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奥利亚罗非鱼卵巢芳香化酶基因的克隆及其表达被引量：14: 2008年; 采用RT-PCR和快速扩增cDNA末端（RapidamplificationofcDNAends，RACE）法分离出奥利亚罗非鱼（Oreochromisaureus）卵巢芳香化酶（P450aromA）的全序列，得到1784bp的全长cDNA，包括38bp5’非翻译区，1566bp阅读框以及含Poly（A）信号（AATAAA）的167bp3’非翻译区[不包括Poly（A）]。阅读框共编码521个氨基酸，推算的蛋白质分子量为59kD。同源性分析显示，奥利亚罗非鱼P450aromA的氨基酸序列与其他鱼类性腺芳香化酶（P450arom）具有70％以上的同源性，与其他鱼类脑P450arom有60％左右同源性，但其芳香化酶高保守区包括I．螺旋区、芳香化酶特异保守区和血红素结合区分别与其他鱼类P450arom的同源性高达83％--96％、78％～86％和85％-100％。系统发育分析表明，奥利亚罗非鱼P450aromA属于鱼类性腺P450arom，分子系统进化树分析结果与根据传统的形态学和生化特征分类结果基本一致。生物信息学分析显示，奥利亚罗非鱼P450aromA基因编码的蛋白无信号肽，无跨膜区域，为非分泌型蛋白。同时还含有多个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、N．糖基激化位点、N．肉豆蔻酰化位点及蛋白激酶C磷酸化位点。使用Taqman探针法检测P450aromA在奥利亚罗非鱼成鱼各种组织中的表达。结果发现，P450aromA只在卵巢中表达。同时比较了鱼苗、鱼种和成鱼卵巢中P450aromA的表达差异，结果显示，鱼苗中无P450aromA的表达，成鱼中P450aromA的表达量是鱼种阶段的30倍。; 唐永凯李建林陈文华俞菊华; 关键词：奥利亚罗非鱼 RACE 芳香化酶 TAQMAN探针

奥利亚罗非鱼AMH基因结构及其表达被引量：8: 2009年; 抗缪勒氏管激素（antiMullerian hormone, AMH），也称缪勒氏管抑制物质（mullerian inhibiting substance, MIS），为肽类生长因子，属于TGFβ生长和分化因子家族。应用RTPCR和RACE法，从奥利亚罗非鱼精巢组织中分离出AMH的cDNA。分离到3′UTR长为621 bp和168 bp的两条cDNA，除了长度不一，两者之间只存在两个碱基的差别。5′UTR为 27 bp，阅读框为1 545 bp，翻译成514个氨基酸，其中，AMH-N域237个氨基酸，TGFβ域93个氨基酸。同源性分析显示，AMH保守性偏低，奥利亚罗非鱼与其它鱼类的相似性为32%~60%，与哺乳类动物只有19%~21%，而TGF-β域的保守性相对较高，与其它鱼类的相似性为54%~72%。基因结构分析显示，奥利亚罗非鱼AMH存在6个内含子，和斑马鱼AMH结构相似，和人、鼠AMH有较大差别，它们缺少奥利亚罗非鱼和斑马鱼AMH基因共有的内含子Ⅰ和Ⅵ。然而，启动子转录因子分析结果表明，奥利亚罗非鱼AMH启动子中也存在SRY, SF-1, GATA-4, Sox5, Sox9等结合位点。使用Taqman探针分析奥利亚罗非鱼AMH在成鱼不同组织中的表达以及鱼苗、鱼种、成鱼性腺中的表达量，结果显示AMH在成鱼的卵巢、精巢中均有表达，而在脑、肝、肌肉以及心脏中不表达。AMH在鱼苗性腺中不表达，在鱼种、成鱼中雄鱼AMH表达量显著高于雌鱼，而鱼种雄鱼AMH表达量是成鱼雄鱼的10倍。; 唐永凯李建林俞菊华; 关键词：奥利亚罗非鱼快速扩增CDNA末端 TAQMAN探针

奥利亚罗非鱼EF-1α基因的克隆与结构分析被引量：2: 2008年; 真核生物延伸生长因子基因(EF-1α)在蛋白质翻译过程中起着重要的作用,其序列具有高度的保守性,是一种管家基因。本文通过RT-PCR克隆出奥利亚罗非鱼(Oreochromis aureus)EF-1α的部分cDNA序列,其长度为425bp,翻译成141个氨基酸,计算的蛋白质分子量为15.1ku。同源性分析显示,奥利亚罗非鱼EF-1α氨基酸序列与尼罗罗非鱼(O.niloticus)的相似性最高,为100%;与青(鱼将)(Oryzias latipes)、欧洲鲈(Dicentrarchus labrax)、斑马鱼(Danio rerio)、鲑鱼(Salmo trutta)的相似性分别为92%、91%、85%、82%;与小鼠(Mus musculus)、大鼠(Rattus norvegicus)、人(Homo sapiens)、鸡(Gallus gallus)的相似性均为85%。同时克隆出奥利亚罗非鱼EF-1α相应的DNA序列,共506bp。cDNA与DNA的序列比对显示克隆出的奥利亚罗非鱼EF-1α含有1个内含子,这为将来设计EF-1α荧光定量引物以及测定其在不同组织中的表达量变化打下基础。; 唐永凯李建林李红霞陈雪峰俞菊华; 关键词：奥利亚罗非鱼克隆

奥利亚罗非鱼卵巢芳香化酶基因的克隆、序列分析和结构预测被引量：1: 2008年; 采用RT—PCR和RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）法分离出奥利亚罗非鱼卵巢芳香化酶（P450aromA）的全序列，得到1784bp的全长cDNA，包括38bp5’非翻译区，1566bp阅读框以及含Poly（A）信号（AATAAA）的167bp3’非翻译区[不包括Poly（A）]。阅读框共编码521个氨基酸，计算的蛋白质分子量为59ku。同源性分析显示，奥利亚罗非鱼P450aromA的氨基酸序列与其它鱼性腺P450arom具有70％以上的同源性，与其它鱼脑P450arom为60％左右同源，但芳香化酶高保守区包括Ⅰ-螺旋区，芳香化酶特异保守区Ⅱ和血红素结合区Ⅲ和其它鱼芳香化酶的同源性分别高达83％-96％，78％～86％和85—100％。系统发育分析表明奥利亚罗非鱼P450aromA与鱼类性腺P450arom属于同一分支的。生物信息学分析显示：奥利亚罗非鱼P450A基因编码的蛋白无信号肽，无跨膜区域，为非分泌蛋白，同时含有多个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点，N-糖激化位点，N-肉豆蔻酰化位点，蛋白激酶C磷酸化位点。; 唐永凯李建林陈文华俞菊华; 关键词：奥利亚罗非鱼快速扩增CDNA末端

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中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2007JBFC03)

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