卫生部临床学科重点项目([2004]468) 作品数:13 被引量:56 H指数:5 相关作者: 李笑天 黄海 陈家祺 覃百花 王智崇 更多>> 相关机构: 复旦大学 中山大学 暨南大学 更多>> 发文基金: 卫生部临床学科重点项目 上海市教育委员会重点学科基金 国家科技重大专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
干扰RNA抑制组织因子表达对阿霉素诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的影响 被引量:4 2007年 目的研究组织因子(TF)表达对阿霉素诱导人神经母细胞瘤细胞系 SK-N-MC 细胞凋亡的影响。方法以 Western blotting 法检测 SK-N-MC 细胞 TF 表达。分子生物学方法构建 TFsiRNA-pSUPER 表达载体,以脂质体介导进行基因转染。以水溶性四唑盐(WST)法检测阿霉素细胞毒性。以Western blotting 法检测阿霉素诱导的 caspase-3、多聚 ADP 核糖转移酶(PARP)的活化水平。以 Hochest33342染色,荧光显微镜下检测凋亡细胞。结果①SK-N-MC 细胞高表达 TF;②转染 TF siRNA-pSUPER 表达载体的 SK-N-MC 细胞,TF 表达水平呈剂量依赖性降低;③转染 TFsiRNA-pSUPER 的 SK-N-MC 细胞及转染 pSUPER 质粒的对照细胞分别以不同浓度阿霉素处理24 h,前者与后者相比存活细胞数显著降低;④转染 TFsiRNA-pSUPER 的 SK-N-MC 细胞及转染 pSUPER 质粒的对照细胞分别以阿霉素处理4、8 h,可见前者较后者 caspase-3、PARP 活化增强;⑤转染 TFsiRNA-pSUPER 的 SK-N-MC 细胞与对照细胞相比,经阿霉素处理后的凋亡细胞数显著增多(P<0.05)。结论人神经母细胞瘤 SK-N-MC 细胞中 TF 异常高表达,以 siRNA 特异性下调 TF 表达后,可增强阿霉素细胞毒性及其诱导的肿瘤细胞凋亡。肿瘤细胞中 TF 的异常高表达可能参与阿霉素诱导凋亡的调控。 方峻 汤浩 夏凌辉 周木想 陈燕 魏文宁 胡豫 宋善俊关键词:神经母细胞瘤 细胞凋亡 阿霉素 组织因子siRNA表达载体的构建及其抑制人神经母细胞瘤细胞组织因子表达的研究 被引量:3 2007年 目的:构建组织因子(TF)特异性小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察其对人神经母细胞瘤细胞TF表达的影响。方法:分子生物学方法构建TFsiRNA-pSUPER表达载体,限制酶切予以初步筛选,基因测序进行证实。以脂质体Lipo-fectamine2000介导转染人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC。以WesternBlotting检测TF表达。结果:所构建TFsiRNA-pSUPER表达载体经基因测序证实。SK-N-MC细胞高表达TF,TFsiRNA-pSUPER表达载体转染48h后,TF表达水平与转染pSUPER质粒的对照细胞相比显著降低,呈剂量依赖性。结论:人神经母细胞瘤SK-N-MC中TF异常高表达,本研究构建的TFsiRNA表达载体可在SK-N-MC中特异性下调TF表达,可作为干预TF表达、研究其非凝血功能的有效手段。 方峻 汤浩 夏凌辉 魏文宁 陈燕 周木想 胡豫 宋善俊关键词:SIRNA 人神经母细胞瘤 细胞组织 神经母细胞瘤细胞系 分子生物学方法 光谱核型分析技术在染色体异常诊断中的应用 被引量:2 2007年 目的 建立稳定的光谱核型分析技术,并评价其在染色体异常诊断中的应用价值。方法 应用光谱核型分析技术对16例外周血和1例羊水细胞染色体样本进行诊断,并与G显带诊断结果进行比较。结果 所建立的光谱核型分析技术不但成功地对全部15例G显带诊断结果为正常或平衡易位的样本进行了正确诊断,而且对G显带无法识别的1例外周血样本的衍生染色体片段和1例羊水样本的标记染色体亦明确了来源。