国家自然科学基金(81001343)
- 作品数：6 被引量：20H指数：3
- 相关作者：薛向阳张丽芳陈静章慧娣朱小春更多>>
- 相关机构：温州医科大学温州医学院附属第一医院温州医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金温州市科技局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胃癌组织中人巨细胞病毒感染及其临床意义被引量：5
- 2014年
- 目的:初步探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染与胃癌的关系。方法:采用化学发光(CLIA)法对胃癌组(n=80)及健康对照组(n=80)的外周血清进行HCMV Ig G、Ig M抗体检测;巢式PCR技术检测22例胃癌患者的肿瘤及癌旁正常胃黏膜组织标本中的HCMV UL55基因;统计分析HCMV感染与胃癌临床特征的关系。结果:胃癌组血清HCMV-Ig G阳性率为95%(76/80),HCMV-Ig M阳性率为6.25%(5/80);在健康对照组血清中,HCMV-Ig G阳性率为97.5%(78/80),HCMV-Ig M阳性率为3.75%(3/80),HCMV Ig G、Ig M在胃癌组与健康对照组血清中差异无统计学意义(P>0.05)。HCMV UL55阳性检出率在22例胃癌组织中为50%(11/22),在相应正常胃黏膜组织中为9.09%(2/22),胃癌组织HCMV阳性检出率较癌旁正常组织显著升高(P<0.01)。此外,未发现HCMV感染与胃癌的TMN分期、组织病理分化及肿块大小有显著性关联。结论:胃癌组织中存在HCMV感染,且HCMV相较于癌旁正常组织更倾向感染癌灶,提示HCMV感染可能参与胃癌的发生发展过程。
- 金劲激涂建欣吴明马海广沈贤薛向阳
- 关键词：胃肿瘤人巨细胞病毒
- 系统性红斑狼疮患者外周血人巨细胞病毒感染状态分析及意义被引量：3
- 2014年
- 目的检测SLE患者外周血人巨细胞病毒（HCMV）的感染状况，探讨HCMV感染在SLE发病中的作用。方法采集并抽提60例已确诊的SLE患者和111名健康人外周血白细胞DNA，利用巢式PCR技术检测HCMV糖蛋白gB（UL55）基因以确定HCMV感染情况。应用2个独立样本t检验、非参数检验、χ2检验及Fisher确切概率法统计分析。结果琼脂糖凝胶电泳及测序显示建立的巢式PCR能特异地检测HCMV．UL55基因，SLE患者外周血中HCMV检出率明显高于对照组[分别为41．7％（25／60）和1．8％（2／111），χ2=46．551，P〈0．01]。与外周血HCMV阴性组SLE患者相比，HCMV阳性组SLE患者抗核糖体P蛋白抗体（Rib．P）阳性率[分别为26％（9／35），56％（14／25），χ2=5．659，P=0．017]、直接Coomb’s试验阳性率[分别为37％（13／35），72％（18／25），χ2=7．096，P=-0．008]及抗β2糖蛋白1（GP1）抗体水平[分别为21．3（9．9，51．8）U/ml，13．6（5．9，23．1）U／ml；U=2．017，P=0．044]明显升高，血液系统相关指标中的红细胞[分别为（3．65±0．10）×10^12／L，（3．17±0．17）×10^12／L；t=2．574，P=0．013]、淋巴细胞[分别为（1．37±0．14）×10^12／L，（0．90±0．13）×10^12；t=2．456，P=0．017]、血红蛋白[分别为（110±19）g／L，（98±5）g／L；t=2．034，P=0．048]明显减少；肾损害相关指标中的血尿阳性率[分别为40％（14／35），72％（18／25）；χ2=6．000，P=0．014]、尿蛋白定量（24h）水平[分别为0．80（0．53，2．37）g，0．48（0．13，1．21）g；U=2．140，P=0．032]明显上升。结论外周血细胞HCMV感染可能参与SLE发生、发展过程。
- 陈静熊江彪叶文静朱小春章慧娣张丽芳薛向阳
- 关键词：巨细胞病毒聚合酶链反应
- 乳腺癌患者血浆中相关microRNA的表达及其临床意义被引量：8
- 2013年
- 目的:探讨乳腺癌患者血浆微RNA(microRNA,miRNA)的表达及其临床意义。方法:采用深度测序的方法,筛选8对乳腺浸润性导管癌及癌旁正常乳腺组织中差异表达的miRNA,选出在乳腺癌中高表达的miRNA;用实时荧光逆转录多聚酶链反应(realtime RT-PCR)方法对55例乳腺浸润性导管癌患者及30例作为对照的正常健康体检女性血浆中相应miRNA的表达水平进行检测。结果:深度测序发现miR-7、miR-21、miR-155、miR-182、miR-184、miR-196a在乳腺癌组织中表达上调;在乳腺癌患者及健康对照者血浆中用realtime RT-PCR方法进行检测发现其中miR-21、miR-155、miR-184、miR-196a在乳腺癌患者血浆中升高(P<0.001,P<0.001,P=0.002及P=0.028);其ROC曲线下面积及95%可信区间(95%CI)分别为:0.823(95%CI:0.730～0.916),0.780(95%CI:0.681～0.879),0.708(95%CI:0.591～0.826)和0.645(95%CI:0.527～0.763);miR-21和miR-155与乳腺癌淋巴结转移相关(P=0.001及P=0.024)。结论:miRNA在乳腺癌患者血浆中差异表达,与乳腺癌临床病理特征有关,有望成为乳腺癌新的血液肿瘤标志物。
