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DNA聚合酶Polι在紫外损伤诱导基因组高突变中的作用: 2008年; 目的研究DNA聚合酶Polι在紫外损伤耐受及基因组高突变产生中的生物学作用。方法紫外线照射稳定高表达DNA聚合酶iota(DNA polymerase iota,Polι)的HEK293T细胞系(Polι-HEK293T),MTT法检测紫外损伤后细胞的存活率;supF报告基因体内突变检测系统检测基因的突变频率。结果MTT法结果提示紫外照射后稳定高表达Polι的细胞系与对照组相比细胞存活率没有显著差异;supF报告基因结果显示稳定高表达Polι的细胞系其基因突变频率高于对照组细胞。结论DNA聚合酶Polι的高表达对紫外损伤后细胞的存活率没有显著影响,不能提高细胞对紫外损伤的耐受,在紫外损伤中polι主要参与诱发体内基因组高突变的产生。; 曾益军周虎传位全芳赵谦杨劲; 关键词：突变

人PCNA泛素化修饰在顺铂诱导的DNA损伤应答反应中作用的实验研究: 目的:研究PCNA泛素化修饰在顺铂诱导的DNA损伤应答中的生物学作用。方法:采用显性负突变策略(dominant negative mutant),通过构建PCNA泛素化位点(K164)点突变体mPCNA(mutant ...; 位全芳曾益军周虎传杨劲; 关键词：PNCA 泛素化修饰顺铂细胞周期; 文献传递

DNA聚合酶Y家族在跨损伤复制中的作用被引量：3: 2013年; 普通的DNA聚合酶可以对正常的DNA完成复制,但是当DNA发生损伤,损伤位置就会成为DNA复制的阻滞点,普通的DNA聚合酶就无法完成基因组的复制。为了应对这种情况,生物体内还拥有另一类DNA聚合酶:聚合酶Y家族,又被称为跨损伤复制(TLS)聚合酶,它们的主要功能就是跨越损伤位点,完成基因组复制,解救濒死细胞。本文主要对Y家族聚合酶的结构特点、功能效应、作用机制等方面做一综述。; 弓毅杨劲; 关键词：DNA损伤

DNA聚合酶iota在HEK-293细胞中高表达体系的建立: 目的:建 DNA 聚合酶 iota 在 HEK-293细胞中的高表达体系。方法:用脂质体2000(Lipofectamine2000)将已构建的带有目的基因的真核表达质粒 PCDNA3.1转 HEK-293细胞,通过 G...; 周虎传杨劲曾益军位全芳何凤田赵谦李劲刘洋李杰; 关键词：HEK-293细胞

DNA聚合酶Polι的研究进展: 2011年; Y家族DNA聚合酶是一种跨损伤复制酶,即能以损伤的DNA为模板进行复制。Y家族DNA聚合酶广泛分布生物界,人类细胞中Y家族DNA聚合酶至少包括Rev1、Polκ、Polι、Polη四种,Polι在以DNA为模板进行复制时错配率很高而不同于其他跨损伤DNA聚合酶,Polι是目前发现的所有DNA聚合酶中保真性最低的DNA聚合酶。很高的错配率导致很高的突变率,最后基因的突变导致癌症的发生,因此Polι在各个国家被广泛的研究,并且对Polι的各个不同的特性进行了研究,取得了一系列成果,现对Polι的研究进展予以综述,并展望了未来的研究趋势。; 周虎传杨劲; 关键词：DNA聚合酶

DNA聚合酶iota在HEK-293细胞中高表达体系的建立: 2008年; 目的:将带有DNA聚合酶iota(DNA Polymerase iota,Polt)目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1转入HEK-293细胞,建立DNA聚合酶iota在HEK-293细胞中的高表达体系,为进一步研究DNA聚合酶在DNA损伤修复中的生物学功能奠定了基础。方法:用脂质体2000(Lipofectamine2000)将带有目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1转入HEK-293细胞,通过G418筛选抗性克隆,用一步法提取细胞总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测出高表达克隆。结果:通过G418筛选筛选出了具有G418抗性的克隆,通过RT-PCR技术检测出高表达DNA聚合酶iota的HEK-293细胞系。结论:建立了高表达DNA聚合酶iota的HEK-293细胞系,为进一步研究DNA聚合酶在DNA损伤修复中的生物学功能奠定了基础。; 周虎传杨劲曾益军位全芳何凤田赵谦李劲刘洋李杰; 关键词：HEK-293细胞 DNA损伤 DNA修复

增殖细胞核抗原突变体的稳定高表达对HeLa细胞顺铂敏感性的影响被引量：2: 2008年; 目的建立稳定高表达增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)或突变体PC-NA(mutant PCNA,mPCNA)目的蛋白的宫颈癌细胞系HeLa细胞,观察PCNA在顺铂诱导的DNA损伤修复中的作用。方法采用显性负突变策略,通过构建重组人PCNA或mPCNA的真核表达质粒pCDNA3.1/V5-His A-PCNA(His-PCNA)和pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA(His-mPCNA),稳定转染到HeLa细胞中,G418筛选建立稳定高表达目的蛋白的HeLa细胞系;Western印迹法检测蛋白的表达情况;MTT法测定顺铂损伤后不同细胞系的细胞存活率。结果真核表达质粒经酶切、测序分析与实验设计完全一致;稳定建系后,Western印迹结果显示在相应位置可见清楚的目的条带;MTT结果显示稳定高表达突变体PCNA的细胞系与对照组相比,其细胞存活率呈明显下降趋势。结论成功构建了真核表达质粒His-PCNA和His-mPC-NA;建立了稳定高表达该质粒的HeLa细胞系;稳定高表达突变体PCNA的细胞系对顺铂损伤更敏感。; 位全芳曾益军杨劲周虎传刘洋徐志刚袁方赵友光; 关键词：增殖细胞核抗原稳定转染 HELA细胞顺铂

Polι在膀胱尿路上皮癌细胞株及肿瘤组织中mRNA的表达被引量：3: 2008年; 目的检测DNA聚合酶ι(Polymerase iota,Polι)在尿路上皮癌细胞株及肿瘤组织的表达,探讨Polι在尿路上皮癌组织表达的意义。方法培养尿路上皮癌细胞株BIU87、T24,反转录聚合酶链式反应(Reverse transciptase-polymer-ase chain reaction,RT-PCR)检测Polι在尿路上皮癌细胞株的表达;收集人膀胱黏膜正常组织及临床膀胱尿路上皮癌、肾盂尿路上皮癌组织标本,检测组织标本中Polι的表达。结果Polι在尿路上皮癌细胞株有丰富表达,显著高于膀胱正常黏膜组织;Polι在膀胱尿路上皮癌及肾盂癌组织的表达显著高于膀胱正常黏膜组织的表达(P<0.01),并与尿路上皮癌的分级有关。结论Polι在尿路上皮癌组织的高表达可能与尿路上皮癌的发生、发展有关。; 赵谦曾益军杨劲金锡御陈志文宋波位全芳季惠翔李劲周虎传; 关键词：DNA聚合酶 POLL 尿路上皮癌

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