结论 光谱核型分析技术对染色体异常的诊断具有很高的敏感性和特异性,并且在明确传统核型分析技术不能分析的标记染色体或衍生染色体片段的来源方面具有重要应用价值。 郭奇桑 张月萍 李笑天 韩金兰关键词:光谱核型分析 染色体异常 标记染色体 改良PHEMA一体化人工角膜植入碱烧伤兔角膜的实验研究 被引量:1 2006年 [目的]评价改良聚羟乙基丙烯酸甲酯(PHEMA)一体化人工角膜对碱烧伤兔角膜的治疗效果。[方法]通过两阶段化学聚合结合车床机械切削合成改良的一体化PHEMA人工角膜。将饱和有1mol/L NaOH滤纸烧伤兔角膜中央,来建立稳定碱烧伤兔眼模型。实验分两部分完成。第一部分:将PHEMA海绵边裙材料植入10只正常兔角膜板层间,术后2周、4周、2个月、3个月、4个月分别行光镜和电镜检测,观察海绵材料中细胞和新生血管的生长情况。第二部分:10只碱烧伤兔眼角膜囊袋内Ⅰ期植入一体化PHEMA人工角膜,术后临床观察材料与组织的愈合情况;术后2-3个月Ⅱ期手术切除中央前板层角膜组织,暴露人工角膜中央镜柱,术后随访3个月,初步观察临床治疗效果。[结果]兔角膜碱烧伤3个月,形成带有新生血管的角膜白斑模型。10只正常兔角膜均接受板层间植入术,随访期间未见任何并发症:光镜下,PHEMA海绵术后2周开始有成纤维细胞长入,术后2~3个月多量细胞长入的同时伴有新生血管生长;电镜下,细胞在海绵材料间隙中生长,细胞生长状态良好,并有部分细胞外基质和胶原的存在。10只碱烧伤兔眼接受人工角膜移植术,其中1眼Ⅰ期术中角膜穿孔而被排除,9眼接受Ⅱ期手术;Ⅱ期术后,3眼2周内人工角膜镜柱偏位,6眼观察期间未见人工角膜脱位;这6眼中,2眼观察期间镜柱透明未见任何并发症,3眼出现不同程度镜柱前表面纤维增生组织遮盖,1眼镜柱中央轻度钙化。[结论] PHEMA人工角膜能够与角膜组织达到良好的生物学愈合;多孔边裙的强度需要进一步加强,以便减少中央镜柱脱出的发生率。 郭萍 陈家祺 覃百花 王智崇 黄海关键词:PHEMA 人工角膜 生物相容性 离体猪眼睫状体上皮电参数测量 被引量:1 2006年 目的:测量离体猪眼跨睫状体上皮(ciliary epithelium,CE)电参数,为人眼睫状体研究提供依据。方法:应用改良的Ussing-chamber连续灌注系统对离体的猪眼睫状体上皮电参数:电阻 (resistance,R)、电位差(potential difference,PD)及短路电流(short-circuit current,SCC)进行测量,并观察哇巴因(ouabain)对电参数的影响。结果:猪眼跨睫状体上皮房水侧PD为:(-0.6±0.1)mV,且始终保持负性。SCC及R分别为: (-10.9±1.2)μA/cm2及(54.6±1.6)Ωcm2。0.1mM ouabain应用于房水侧PD及SCC表现为先超极化再去极化,即先是刺激作用,然后是抑制作用。结论:猪眼跨睫状体上皮房水侧PD为负性;Na+,K+-ATP酶存在于猪眼色素上皮(pigmented epithelium,PE)和非色素上皮non-pigmented epithelium,NPE)细胞上,且对维持其睫状体上皮房水侧电极性为负性起重要的作用。 凌运兰 杜嗣河 林明楷 卓业鸿 侯飞 江志荣 葛坚关键词:睫状体上皮 房水 离子转运 骨髓腔输注间充质干细胞对骨髓移植后造血重建和移植物抗宿主病作用的实验研究 被引量:6 2007年 目的比较骨髓腔内(IBM)及静脉内(IV)输注异基因间充质干细胞(MSC)对大鼠骨髓移植(BMT)模型的骨髓造血、MSC重建和移植物抗宿主病(GVHD)的影响,优化MSC输注途径及探讨MSC促进造血的机制。方法①MSC体内动力学示踪。②建立大鼠BMT模型。③实验分组:IBM组[MSC(IBM)+骨髓有核细胞(IV)];IV组[MSC(IV)+骨髓有核细胞(IV)];骨髓移植(BMT)组;单纯MSC组;照射对照组;空白对照组。④移植后观察受体存活、外周血常规结果及植入证据、骨髓MSC、CFU-Mix恢复及GVHD。