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利用染色体加倍技术创建油菜非整倍体被引量：5: 2008年; 采用秋水仙素染色体加倍技术,获得了纯合黑籽甘蓝型油菜品系NJ230(Brassica napus)的染色体加倍材料(2n=76).对加倍材料连续自交3代,观察加倍材料后代染色体数目及性状变异,结果表明:(1)加倍材料当代(D1)植株矮化;(2)加倍材料自交1代群体(D2)呈现雄性不育、种子颜色等性状变异;(3)加倍材料自交2代后(D3、D4),多数植株染色体数为2n≤38;(4)获得了1个2n=32的黄籽非整倍体系.本实验为油菜非整倍体创建提供了一种可行的方法.; 杨桂娟姜淑慧忻如颖王建飞管荣展杨清; 关键词：甘蓝型油菜秋水仙素非整倍体

DOF转录因子AtDof1．7RNA干扰载体的构建及拟南芥的遗传转化被引量：7: 2011年; DOF(DNA binding with one finger)转录因子是植物特有的转录因子家族,含有一个独特的富含Cys残基的单锌指DNA结合区域,在植物生长发育中参与多种生物学过程。本研究根据拟南芥AtDof1.7基因(GenBank登录号为AT1G51700)序列设计含有不同酶切位点的特异性扩增引物,以拟南芥总DNA为模板,扩增AtDof1.7基因片段,将AtDof1.7基因正向反向分别插入表达载体的相应位置,构建成AtDof1.7基因的RNA干扰载体pADOF1。利用改良的floral-dip方法将干扰载体pADOF1成功转入野生型拟南芥,经草甘膦抗性筛选和PCR检测获得5株阳性转基因植株。利用RT-PCR技术和气相色谱法分别分析了AtDof1.7基因的表达和种子脂肪酸组成,结果表明,5株转基因植株中AtDof1.7基因的表达量不同程度低于野生型植株,种子油酸含量明显上升,亚麻酸含量明显下降,说明AtDof1.7转录因子与拟南芥种子脂肪酸代谢途径有一定的关系,为进一步研究其在脂肪酸代谢过程中的调控作用以及在油菜中研究该类转录因子的功能奠定了基础。; 尹明智官梅肖钢李栒官春云; 关键词：拟南芥 RNA干扰载体

Advances in Normalized cDNA Library and Its Applications被引量：5: 2010年; The cDNA library normalized by reassociation is a newly-developed and effective platform for EST acquisition and gene discovery.It decreases the prevalence of clones representing abundant transcripts and dramatically increases the efficiency of random sequencing and rare gene discovery.The principle,procedure and applications of normalized cDNA library were reviewed in this paper,which provides theoretical basis for the development of normalized cDNA library and discover more novel genes.; 张振乾肖钢谭太龙周可金官春云; 关键词：SMART NORMALIZATION

重叠延伸PCR克隆拟南芥ACCase基因和植物表达载体构建被引量：5: 2009年; 植物的乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酸单酰辅酶A,是脂肪酸合成的第一步,该步骤是种子脂肪酸合成与含油量形成的关键调控步骤。拟南芥中的真核形式ACCase基因cDNA长约7 000bp,难以直接克隆。本研究先通过常规PCR将其cDNA分成八个重叠的片段分别扩增出来,再用重叠延伸PCR将得到的片段逐步拼接成长度为6 890bp的完整的基因序列,测序证实克隆序列正确无误,最后将其克隆到农杆菌转化植物的载体上。序列分析发现ACCase基因的开放阅读框长度为6 765bp,编码一个含2 254个氨基酸残基的多肽链,推测其分子量约为250kDa。ACCase基因的成功克隆为利用该基因调控油料作物的含油量奠定了良好基础,同时为克隆长度较大的基因提供了一种经济可行的方法。; 胡亚平夏玉平吴刚武玉花肖玲李均卢长明; 关键词：重叠延伸PCR 乙酰辅酶A羧化酶基因克隆

油菜脂酰CoA合成酶基因pXT166的鉴定和功能分析被引量：10: 2009年; 长链脂酰CoA合成酶(LACSs)在脂肪酸的合成代谢与分解代谢中起着重要的作用,它把游离脂肪酸活化为脂酰CoA硫酯。pXT166经证实具有编码长链脂酰CoA合成酶活性。本研究通过酵母互补实验验证了pXT166具有LACS的酶活性。分析该基因编码蛋白的底物偏好性显示,长链饱和脂肪酸是其优先底物。RT-PCR分析表明,在不同油脂含量的油菜品系种子中,授粉后35d,该基因在高含油量的种子中表达更强,表明pXT166参与了油菜种子中油脂的合成,与种籽含油量相关。; 朱福各谭小力崇保强周佳袁伟伟

