广东省自然科学基金(990422)
- 作品数：11 被引量：32H指数：4
- 相关作者：杨冬华汤绍辉崔俊黄卫毕向军更多>>
- 相关机构：暨南大学附属第一医院中国人民解放军第一军医大学中山医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗肝癌单链抗体基因库的制备被引量：4
- 2001年
- 目的构建抗肝癌噬菌体单链抗体(Single-chainvariblefragments,ScFv)库并加以鉴定。方法从经肝癌细胞免疫小鼠脾淋巴细胞中提取mRNA,RT-PCR扩增轻、重链可变区基因片段,连接成ScFv基因并扩增,克隆到pCANTAB5E,导入大肠杆菌TG1培养并计数。PCR检测ScFv基因插入情况并对ScFv进行基因序列分析和ELASA检测。结果抗体库库容为2.14×106;90%的噬菌体基因中有ScFv基因的插入;核酸序列分析显示抗体库基因结构正确;ELASA检测证实ScFv的表达。结论所建抗肝癌噬菌体ScFv库库容大,质量良好,对肝癌的基础研究和临床有潜在的应用价值。
- 杨冬华毕向军农玉新
- 关键词：原发性肝癌单链抗体噬菌体抗体库
- 人肝癌组织胰岛素样生长因子Ⅱ基因P4启动子甲基化变化及其意义被引量：2
- 2006年
- 汤绍辉杨冬华黄卫周鸿科卢筱华叶刚
- 关键词：启动子甲基化人肝癌组织P4MRNA表达量MRNA水平
- 肝癌中c-fms癌基因异常表达及意义被引量：2
- 2002年
- 杨冬华崔俊毕向军黄卫柳永刚钟健杨见权
- 关键词：肝癌
- 单链抗体在肿瘤治疗中的应用被引量：7
- 2002年
- 毕向军杨冬华陈旻湖
- 关键词：单链抗体肿瘤治疗学基因疗法
- 抗肝癌单链抗体的构建及其结合特性被引量：5
- 2001年
- 本文构建特异性抗肝癌 (HCC )噬菌体单链抗体 (ScFv )库并观察其靶向性。应用噬菌体表面呈现技术 ,从经HCC细胞免疫的小鼠脾淋巴细胞构建特异性抗HCC噬菌体ScFv库 ,应用HCC细胞和正常肝细胞筛选。制备游离ScFv,以正常肝细胞作为对照 ,应用ELISA、点杂交和免疫组织化学方法以及流式细胞仪 (FCM )检测ScFv与HCC细胞的特异性结合能力。结果显示抗体库库容为 2 14× 10 6 ;核酸序列分析显示ScFv基因结构正确 ;游离ScFv相对分子质量为 3 2 0 0 0 ;ScFv抗HCC效价为 1∶16;点杂交和免疫组织化学技术检测显示HCC细胞被染成棕黄色 ,阴性对照、空白对照未着色 ;FCM检测发现ScFv具有与HCC细胞特异性结合的能力。特异性抗HCC噬菌体ScFv具有与HCC结合的靶向特异性。
- 毕向军杨冬华崔俊李鹏宁晓燕范子荣覃汉荣
- 关键词：肝癌单链抗体靶向性HCC免疫组织化学法
- 肝癌c-fms癌基因甲基化水平与临床病理关系被引量：3
- 2001年
- 目的观察肝癌发生过程中 ｃ－ｆｍｓ癌基因甲基化水平的变化，以阐明 Ｃ—ｆｍｓ／ＣＳＦ一１Ｒ 集落刺激因子－１受体）在肝癌组织中的异常高表达机制。方法采用限制性内切酶 Ｈｐａ Ⅱ／Ｍｓｐ Ⅰ酶切 ３０例肝癌及配对的癌旁肝组织基因组ＤＮＡ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法检测其甲基化状态。比较肝癌及癌旁肝组织中ｃ－ｆｍｓ癌基因甲基化水平，判断其与临床病理学的关系。结果３６．７％（１１／３０）肝癌组织及１３．３％（４／３０）癌旁肝组织中ｃ－ｆｍｓ癌基因甲基化水平降低。ｃ－ｆｍｓ癌基因在肝癌组织中的低甲基化发生率高于癌旁肝组织。Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎ分级与肝癌组织中ｃ－ｆｍｓ癌基因低甲基化发生率有显著性意义，Ⅲ～Ⅳ级发生率明显高于Ⅰ～Ⅱ级。结论ｃ－ｆｍｓ癌基因低甲基化改变导致ＣＳＦ－１Ｒ异常高表达，可能是促使肝癌发生和发展的重要分子生物学机制。
- 崔俊杨冬华
- 关键词：肝细胞癌癌基因C-FMS甲基化
- 携带AFP增强子反义c-fms真核表达载体的构建及其临床意义被引量：2
- 2001年