结果①IBM途径输注MSC主要分布于骨髓。②MSC与骨髓共移植可以提高大鼠存活率:照射对照组、单纯MSC输注组均在预处理后2周内全部死亡;BMT组2周内存活率为70%;IV存活率为80%;IBM组存活率为100%。③MSC可促进BMT大鼠外周血象恢复:移植后第14天(+14天)移植组白细胞计数均明显高于BMT组,IBM组又明显高于IV组,+21天IBM组三系均恢复,IV组+21天白细胞计数恢复,血红蛋白浓度和血小板计数至+30天恢复正常;BMT组三系恢复延迟约2周。④MSC促进BMT受体骨髓MSC恢复和造血重建:+21天和+30天共移植组CFU-Mix和MSC克隆生长恢复均较BMT组快(P<0.05);IBM组优于IV组(P<0.05)。⑤植入证据的检测:BMT及共移植组存活大鼠外周血均检测到F344大鼠供体抗原RT1A’阳性细胞,比例>90%。⑥GVHD发生率:BMT组GVHD发生率为42%;共移植组无明显GVHD表现。结论IBM输注MSC优先定位于骨髓、极少丢失于非造血器官;输注MSC可促进BMT后造血恢复及提高受体生存率;MSC促进BMT受体骨髓MSC及造血干细胞恢复,缩短骨髓抑制期,并降低GVHD;IBM输注途径效果优于IV途径。 黄科 黄绍良 周敦华 蔡耘 张绪超 黎阳关键词:间充质干细胞 造血干细胞移植 移植物抗宿主病 改良聚羟乙基丙烯酸甲酯-聚甲基丙烯酸甲酯一体化人工角膜植入兔与猴角膜的研究 被引量:1 2007年 目的 探讨聚羟乙基丙烯酸甲酯(PHEMA)海绵支架材料与角膜组织的生物相容性,评价改良PHEMA-聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)一体化人工角膜植入兔与猴角膜的初步临床效果。方法通过两个阶段化学聚合结合车床机械切削合成改良的一体化人工角膜。实验分为两个部分完成。第1部分(A组):将PHEMA海绵边裙材料植入10只正常兔角膜板层间,术后2、4周及2、3、4个月分别行组织病理、免疫组织化学及电镜检查,观察海绵边裙与角膜组织的生物学愈合情况。第2部分(B组):8只兔眼和2只猴眼角膜囊袋内Ⅰ期植入一体化人工角膜,术后临床观察材料与组织的愈合情况;术后3个月时行Ⅱ期手术切除术眼角膜中央前板层角膜组织,暴露人工角膜中央镜柱,术后随访时间3—6个月,初步观察临床治疗效果。结果(1)A组:10只兔眼随访期间未见并发症。组织病理学显示,PHEMA海绵边裙材料植入术后2周始有成纤维细胞长入,术后2—3个月时多量成纤维细胞长入并伴有新生血管生长;免疫组织化学显示,海绵孔隙中长入的细胞和角膜基质细胞均对波形蛋白免疫反应呈阳性;电镜下可见,成纤维细胞在海绵材料间隙中生长,细胞生长状态良好,并分泌胶原和细胞外基质。(2)B组:6只兔眼的一体化人工角膜均在位,另2只兔眼Ⅰ期术后有前板层角膜基质融解。2只猴眼于Ⅰ期和Ⅱ期术后均未见明显并发症。结论PHEMA海绵能与角膜组织良好的生物学愈合;改良PHEMA—PMMA一体化人工角膜植入术后能获得相对稳定的治疗效果。(中华眼科杂志.2007,43:602-607) 郭萍 陈家祺 覃百花 王智崇 刘祖国 袁进 顾建军 黄海关键词:聚甲基异丁烯酸 生物相容性材料 组织相容性 MMP-9/TIMP-1表达失衡与糖尿病大鼠皮肤“隐性损害”关系的初步探讨 被引量:7 2008年 目的观察基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制物1(TIMP-1)的表达和MMP-9/TIMP-1比值在糖尿病组和正常组大鼠皮肤表达的变化,并探讨其可能的作用。方法采用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型,6周后采用HE染色、免疫组织化学方法评估皮肤组织的组织学、细胞生物学行为的情况;通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测两组大鼠皮肤MMP-9、TIMP-1的表达情况。