六个甘蓝型油菜油酸脱氢酶(FAD2)假基因的克隆和分析被引量：11: 2010年; 以甘蓝型油菜湘油15为材料,采用PCR方法克隆并分析了56个FAD2基因克隆和47个FAD2基因cDNA克隆,从中发现6个新的FAD2拷贝。它们与公布的甘蓝型油菜FAD2基因(AY577313)具有87.0%以上的同源性,没有内含子,在开放阅读框中存在1～12个终止密码子,其中有2个拷贝具有转录功能。将这6个FAD2拷贝在酿酒酵母中进行体内表达实验,通过气相色谱检测脂肪酸组成证明其不具备油酸脱氢酶功能,与对照相比,也没有改变酵母体内脂肪酸组成。由此推测这6个FAD2拷贝为假基因。; 肖钢张振乾邬贤梦谭太龙官春云; 关键词：甘蓝型油菜 FAD2 基因表达酿酒酵母

甘蓝型油菜生物素羧基载体蛋白基因的克隆与结构分析被引量：9: 2007年; 【目的】生物素羧基载体蛋白负责将羧基从生物素羧化酶转移到羧基转移酶上,对于长链脂肪酸的从头合成与种子含油量的形成具有十分重要的作用。本研究的目的是从甘蓝型油菜品种基因组DNA中分离生物素羧基载体蛋白(BCCP)基因的全长编码区序列,通过生物信息学分析揭示该基因的结构特征(包括内含子的数量、长度与分布,蛋白质保守区疏水性特征等)和功能关系。【方法】基因克隆采取同源序列法进行。【结果】分离得到的bccp基因全长均为1600bp左右,根据其结构特点可以分成3种类型,它们均包含5个内含子。bccp1基因编码的蛋白质具备完整的生物素化功能结构域,是唯一功能完整的基因序列;bccp2和bccp3由于移码突变造成蛋白合成提前终止,翻译的蛋白质均缺少生物素化结构域。【结论】本研究首次从中国冬油菜品种中克隆获得bccp基因的全长序列并揭示了其序列特征,为进一步利用该基因开展含油量的基因调控研究提供了科学依据。; 戴晓峰卢长明吴刚武玉花肖玲; 关键词：基因克隆基因结构分析甘蓝型油菜

油菜种子特异表达启动子pNapB和pFAE1的结构与功能比较研究被引量：7: 2008年; 启动子是基因在转录水平上的一种重要调控元件。本研究通过同源序列法从甘蓝型油菜品种中油821中分离到油菜基因NapB和FAE1的上游启动子序列pNapB和pFAE1,其中pNapB长1136bp,pFAE1长1420bp。两种启动子的核苷酸序列都含有种子特异表达启动子的顺式作用元件,包括RY重复、G-box和E-box等,但两种启动子顺式作用元件的序列分布不同。将pNapB和pFAE1两个启动子分别与报告基因GUS融合并通过农杆菌介导法导入烟草,得到大量转基因烟草植株。对T1代转基因烟草进行组织化学分析,比较了不同启动子的组织表达特异性。结果表明,两种启动子都只在种子中起作用,属于典型的种子特异性表达启动子,但是它们作用的时间和空间分布以及作用强度明显不同。pNapB启动子比pFAE1作用开始的时间早,持续时间长,在早期作用比pFAE1强,但pFAE1启动子在种子发育中期启动速度快,成熟种子的GUS染色深度在两种启动子间差别不大。; 肖娜武玉花肖玲吴刚卢长明; 关键词：GUS 转基因烟草

高油酸油菜研究进展及其前景展望被引量：13: 2009年; 综述了高油酸菜油的功能、油酸的遗传特性、不同高油酸油菜的育种方法(小孢子培养、远缘杂交、诱变和转基因技术)的研究进展和目前高油酸菜油的发展概况。认为要加强对高油酸遗传特性的研究,将各种有利的栽培方法、育种方法结合使用,促进高油酸产业的发展。; 张振乾肖钢谭太龙官春云; 关键词：高油酸油菜育种

甘蓝型油菜油酸脱氢酶基因(fad2)多个拷贝的发现及分析被引量：26: 2008年; 以甘蓝型油菜湘油15为材料,随机挑选56个来自基因组的fad2基因克隆、47个来自幼苗整株的fad2基因cDNA克隆和9个授粉27d后种子中fad2 cDNA克隆进行双向测序。基因组中56个fad2序列的碱基同源性为91.0%～99.9%,从中得到11个差异序列,即11个不同的fad2基因拷贝。将其翻译成氨基酸序列发现,6个拷贝在编码区中出现多个终止密码子,另外5个的同源性为90.60%～99.74%,与47个来自幼苗整株的fad2基因cDNA序列进行比较,发现fad2基因没有内含子。从种子中的9个fad2 cDNA克隆序列中找到2个有差异的cDNA,它们的编码区中没有终止密码子,说明在种子中有多个fad2基因表达。基因组中的11个拷贝根据同源性可分成两组,命名为fad2I和fad2II。RT-PCR分析发现在授粉27d的种子中fad2I有较强表达,fad2II没有表达;但在叶片中两者都有表达。; 肖钢张宏军彭琪官春云; 关键词：甘蓝型油菜基因拷贝数

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国家重点基础研究发展计划(2006CB101600)

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