- 黄关立薛向阳曾瑞超张筱骅郭贵龙
- 关键词：乳腺肿瘤微RNA肿瘤标志物
- HPV16 L1在整合型重组毕赤酵母中的表达及病毒样颗粒的纯化
- 2014年
- 目的构建可稳定表达HPV16L1的整合型重组毕赤酵母,并纯化自主组装成的HPV16L1病毒样颗粒(VLPs)。方法根据酵母密码子偏爱性优化HPV16L1基因并克隆到pPIC3.5K表达载体,构建pPIC3.5K/HPV16L1重组质粒;重组质粒经Bgl II酶切线性化后,电转化至GS115菌株中,筛选HPV16L1重组毕赤酵母。阳性整合菌株甲醇诱导后,以HPV16L1单克隆抗体检测目的蛋白表达;采用肝素亲和层析法纯化HPV16L1VLPs并进行透射电镜观察。结果PCR、酶切和测序分析表明成功构建了pPIC3.5K/HPV16L1重组质粒。成功构建的HPV16L1重组毕赤酵母甲醇诱导后,Western blot证实重组酵母菌裂解产物存在HPV16L1目的蛋白。肝素亲和纯化后,透射电镜观察到了直径大约55nm的VLPs,其形态与HPV16天然病毒颗粒相似。结论利用整合型重组毕赤酵母表达系统成功表达了HPV16L1蛋白,并用肝素亲和纯化可快速获得结构完整的HPV16L1VLPs,为HPV16预防性疫苗的研制奠定基础。
- 田晓娟冯娟张丽芳李文姝薛向阳
- 关键词：毕赤酵母表达系统病毒样颗粒
- 表达乙型肝炎表面抗原及前 S2蛋白120～146片段重组酵母菌的构建及全菌体免疫效应评价被引量：2
- 2014年
- 目的：构建表达 HBsAg 及前 S2蛋白120～146片段（PreS2120-146）-HBsAg 的重组酵母菌，并评价其全菌体免疫效应。方法根据酵母密码子偏爱性优化 PreS2120-146区及 HBsAg 基因序列，串联后克隆到毕赤酵母 pPIC3．5K 表达载体，构建 pPIC3．5K／PreS2120-146-HBsAg 质粒，重组质粒经 BgkⅡ酶切线性化后，电转化至 GS115菌株中，筛选 PreS2120-146-HBsAg 重组毕赤酵母，通过 SDS-PAGE、Western 印迹、ELISA 分析目的蛋白的表达；以表达目的蛋白的灭活酵母全菌体免疫 BALB／c 小鼠，采用 ELISA 检测其产生的 HBsAg 特异性抗体；以 HBsAg CTL 表位肽刺激免疫小鼠脾细胞，通过实时PCR 检测γ干扰素表达，分析其诱导的 CTL 反应。采用独立样本 t 检验。结果PCR、酶切和测序分析表明成功构建了 pPIC3．5K／PreS2120-146-HBsAg 重组质粒。重组毕赤酵母甲醇诱导后，SDS-PAGE、Werstern 印迹和 ELISA 证实 PreS2120-146-HBsAg 目的蛋白表达。与 HBsAg 纯抗原免疫比较，灭活重组酵母菌免疫小鼠产生抗 HBsAg 特异性 IgG 抗体水平相当（t＝0．946，P ＝0．381）。CTL 反应检测显示， HBsAg CTL 表位肽刺激灭活重组酵母菌免疫组小鼠的脾细胞产生更高水平的γ干扰素（t＝2．305，P ＝0．044）。结论利用整合型重组毕赤酵母表达系统成功表达了 PreS2120-146-HBsAg 目的蛋白，全菌体免疫小鼠后能诱导产生特异的体液免疫和细胞免疫反应。
- 陈向敏张跃进田晓娟夏平潘唯文夏天俞陈慧张丽芳薛向阳
- 关键词：PRES2毕赤酵母免疫反应
- 人巨细胞病毒感染与系统性红斑狼疮的相关性被引量：4
- 2014年
- 目的:分析人巨细胞病毒(HCMV)在系统性红斑狼疮(SLE)患者中的感染状况及与SLE临床指标的相关性。方法:采集并分离60例SLE患者和111例健康体检者的外周血白细胞及血清标本,建立细胞内HCMV UL55及UL138基因高度敏感特异的PCR方法,并检测SLE患者及健康体检者外周血白细胞内HCMV UL55及UL138基因,以确定HCMV感染情况,利用罗氏公司电化学发光法试剂盒检测血清HCMV IgG和IgM,比较SLE患者与健康体检者外周血白细胞内HCMV UL55、UL138检测及血清IgG、IgM检测的阳性率和相关性,统计分析外周血白细胞内HCMV感染与SLE常见临床指标的关系。结果:琼脂糖凝胶电泳及测序结果显示,建立的PCR方法能特异地检测外周血白细胞内HCMV UL55及UL138基因;血清HCMV IgG及细胞内HCMV UL138基因检测几乎全部呈阳性,SLE患者与健康体检者之间差异无统计学意义(P>0.05);血清HCMV IgM检测阳性率低,SLE患者血清HCMV IgM检测阳性率(为6.67%)略高于健康体检者(为0.90%)(P=0.052);SLE患者外周血白细胞内HCMV UL55基因检测的阳性率明显高于健康体检者(P<0.01)。HCMV感染4种检测方法的相关分析显示,细胞内HCMV UL138检测结果与血清HCMV IgG检测有较好的一致性。分析SLE患者外周血白细胞内HCMV感染状况与临床指标的相关性显示,与UL138基因不同,细胞内HCMV UL55检测呈阳性的SLE患者与检测呈阴性的SLE患者比较,存在多项明显差异的临床指标。结论:HCMV感染与SLE存在一定的相关性,但不同检测方法结果差异显著。
- 陈静章慧娣楼威洋邵蓉蓉张丽芳薛向阳朱小春
- 关键词：人巨细胞病毒系统性红斑狼疮聚合酶链式反应
