辽宁省教育厅高等学校科学研究项目(L2010302)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 相关作者：黄波郎贤平王晓东更多>>
- 相关机构：辽宁医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- ABCE1基因siRNA稳定转染小细胞肺癌细胞株阳性克隆的筛选被引量：2
- 2011年
- 目的构建携带绿色荧光蛋白的ABCE1基因的siRNA表达载体,通过将载体转染入小细胞肺癌细胞株NCI-H446,筛选稳定转染细胞株。方法根据ABCE1的DNA序列设计3对siRNA引物,构建可用于筛选阳性克隆且带有绿色荧光的ABCE1基因siRNA表达载体ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-1、ABCE1-PRNAT-U6.1/Neo-siRNA-2及ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-N,采用FUGENE-HD法将载体转染入NCI-H446细胞中,并以G418进行阳性克隆筛选,筛选ABCE1基因沉默的稳定转染细胞系。结果经酶切和DNA测序验证,证实ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA表达载体构建成功。将ABCE1基因siRNA表达载体成功转染小细胞肺癌细胞NCI-H446后,小细胞肺癌细胞内可见绿色荧光,通过G418筛选,获得了ABCE1基因沉默的小细胞肺癌细胞系,该细胞系的ABCE1水平明显低于未转染siRNA的小细胞肺癌细胞。结论成功的构建了ABCE1基因siRNA表达载体ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA。筛选出ABCE1基因沉默的稳定转染小细胞肺癌细胞系,为今后应用ABCE1基因siRNA表达载体研究ABCE1基因的作用机制提供实验基础。
- 黄波王晓东郎贤平
- 关键词：小细胞肺癌SIRNA
- 热疗联合顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响及机制探讨被引量：1
- 2012年
- 目的观察热疗联合顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法将对数生长期的NCI-H446细胞随机分为A、B、C、D组,A组常规培养不进行特殊处理,B组将细胞消化后放置离心管中在42℃水浴中加热2 h,C组加入含2μg/mL顺铂的培养液4μg/孔,D组先经过水浴处理后加入顺铂。继续培养72 h后,采用流式细胞仪测算各组细胞凋亡率,采用Western blot法检测各组细胞中的Bcl-2、Bax。结果 NCI-H446细胞凋亡率A组为4.25%±0.56%、B组为8.12%±0.64%、C组为10.02%±0.82%、D组为12.12%±0.49%,B、C、D组细胞凋亡率与A组比较,P均<0.05;D组与B、C组比较,P均<0.05。NCI-H446细胞中Bcl-2、Bax相对表达量A组分别为0.89±0.002 8、0.18±0.001 8,B组分别为0.61±0.004 2、0.32±0.002 0,C组分别为0.30±0.003 6、0.48±0.001 4,D组分别为0.21±0.001 7、0.64±0.002 5。B、C、D组与A组比较,P均<0.05;D组与B、C组比较,P均<0.05。结论热疗联合顺铂可诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡,其机制与降低细胞中Bcl-2表达、升高Bax表达有关。
- 黄波王晓东郎贤平
- 关键词：顺铂细胞凋亡小细胞肺癌
- ABCE1基因对小细胞肺癌增殖、侵袭、迁移能力的影响被引量：3
- 2013年
- 目的构建ABCE1基因的SiRNA表达载体,通过将载体转染入小细胞肺癌细胞株NCI-H446,研究ABCE1基因对小细胞肺癌增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法根据ABCE1的DNA序列设计3对SiRNA引物,构建携带红色荧光的重组质粒ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2、ABCE1-SiRNA-N。采用lipofect2000法将载体ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2、ABCE1-SiRNA-N转染入小细胞肺癌细胞中。转染48 h后应用West-ern印迹法检测转染后ABCE1蛋白表达。MTT法、Transwell小室、划痕实验检测NCI-H446细胞在转染前后的增殖能力、侵袭能力、迁移能力的改变。结果经酶切和DNA测序验证,证实ABCE1-SiRNA表达载体构建成功。转染ABCE1-SiRNA后的小细胞肺癌细胞内可见红色荧光。在转染ABCE1-SiRNA-N的NCI-H446细胞中ABCE1基因呈高表达,而转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2的细胞呈低表达。MTT实验提示,转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2的小细胞肺癌细胞与转染ABCE1-SiRNA-N的同类细胞相比增殖能力受到明显抑制。Transwell实验发现转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2后的小细胞肺癌细胞穿膜细胞数较未转染和转染ABCE1-SiRNA-N组细胞明显减少。划痕实验显示转染ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2后的小细胞肺癌细胞迁移速度明显慢于转染ABCE1-SiRNA-N的细胞和对照组细胞。结论成功构建了ABCE1基因SiRNA表达载体ABCE1-SiRNA。ABCE1基因SiRNA表达载体ABCE1-SiRNA-1、ABCE1-SiRNA-2转染人小细胞肺癌细胞后不仅可抑制ABCE1基因的表达,而且还能明显的抑制细胞生长,使其增殖能力下降,降低其侵袭、迁移能力。
- 黄波王晓东郎贤平
- 关键词：小细胞肺癌SIRNA
