MBL处理组的脂滴数量显著减少,吸光度值也显著降低,同样呈现浓度依赖关系。Western blot及qRT-PCR检测结果证实,MBL处理组PPARγ和C/EBPα的蛋白质及mRNA表达水平均显著下降,呈剂量依赖性。在MBL干预下,Akt的磷酸化水平也明显下调。结论MBL通过Akt信号通路调控3T3-L1前脂肪细胞的成脂分化。
- 杨泳慧杨婧文李志欣孙彦威杨易孟张伟王凡平于莉莉王明永
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素3T3-L1前脂肪细胞AKT成脂分化
- MBL抑制LPS诱导DC成熟机制的研究被引量：8
- 2013年
- 本研究探讨甘露聚糖结合凝集素(MBL)对细菌脂多糖(LPS)诱导的人外周血单核细胞来源树突状细胞(DC)成熟的机制。从健康成人外周血分离单核细胞(Mo),用常规方法体外诱导未成熟DC(imDC),FACS分析MBL与imDC的结合,并进一步分析MBL对LPS结合imDC的影响;ELISA和Western blot分析MBL与可溶性的TLR4胞外段蛋白(sTLR4)结合;Western blot分析NF-κB的细胞核移位。结果表明,在钙离子存在下,MBL能够直接与imDC结合,sTLR4和LPS可竞争性抑制MBL与imDC的结合。Western blot与ELISA分析结果显示,MBL能够以浓度依赖的方式结合sTLR4蛋白。FACS分析结果进一步表明,MBL通过结合imDC竞争性抑制LPS与imDC的结合。Western blot分析结果亦显示,MBL对LPS诱导的NF-κB细胞核移位有显著的抑制作用。结论:MBL可通过结合表达在imDC的TLR4分子竞争性抑制LPS结合imDC,从而抑制LPS诱导imDC成熟,提示MBL能够通过配体结合调控DC分化成熟。本研究为阐明MBL抑制LPS诱导DC成熟的机制提供了较好的实验依据。
- 王凡平王明永郭晓芳石如玲徐素玲马淑君李海斌郭继强杨秀丽
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素细菌脂多糖树突状细胞TOLL样受体-4
- 甘露聚糖结合凝集素对白假丝酵母菌感染鼠体内Treg/Th17细胞免疫平衡的调节作用被引量：8
- 2019年
- 目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对白假丝酵母菌感染鼠体内Th17、Treg细胞分化的调节。方法MBL基因敲除型(MBL^-/-)和野生型(WT)C57BL/6小鼠分4组,2×10^7CFU白假丝酵母菌(C.albicans)对感染组小鼠腹腔注射;感染3d后取小鼠肝脏和肾脏病理切片,HE染色和PAS染色观察小鼠病理组织学变化;7d后摘除小鼠眼球取静脉血流式细胞术分析小鼠体内Treg和Th17细胞;静脉抗凝血ELISA检测小鼠体内细胞因子IL-10和IL-17A的含量;颈椎脱臼处死小鼠后取脾脏细胞MACS磁性分选获得CD4^+T细胞,提取总RNA,qRT-PCR检测其体内Foxp3、RORγtmRNA的表达;取小鼠脾脏CD4^+T细胞,提取总蛋白,Western blot检测Foxp3、RORγt蛋白表达水平。结果成功建立了C.albicans感染鼠模型,和WT感染组相比较:流式分析显示MBL^-/-感染组小鼠体内Th17细胞亚型数目比例增高,Treg细胞亚型数目比例降低;ELISA结果显示MBL^-/-感染组小鼠体内IL-17A水平明显增高,IL-10水平降低;qRT-PCR结果显示MBL^-/-感染组小鼠体内转录因子RORγtmRNA表达升高,转录因子Foxp3mRNA表达降低;Western blot印迹结果表明MBL^-/-感染组小鼠体内RORγt蛋白表达量明显增多,而Foxp3蛋白表达量减少。结论在C.albicans感染中,MBL促进了CD4^+T细胞向Treg细胞亚型诱导分化,抑制了CD4^+T细胞向Th17细胞亚型的诱导分化,从而调节了C.albicans感染鼠体内Treg/Th17细胞的免疫平衡。
- 王艳张卫斌杨泳慧陈晨杨婧文雷一鸣张伟王凡平王明永
- 关键词：THL7细胞
