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不同环境条件对溶藻弧菌粘附大黄鱼肠粘液的影响被引量：24: 2006年; 研究了不同环境条件下溶藻弧菌对大黄鱼肠粘液的粘附作用。采用细菌计数法测定溶藻弧菌的粘附作用。粘附的细菌经SYBR GreenⅠ染色后在荧光显微镜下观察，用数码相机拍照后在电脑上计数。试验结果表明，溶藻弧菌对大黄鱼肠粘液的粘附量随菌浓度的升高而升高，并在1—1．5h内趋于饱和；粘附作用在15—30℃、pH偏酸时较强；盐度在5—35范围内对前肠粘液的粘附作用影响不明显，后肠粘液的粘附作用在此范围内随盐度增大而加强，在盐度为0时，溶藻弧菌对前、后肠粘液都无粘附作用；56℃热处理5min及60℃处理1h均能大幅减弱溶藻弧菌对两种肠粘液的粘附作用，表明溶藻弧菌表面的某些热敏结构在粘附作用中起着重要作用。根据以上结果，可以认为溶藻弧菌能够很好地粘附于大黄鱼肠粘液层，其粘附作用受温度、盐度、pH值等环境因子影响很大，溶藻弧菌表面的某些热敏结构可能在粘附过程中起着重要作用。研究结果表明，溶藻弧菌对大黄鱼肠粘液的粘附作用是可控制的，这对于鱼类养殖疾病的控制有一定的参考价值。; 鄢庆枇陈强邹文政马甡庄峙厦王小如; 关键词：溶藻弧菌大黄鱼粘附作用粘液

应用荧光抗体技术检测牙鲆体内的河流弧菌被引量：23: 2006年; 用灭活的河流弧菌(Vibrio fluvialis)抗原,注射免疫实验兔,制得凝集价为1∶5 120的抗血清。用试管凝集法检测了抗血清的特异性,再用免疫吸附法去除交叉反应,从而得到高效价、高特异性的抗河流弧菌血清。用所制备的抗血清在实验室中建立起河流弧菌荧光抗体检测技术(FAT),在荧光显微镜下可清楚地看到被标记的病原菌,整个检测过程只需3h。用河流弧菌感染牙鲆(Paralichthys olivaceus),24 h后,用FAT测定牙鲆的血液、肾脏和肝脏中的河流弧菌,在血液中河流弧菌的检出率最高,其次是肾脏,肝脏的检出率最低。以上结果表明:荧光抗体技术可以快速、灵敏、准确地检测出牙鲆体内的河流弧菌。; 鄢庆枇邹文政纪荣兴庄峙厦王小如

拮抗菌对病原性溶藻弧菌粘附大黄鱼鳃粘液的影响被引量：1: 2007年; 用3H-TdR同位素标记方法研究了分离自患病大黄鱼的溶藻弧菌和健康大黄鱼的7株拮抗菌对大黄鱼鳃粘液的粘附动力学以及拮抗菌对溶藻弧菌粘附的影响,试验结果表明:溶藻弧菌和7株拮抗菌对大黄鱼鳃粘液的粘附都属于饱和粘附;溶藻弧菌对大黄鱼鳃粘液的最大粘附量为4.1×105cells/well,7株拮抗菌的最大粘附量和亲和指数都高于溶藻弧菌;各菌株的分离常数都高于自身的最大粘附量,总体上呈现最大粘附量高的菌株其分离常数也大的趋势.7株拮抗菌在置换条件下都能显著降低溶藻弧菌对鳃粘液的粘附量,在竞争条件下有5株能够显著降低溶藻弧菌的粘附量,在排斥条件下仅有3株能够显著降低溶藻弧菌的粘附.结果表明:病原性溶藻弧菌对大黄鱼鳃粘液有较强的粘附作用;7株拮抗菌能够抑制溶藻弧菌的粘附,其中置换作用效果最好,排斥作用效果最差;拮抗菌和病原菌的粘附动力学特征可在一定程度上反映它们的相互作用效果,但是仅仅根据各菌株自身的粘附动力学特性无法推断其对病原菌粘附的抑制能力.; 池信才鄢庆枇郭国军王军苏永全; 关键词：溶藻弧菌拮抗菌粘附