- 目的 构建人肝癌细胞中高效特异表达的反义c-fms真核表达载体，观察其对肝癌细胞生物学行为的影响。 方法 采用PCR法扩增人c-fms癌基因第571位酪氨酸为中心的DNA片段，将其反向克隆入pcDNA3载体（命名pAS）；将扩增的人甲胎蛋白（AFP）增强子核心区克隆入pAS（命名pAEAS）。磷酸钙法将空载体pcDNA3及反义真核表达载体pAS、pAEAS分别转导入HepG2肝癌细胞及HeLa宫颈癌细胞，观察细胞生长速度及凋亡。 结果 人反义c-fms基因片段及AFP增强子核心区片段，测序结果与Genbank中登录的序列一致。导入反义基因的HepG2肝癌细胞生长速度较对照细胞明显减慢(P＜0.05)，pAEAS抑制作用较pAS强(P＜0.05），pcDNA3组、pAS组、pAEAS组HepG2肝癌细胞凋亡率分别为5.25%、14.7%、31.2%（P＜0.01），pAEAS组细胞DNA出现梯状凋亡带。在HeLa宫颈癌细胞中，pAS及pAEAS组生长速度减慢，但二者差异无显著性（P＞0.05），pcDNA3组、pAS组、pAEAS组细胞凋亡率分别为3.99%、8.27%、8.86%（P＜0.05），DNA均未出现梯状凋亡带。 结论 携带AFP增强子的人反义c-fms真核表达载体对AFP阳性肝癌细胞生长有选择性抑制作用，可诱导凋亡，是一种新的肝癌基因治疗方法。
- 崔俊杨冬华
- 关键词：癌基因C-FMS基因治疗真核表达载体
- 人肝癌胰岛素样生长因子Ⅱ基因P2,P4启动子克隆及序列分析被引量：2
- 2005年
- 目的克隆人胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因P2,P4启动子并进行序列分析,以明确肝癌组织中IGF-Ⅱ启动子碱基序列有无改变及其与转录调控的关系,为后续研究奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的IGF-Ⅱ基因全序列及有关文献,应用巢式PCR扩增L-02人胎肝细胞系(正常对照)及8例肝癌组织的IGF-ⅡP2,P4启动子,并采用TOPO TA Cloning kit将PCR产物克隆入pCR2.1-TOPO T载体。目的DNA片段和阳性重组子分别通过琼脂糖凝胶电泳及直接测序鉴定。结果①L-02细胞及8例肝癌组织P2,P4启动子均扩增成功,长度分别为684 bp及1 246 bp;②8例肝癌组织P2,P4启动子碱基序列与L-02相应的DNA序列完全相同,未见突变、缺失等改变,经与GenBank数据库比较,结果完全一致。结论①成功克隆了IGF-ⅡP2,P4启动子;②本组肝癌组织中IGF-ⅡP2,P4启动子序列稳定,未见突变、缺失等改变,可能与IGF-Ⅱ异常表达的转录调控机制无关。
- 汤绍辉杨冬华黄卫舒建昌
- 关键词：肝细胞癌启动子
- 特异性抗肝癌噬菌体单链抗体的应用研究被引量：5
- 2001年
- 目的 体外观察特异性抗肝癌 (HCC)噬菌体单链抗体 (ScFv)对HCC细胞生长和凋亡的影响。方法 通过构建的特异性抗HCC噬菌体ScFv库在大肠杆菌HB2 15 1中表达 ,制备游离ScFv ,应用细胞培养、DNA凝胶电泳和流式细胞仪 (FCM)技术检测抗体对HCC细胞生长和凋亡的影响。结果 特异性抗HCC噬菌体ScFv处理的HCC细胞的生长速度明显减慢 ,克隆形成和附壁能力减弱 ,细胞存活率降低 ,DNA凝胶电泳可见典型凋亡梯状带 ;FCM检测发现抗体处理后HCC细胞凋亡率达 32 6 % ,明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论 应用噬菌体表面呈现技术和基因克隆技术构建的特异性抗HCC噬菌体ScFv具有抑制HCC细胞生长、促进HCC细胞凋亡的功能。
- 毕向军杨冬华李鹏崔俊覃汉荣范子荣周最明
- 关键词：肝肿瘤肝癌单链抗体噬菌体
- 人肝癌组织胰岛素样生长因子Ⅱ基因P3,P4启动子表达及其与p53基因突变的关系被引量：2
- 2007年
- 目的探讨人肝癌组织胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因P3,P4启动子表达及其与p53基因突变的关系。方法应用半定量RT-PCR、PCR、直接测序分别检测7例正常成人肝组织、23例乙型肝炎病毒阳性肝癌组织IGF-Ⅱ基因P3,P4启动子特异的转录子表达及p53基因突变状况。结果①绝大多数肝癌组织P3和P4mRNA表达量显著上调,平均值均明显高于正常成人肝组织(P<0.01);②肝癌组织p53基因的突变率为30.4%(7/23)。③23例肝癌组织中,具有p53基因突变的标本P3,P4mRNA表达水平分别明显高于无p53基因突变的肝癌组织(P<0.05)。结论①IGF-Ⅱ基因P3和P4再激活是大多数乙型肝炎病毒阳性肝癌的重要特征;②肝癌组织P3,P4mRNA显著上调与p53基因突变密切相关,后者可能是P3,P4再激活的转录调控机制之一。
- 陈潮文刘序友杨冬华汤绍辉
- 关键词：P53基因转录子
