吉林省科技发展计划基金(20070210)
- 作品数：6 被引量：30H指数：4
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- 人溶菌酶基因hLYZ在小鼠乳腺中的表达及其抗菌活性检测
- 2010年
- 从人胎盘组织中克隆获得人溶菌酶基因hLYZ,选用体内表达载体pcDNA3.1,构建表达载体pcDNA3.1hLYZ,并转染至小鼠体内,采集小鼠乳汁和乳腺组织,通过RT-PCR方法检测基因的表达水平,用免疫组化反应、Western blotting检测蛋白的表达,并通过体外抗菌活性检测重组人溶菌酶的抗菌活性。经酶切鉴定和核苷酸序列测定,表明重组质粒pcDNA3.1-hLYZ构建正确,小鼠乳清的SDS-PAGE电泳显示在约14700处有特异的蛋白条带出现,Western blotting检测表明成功表达了人溶菌酶,根据回归方程计算酶活性为4011U/mL,体外抗菌活性检测结果显示重组人溶菌酶对大肠杆菌有明显裂解作用。本试验成功地在小鼠乳腺中表达了重组人溶菌酶,表达的蛋白具有较高的酶活性,这些结果为哺乳动物乳腺生物反应器的研究奠定了基础。
- 吕爽欧阳萍雷连成杨鹏赵瑞丽韩文瑜
- 关键词：人溶菌酶抗菌活性
- 人溶菌酶-抗菌肽tachyplesins融合蛋白的原核表达及其抗菌活性被引量：7
- 2010年
- 目的原核表达人溶菌酶(Human lysozyme,hLYZ)和抗菌肽tachyplesins融合蛋白,并检测其抗菌活性。方法人工合成抗菌肽tachyplesins基因和linker,与pMD18-T-hLYZ上切下的hLYZ基因融合,将融合基因克隆至带有GST标签的原核表达载体pGEX-4T-1上,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达条件进行优化。表达的融合蛋白经亲和层析纯化后,进行抗菌活性检测。结果重组表达质粒pGEX-4T-1-hLYZ-tachyplesins经PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确;表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约44000处可见目的蛋白条带,诱导温度在25℃,IPTG终浓度为0.8mmol/L,诱导时间为6h,融合蛋白表达效果较好,主要以可溶性形式存在;纯化的融合蛋白纯度可达90%以上,对金黄葡萄球菌和大肠杆菌具有一定的抑制作用。结论已成功在原核细胞中表达了人溶菌酶-抗菌肽tachyplesins融合蛋白,纯化的融合蛋白具有一定的抗菌活性。
- 欧阳萍高宇雷连成尹立子江丽娜吕爽冯新韩文瑜
- 关键词：溶菌酶抗菌肽重组融合蛋白质类抗菌活性
- NGF对牛体外受精和孤雌激活早期胚胎发育的影响被引量：7
- 2008年
- 在牛胚胎培养液中分别添加5、10、15、20μg/L神经生长因子(Nerve growth factor,NGF),观察其对牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响。结果显示:培养液中添加10μg/L NGF,可显著提高牛卵母细胞体外受精囊胚率(35.0%vs 50.0%,0.010.05)。结果表明,10μg/L NGF可促进牛体外受精和孤雌激活早期的胚胎发育。
- 易康乐周虚石德顺
- 关键词：NGF体外受精孤雌激活
- 鹿血双抗体夹心间接ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 通过制备兔抗鹿血和小鼠抗鹿血多克隆抗体,建立了以兔抗为包被抗体,鼠抗为检测抗体的鹿血双抗体夹心间接ELISA检测方法。采用方阵滴定法确定了抗原、抗体的最佳反应浓度,并对ELISA各反应条件进行优化。结果表明:兔抗最佳包被浓度为1∶8 000,鼠抗的最佳反应浓度为1∶2 000,最佳封闭时间为60 min。该方法对鹿血检测灵敏,可达3×10-4倍稀释度,且对马血、牛血、羊血、猪血的检测结果均为阴性,说明该方法特异性良好。
- 杨舒心朱明娴孙长江谢芳雷连成
- 关键词：鹿血ELISA多克隆抗体
- 脑源性神经营养因子在母牛性腺及性腺外生殖组织中的表达被引量：9
- 2010年
- 采用RT-PCR方法及免疫组织化学技术检测脑源性神经长生因子BDNF基因在母牛卵泡期和黄体期的卵巢、输卵管和子宫组织中的表达和定位情况。结果表明:BDNF mRNA表达于上述2个时期3种组织中,主要表达于卵巢的颗粒细胞和膜细胞、输卵管的黏膜上皮细胞、子宫内膜上皮细胞及子宫腺细胞,且各组织间免疫活性的表达强度明显不同。
- 孙永峰李纯锦马永和王春强张伟周虚
- 关键词：脑源性神经营养因子性腺
- 人溶菌酶基因的原核表达及其生物学活性被引量：7
- 2009年
- 目的在大肠杆菌中表达人溶菌酶(hLYZ)基因,并检测其生物学活性。方法将人溶菌酶基因克隆至带有GST融合标签的原核表达载体pGEX-4T-1上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达产物经亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定,并用溶壁微球菌比浊法检测酶活性,热激法检测其生物学活性。结果经PCR、双酶切鉴定和核苷酸序列测定,表明重组表达质粒pGEX-4T-hLYZ构建正确。SDS-PAGE显示,在相对分子质量约40000处可见目的蛋白条带,表达量占菌体总蛋白的46.5%,目的蛋白在裂解沉淀中占17.0%,在裂解上清中占58.3%,主要以可溶形式表达。纯化后,重组蛋白纯度可达95%以上,且具有良好的反应原性。重组hLYZ酶活性为2389U/mg,对金黄葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用。结论已成功地在大肠杆菌中表达了可溶性重组人溶菌酶,且具有较高的生物学活性。
- 欧阳萍雷连成吕爽韩文瑜赵瑞利姜秋杰
- 关键词：人溶菌酶原核表达生物学活性