病原性溶藻弧菌对大黄鱼鳃黏液黏附作用研究被引量：5: 2007年; 采用^3H-TdR同位素示踪方法研究了溶藻弧菌对大黄鱼鳃黏液黏附作用.结果表明,溶藻弧菌的黏附量随着菌浓度的增加而升高并在180 min后达到饱和;在温度15～30℃、pH偏酸条件下黏附作用较强,Na＋是溶藻弧菌黏附作用必需的,Ca^2＋起着辅助作用;溶藻弧菌经营养饥饿、热处理及高碘酸处理后黏附作用有明显下降;8种碳水化合物都有不同程度的促进溶藻弧菌的黏附作用,其中葡萄糖、甘露糖、果糖及麦芽糖有明显促进作用.研究结果表明：海水中的溶藻弧菌可很好地黏附于大黄鱼鳃黏液,其黏附作用受环境因子影响,并且与溶藻弧菌的表面碳水化合物、热敏结构等有着密切关系.; 鄢庆枇陈强马甡庄峙厦王小如; 关键词：溶藻弧菌大黄鱼

病原性河流弧菌对青石斑鱼体表黏液黏附特性的研究被引量：5: 2008年; 采用3H-TdR同位素示踪法研究了河流弧菌对不同处理后的青石斑鱼表皮黏液的黏附作用。结果显示:青石斑鱼表皮黏液经40、60和80℃热处理10min后河流弧菌的黏附率出现显著性升高,而100℃处理10min则能极显著降低河流弧菌的黏附作用;蛋白酶K和胰蛋白酶处理黏液对河流弧菌的黏附作用没有显著影响,高碘酸处理则能极显著提高河流弧菌的黏附率;8种碳水化合物中的葡萄糖、甘露糖、甘露醇、麦芽糖能极显著促进河流弧菌的黏附作用,乳糖、果糖及蔗糖能显著性促进河流弧菌的黏附作用;半乳糖则没有显著性影响;高浓度的细胞表面提取物能显著抑制河流弧菌的黏附作用,但较低浓度的细胞表面提取物反而有一定的促进作用;青石斑鱼表皮黏液经Sephadex G-100分离得到3个洗脱峰,河流弧菌对第1个洗脱峰的黏附作用最强。研究结果表明,病原性河流弧菌对青石斑鱼表皮黏液有较强的黏附作用;青石斑鱼表皮黏液中存在特异性黏附受体;黏液中的主要黏附受体是热稳定性较高、耐蛋白酶K和胰蛋白酶的大分子物质。; 王晓露邹文政鄢庆枇郭国军陈强; 关键词：河流弧菌青石斑鱼

大黄鱼血清IgM纯化及其兔抗血清的制备被引量：38: 2006年; 分别用饱和硫酸铵二次盐析法和蛋白A亲和层析法对健康大黄鱼(Pseudosciaena crocea)血清中的免疫球蛋白(IgM)进行分离纯化,所得产物用SDS-PAGE进行检测。结果表明,蛋白A亲和层析法可以较好地分离到高纯度的大黄鱼血清IgM,产物的电泳胶中只有重链和轻链2个条带;饱和硫酸铵二次盐析法除了有这2个条带,还有很多杂带,而且蛋白A亲和层析法更为简便、快速,因此用蛋白A亲和层析法分离纯化IgM优于饱和硫酸铵二次盐析法;大黄鱼免疫球蛋白重链的分子量在76 kD左右;轻链分子量在28 kD左右。用纯化的大黄鱼IgM免疫实验兔,获得效价高达1∶40 960的兔抗鱼IgM血清。本实验所建立的蛋白A亲和层析法提取大黄鱼血清IgM可以方便、快捷地获得高纯度的产物,适合在实验室中纯化鱼类IgM。本研究所制备的兔抗大黄鱼IgM血清可为今后的相关研究工作打下基础。; 鄢庆枇韩一凡高天翔庄峙厦王小如; 关键词：大黄鱼免疫球蛋白酶联免疫吸附分析

河流弧菌在天然海水与人工海水中的饥饿效应被引量：1: 2008年; 对数生长期河流弧菌分别悬浮于天然海水和人工海水后于28℃进行饥饿试验。在饥饿初期,两种海水中河流弧菌的总菌数、活菌数、菌落形成单位数都明显上升,但天然海水中的河流弧菌生长时间持续更久、增长幅度也更大;饥饿中、后期,总菌数都保持稳定,而可培养菌数与活菌数逐渐下降,其中可培养菌数下降幅度高于活菌数,人工海水中的河流弧菌下降幅度高于天然海水。河流弧菌对青石斑鱼表皮粘液的粘附量随着饥饿时间延长先上升后下降。与对数生长期相比,饥饿60d的可培养细胞对热和紫外线的耐受性提高。饥饿细胞的间接ELISA最低检测限高于对数生长期细胞。通过SDS-PAGE分析菌体蛋白发现饥饿细胞的蛋白质条带减少。腹腔注射饥饿60d的河流弧菌不会引起小鼠死亡,而对数生长期细胞能够引起小鼠死亡。研究结果表明,河流弧菌能够在温暖的人工海水和天然海水中长时间饥饿存活,但是饥饿细胞的毒力较低。; 义家波鄢庆枇邹文政黄琦琪胡雅娟; 关键词：河流弧菌饥饿存活粘附毒性