结果与对照组比较,糖尿病组皮肤表皮厚度变薄,皮肤组织层次欠清晰、缺乏复层排列、明显萎缩,真皮纤维束排列紊乱、纤维间距增加、炎性细胞浸润。糖尿病组皮肤MMP-9的表达高于正常组,而TIMP-1的表达低于正常组,MMP-9/TIMP.1蛋白水平比值高于正常组。结论糖尿病鼠皮肤在组织结构完整性未遭到破坏的情况下已经存在组织学、细胞生物学行为的改变,这种“隐性损害”可能与MMP-9/TIMP-1的平衡改变有关。 严励 朱平 陈黎红 杨川 劳国娟 杜婧 郝少云 程桦关键词:糖尿病 皮肤组织 组织金属蛋白酶抑制剂 用^18F-FDG PET/CT勾画肺肿瘤靶区最佳阈值的模型研究 2008年 目的通过模型实验初步建立使^18F-脱氧葡萄糖(FDG)PET图像上显示的肿瘤体积与肿瘤实际体积一致的最佳阈值条件。方法采用美国DATA SPECTUM公司NEMA IEC-Body Phantom Set^TM体模,以不同大小的球体(体积分别为0.52,1.15,2.60,5.50,11.40,26.50ml)模拟临床常见肺肿瘤的大小和靶/本底(T/B)比值。选择合适的窗位和窗宽,使CT图像上显示的球体体积与球体实测体积一致,并以此作为球体的实际体积,调节PET图像的阈值,使PET图像上勾画的球体轮廓与CT图像上所勾画的最接近。设绝对阈值(Ⅰthreshold)=本底平均像素值(Ⅰback)+相对阈值[x% Ⅰmax-back(slice),即每个层面的最大像素值与本底平均像素值的差值的百分比]。比较应用筛选出的最佳绝对阈值与应用最广泛的靶体内最大像素值[42%Ⅰmax(total)]为阈值勾画的球体体积大小及对实际体积覆盖率的差异。采用SPSS13.0软件进行统计学处理,行Wilcoxon法检验。结果对体积≥5.50ml的不同T/B比值的球体,中央1/2层面的最佳相对阈值与最大层面的最佳相对阈值相差(1.6±2.0)%,而两端1/2层面的最佳相对阈值与最大层面的最佳相对阈值相差(19.3±10.1)%,二者差异有统计学意义(Z=-7.26,P〈0.01)。最大层面的最佳相对阂值在20%-25%之间的改变引起勾画体积与实际体积的差异≤5%。以Ⅰthreshold=Ⅰback+20%Ⅰmax-back(slice)作为各层面的最佳绝对阈值,所勾画的球体体积较实际体积扩大(12.6±6.6)%,而42%Ⅰmax(total)勾画的体积较实际体积缩小(-17.2±15.2)%(Z=-2.67,P〈0.01),前者对实际体积的覆盖率优于后者(97.1%与79.4%,Z=-2.67,P〈0.01)。结论Ⅰback+20% Ⅰmax-back(slice)可能是不依赖于CT提供的肿瘤体积信息层面化的最佳阈值条件,其准确性 张碧媛 傅小龙 章英剑 姚之丰 夏冰 胡伟刚 蒋国梁关键词:体层摄影术 体层摄影术 肺肿瘤 靶体积 婚前医学检查与出生缺陷预防的现状调查 被引量:11 2008年 目的探讨婚前医学检查(premarital medical examination,PME)的影响因素及其对出生缺陷预防的意义。方法随机选择2006年9月29日至11月1日,在复旦大学附属妇产科医院门诊进行产前登记的300例孕妇,按PME与否分为PME组和无PME组,采用问卷问答的方法调查孕妇的PME率、人群特点、相关因素,对出生缺陷预防的认知程度,以及相关知识,比较二组之间的差异。结果在300例孕妇中,PME率为42.7%。本调查结果显示,丈夫的籍贯与PME率有关,丈夫为上海籍贯的夫妇PME率(35.1%)明显低于外省、市来沪人员(50.7%)和国外来沪人员(43.7%)(P<0.05);PME率与个体受教育程度和个人收入均呈两头大中间小趋势;医疗行业从业人员的PME率低于平均水平;有效叶酸补充,在PME组和无PME组之间比较,差异无显著意义(分别为27.3%和22.1%)(P>0.05);PME组通过医务人员孕前咨询的比例(14.8%)明显高于无PME组(4.7%)(P<0.05)。结论PME的依从性较差,对预防出生缺陷的效果有限。PME的内容有待改进。 康媛 楼懿婷 凌佩华 丁焱 李笑天关键词:婚前医学检查 孕前咨询