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人α-LA真核表达载体的构建及其在猪成纤维细胞的表达: 为了构建人α-乳清蛋白(α-lactalbumin,α-LA)真核表达载体,将其转染至猪的成纤维细胞,获得稳定高表达人α-LA的细胞,本研究根据猪基因密码子偏爱性优化并合成人α-乳清蛋白基因序列,并将其定向克隆入pIRE...; 李艳玲王颖党文庆郝柱徐宁迎张金枝; 关键词：真核表达载体转染成纤维细胞; 文献传递

猪供核细胞不同处理对细胞凋亡及重构胚体外发育的影响: 2014年; 在核移植过程中,为了选择出一种最优的供核细胞处理方法,采用接触抑制、血清饥饿以及75 nmol/L曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)3种方法分别对猪体细胞进行处理。通过AnnexinV-FITC法检测3种处理对细胞凋亡的影响,并将3种方法分别处理过的体细胞作为供核细胞,利用体细胞核移植技术(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)研究供核细胞不同处理方法对猪重构胚体外发育能力的影响。结果表明:接触抑制和75 nmol/L TSA处理组对细胞的早期凋亡、晚期凋亡以及细胞坏死率同对照组比较差异不显著,而血清饥饿处理组无论是早期凋亡、晚期凋亡还是细胞坏死率均显著高于对照组。3种方法处理供核细胞,接触抑制处理组卵裂率同血清饥饿处理组比较,差异不显著,但是其显著高于75 nmol/L TSA处理组。3种方法处理的重构胚囊胚率差异不显著。接触抑制方法处理供核细胞相对于其他2个处理组更有利于重构胚的体外发育。; 任亮刘娣马红付博汪亮朱蒙; 关键词：凋亡血清饥饿重构胚

Scriptaid处理可提高近交系五指山猪克隆胚胎的发育能力和克隆效率被引量：3: 2011年; 为探讨一种新型低毒的组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid处理克隆胚胎时对其发育能力和克隆效率的影响,本研究以近交系五指山小型猪胎儿成纤维细胞为供体细胞进行体细胞核移植构建重构胚胎,重构胚胎激活后培养在添加Scriptaid不同浓度(0～300nmol/L)的胚胎培养液中培养不同的时间(0～36h),观察克隆胚胎的卵裂率和囊胚率,评价克隆胚胎体外的发育能力。实验结果发现100nmol/L Scriptaid处理24h组克隆胚胎的囊胚发育率(30.4%)较对照组(17.5%)显著提高,P<0.05。将100nmol/L Scriptaid处理24h组克隆胚胎和对照组胚胎分别移植到4头受体母猪中,进一步观察其体内的发育能力。处理组克隆胚胎的受体在平均窝产仔数和克隆效率(分别为5头,2.4%)均显著高于对照组(分别为1.5头,0.7%),P<0.05。以上结果表明,100nmol/L Scriptaid处理24h近交系五指山小型猪克隆胚胎,有利于提高克隆胚胎的发育能力和克隆效率。; 朱彦宾龙川冯冲潘登科罗玉柱; 关键词：核移植胚胎克隆效率

大肠杆菌植酸酶appA2基因真核表达载体的构建及在细胞中的表达被引量：1: 2011年; 根据已经公布的植酸酶appA2基因序列,设计合成了1对特异性引物,应用RT-PCR技术从大肠杆菌中扩增得到植酸酶appA2基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建了重组真核表达质粒pcDNA-appA2,对重组表达质粒鉴定正确后,转染猪PK15细胞,经G418筛选后,通过实时荧光定量PCR检测细胞内appA2表达,同时测定细胞内植酸酶的活性,检测结果表明,本试验成功构建了pcDNA-appA2重组真核表达载体,转染细胞后appA2的表达量是对照组的1 686.55倍,同时具有较好的植酸酶活性,为通过生物反应器制备植酸酶研究奠定了基础。; 白立景鞠辉明牟玉莲杨述林李奎陈明勇; 关键词：植酸酶真核表达载体

转基因家畜对环境和食品的安全性分析及应对策略: 应用转基因技术对家畜进行遗传改良,必将给畜牧业生产带来革命性的变化。与此同时,与其它转基因生物一样,其安全性也引起了广泛关注。为促进转基因家畜研发工作的健康发展,本文对其可能影响环境和食品安全性的因素进行了分析,并提出相...; 魏庆信刘西梅乔宪凤熊忠良郑新民; 关键词：转基因家畜环境安全食品安全; 文献传递

利用启动子缺陷型打靶载体敲除五指山小型猪GGTA1基因被引量：16: 2011年; 目的:获得α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除的五指山小型猪胎儿,为异种器官移植研究提供基础平台。方法:以新霉素磷酸转移酶基因(neo)为筛选标记基因构建启动子缺陷型打靶载体,打靶载体线性化后用电转染法将其导入胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞经G418筛选后,用PCR法检测药物抗性的细胞克隆,对阳性细胞进行核移植构建重构胚胎及胚胎移植。结果:转染后,经筛选共得到176个具有G418抗性的细胞克隆,经PCR检测,其中2个细胞克隆发生了同源重组;以其中1个GGTA1+/-细胞克隆为供体细胞进行核移植,将重构胚移植到2头自然发情的受体母猪中,1头受体妊娠;第37 d将代孕母猪处死,获得2个胎儿,经PCR和Southern印迹鉴定,均为GGTA1单等位基因敲除胎儿。结论:构建了五指山小型猪GGTA1基因部分外显子4区域敲除的启动子缺陷型打靶载体,获得了GGTA1单等位基因敲除的胎儿,为培育GGTA1基因敲除的五指山小型猪奠定了基础。; 郑道山冯冲朱彦宾龙川冯书堂潘登科马文丽; 关键词：五指山小型猪基因敲除胎儿成纤维细胞

转基因家畜的新品系培育: 2011年; 分析了利用现有的转基因技术所获得的G0代转基因家畜外源基因的整合和表达状况:在随机整合的情况下,存在大量嵌合体现象,不同的整合位点其表达效应不同;应用基因打靶技术实现定位整合,情况相对简单。在此基础上,提出不同整合类型对G0代转基因家畜进行遴选的方法和程序,以及建立转基因家畜纯合体的两条技术路线:一是利用遴选出的具有遗传稳定性的G0代个体,通过常规繁育获得;二是利用基因打靶技术,获得双等位基因整合(或敲除)的家畜。最后根据家畜育种的理论,提出了建立转基因新品系、进而形成新品种的步骤。; 魏庆信郑新民; 关键词：转基因家畜纯合体新品系

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国家科技重大专项(2008ZX08006-003)