Non-specific immune response of bullfrog Rana catesbeiana to intraperitoneal injection of bacterium Aeromonas hydrophila: 2008年; Non-specific immune response of bullfrog Rana catesbeiana to pathogenic Aeromonas hydrophila was studied to 60 individuals in two groups.Each bullfrog in bacterium-injected group was injected intraperitoneally(i.p.) with 0.2 ml bacterial suspension at a density of 5.2 × 106 CFU/ml,while each one in control group injected i.p.with 0.2 ml sterile saline solution(0.85%,w/v).Three bullfrogs in both groups were sampled at 0,1,3,7,11,15 and 20 days post-injection(dpi) for the evaluation of non-specific immune parameters.It was observed that intraperitoneal injection of A.hydrophila significantly increased the number of leucocytes and that of NBT-positive cells in peripheral blood.Significant increases in serum bactericidal activity and serum acid phosphatase activity were also observed in the bacterium-injected frogs when compared with those in the control group.However,a significant reduction was detected in vitro in phagocytosis activity of peripheral blood phagocytes.No significant difference in changes in the number of peripheral erythrocytes,serum superoxide dismutase(SOD) activity,and lysozyme activity was detected between the two groups.It is suggested that bullfrogs may produce a series of non-specific immune reactions in response to the A.hydrophila infection.; 张俊杰邹文政鄢庆枇

河流弧菌对牙鲆表皮黏液黏附作用的研究被引量：1: 2008年; 为了解河流弧菌对牙鲆表皮黏液的黏附特性，采用^3H—TdR同位素示踪方法研究了细菌浓度、孵育时间、孵育温度、pH值、阳离子、碳水化合物等因子对河流弧菌黏附作用的影响。试验结果表明：河流弧菌能很好地黏附于牙鲆表皮黏液，黏附量随菌浓度升高而增大并符合饱和黏附动力学：y=417．891n（x）＋691．57（R^2=0．986）；在30℃下黏附量随着孵育时间的延长而增加，180min趋于饱和；孵育温度在4～30℃范围内黏附量随温度升高而增多，30℃时黏附量最大；pH值酸性较碱性黏附作用明显，pH为5时最强；NaCl浓度在0．5％～4．5％范围内，细菌黏附作用随着浓度升高而增强，较纯水存在显著性差异（P〈0．05）；Ca^2＋，Mg^2＋能显著加强河流弧菌的黏附作用，但Ca^2＋作用明显超过Mg^2＋；葡萄糖等8种碳水化合物能显著促进河流弧菌的黏附作用（P〈0．05）。以上结果说明：河流弧菌对牙鲆表皮黏液的黏附量较大，这有利于进一步感染、致病；河流弧菌的黏附作用受温度、pH值、阳离子、碳水化合物等多种环境因子的影响，较高的水温有利于河流弧菌的黏附，有利于疾病的发生。; 邹文政鄢庆枇纪荣兴张俊杰郭国军; 关键词：河流弧菌牙鲆

大黄鱼病原副溶血弧菌拮抗菌的筛选被引量：14: 2008年; 用点种法从大黄鱼肠道优势菌群中筛选出104株病原性副溶血弧菌的拮抗菌,进一步研究拮抗效果最好的11株拮抗菌的抗菌谱和生长曲线,其中NAC平板上筛选的4株拮抗菌的抗菌范围较广,锰营养琼脂培养基上筛选的3株拮抗菌具有生长优势。用BIOLOG板测定了抗菌谱较广、有一定生长优势3株拮抗菌(R22,Y58和J312)的碳源利用情况,结果表明,3株拮抗菌的碳源谱都比较广,都能利用糖类、有机酸和氨基酸等,而且与鱼类营养的竞争较小。16S rRNA基因同源性分析的结果显示与R22,Y58,J312同源性达99%以上的菌株分别来自弧菌属、芽孢杆菌属和假单胞菌属。进一步对R22,J312和Y58三株拮抗菌进行生化鉴定,结果显示R22为溶藻弧菌,J312为荧光假单胞菌,但Y58的种属未能得到确认。所得到的3株拮抗菌R22,Y58,J312在拮抗病原菌、抗菌谱、生长特性和营养利用等方面都初步满足益生菌的筛选条件,有待进一步检测其安全性和实用效果以便能够成为能实用的益生菌。; 郭国军覃映雪陈强邹文政鄢庆枇; 关键词：大黄鱼拮抗菌抗菌谱 RRNA 碳源利用

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国家高技术研究发展计划(2002AA639600)

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