国家自然科学基金(30901315)
- 作品数：2 被引量：13H指数：1
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- 相关机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 狂犬病毒MHC限制性CTL与Th表位的预测与鉴定被引量：13
- 2013年
- 目的:预测并筛选鉴定狂犬病毒糖蛋白及核蛋白BALB/c小鼠MHC限制性CTL和Th表位。方法:从NCBI数据库中获取狂犬病毒糖蛋白及核蛋白的完整氨基酸序列,然后运用生物信息学软件BIMAS、SYFPEITHI和RANKPEP对CTL表位及Th表位进行预测并合成相关抗原表位。BALB/c小鼠经狂犬疫苗免疫后,通过淋巴细胞增殖实验对预测的多肽进行初步筛选。初步筛选的多肽再利用ELISPOT和流式细胞法进行进一步筛选,检测指标主要包括细胞因子IFN-γ和IL-4的分泌水平以及多肽对CD3+CD4+/CD3+CD8+T细胞亚群的影响情况。结果:经软件预测获得8条可能的CTL与Th表位,多肽合成后经分析各条多肽纯度大于90%。实验验证后证明2条多肽G367-381及G333-341能够成为细胞表位,其中G367-381作为Th表位,G333-341作为CTL表位。结论:G367-381及G333-341是狂犬病毒的细胞表位,可用于未来狂犬病毒表位疫苗的研究。
- 胡晓波朱乃硕
- 关键词：狂犬病毒
- 乙肝病毒X基因可调控表达细胞模型的构建
- 2013年
- 利用四环素诱导型慢病毒系统(Lentil-XTMTet-On Advanced Inducible Expression System)构建了含有乙肝病毒X基因(HBx)的可诱导表达载体质粒,利用慢病毒包装细胞系HEK293T细胞分别获得含有调控元件rt-TA和HBx基因的病毒颗粒,滴度达到108LPs/mL。将两种病毒先后感染HepG2肝癌细胞系,分别利用G418和Puromycin抗生素筛选获得整合有HBx基因的稳定细胞株。在体系中加入Dox时,应用RT-PCR和Western blot方法验证了HBx基因的可诱导表达。可诱导表达细胞模型构建成功,为进一步研究HBx基因在对宿主感染致病和免疫耐受中的作用提供了一种较理想的试验模型。
- 白荷露刘蕊朱乃硕
- 关键词：乙型肝炎病毒基因慢病毒表达载体四环素调控
