杭州市技术创新项目(20070232H07)
- 作品数：3 被引量：25H指数：3
- 相关作者：向太和徐纪明王琳更多>>
- 相关机构：杭州师范大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金杭州市技术创新项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 含gfp植物转基因表达载体的构建及在矮牵牛转基因不定根中的高效表达被引量：10
- 2008年
- 利用pBIN19、pGFP和pCHS质粒,成功构建了CaMV35S启动子驱动的gfp基因的植物转基因表达载体pBIN-35S-GFP,并导入野生型发根农杆菌K599。矮牵牛的转化实验表明,矮牵牛离体叶片被发根农杆菌K599(带pBIN-35S-GFP质粒)感染生根率达45%。对诱导的不定根基因组DNA的PCR检测表明,不定根基因组中含有发根农杆菌K599Ri质粒中的rolB基因和外源gfp基因;转基因不定根在蓝色光激发下能发出强烈的绿色荧光,表明构建的转基因载体pBIN-35S-GFP能实现gfp基因的高效表达。该载体在CaMV35S启动子的两端各有一个多克隆位点,可以方便地进行启动子替换,用于研究不同启动子的功能。此外,该载体在gfp基因的5′端含有多克隆位点,在3′端含有EcoRⅠ和BsmⅠ两个单一酶切位点,可以方便地在5′端连接上目标基因,表达含GFP的融合蛋白,进行目标基因编码蛋白的亚细胞定位;也可以方便地切除gfp基因,连上需要的目的基因进行转化。
- 徐纪明向太和
- 关键词：绿色荧光蛋白基因转基因不定根
- 全雌性黄瓜中3个肌动蛋白基因片段的克隆和表达分析被引量：11
- 2008年
- 通过1次PCR扩增从全雌性黄瓜中同时获得了长度分别为1186bp、955bp和870bp的3个肌动蛋白基因片段Act1、Act2和Act3(GenBank登记号:DQ115881、DQ115882和DQ115883)。序列分析表明,3个肌动蛋白基因片段与GenBank中收录的肌动蛋白基因序列高度同源,与GenBank中收录的全长肌动蛋白基因(如AF386514.1、AF059484.1和AB010922.1等)的第2、第3个外显子和第2个内含子相对应。Act1中1￣580bp、984￣1186bp,Act2中1￣580bp、753￣955bp,Act3中1￣580bp、668￣870bp为外显子编码区,其余为内含子序列,3个基因内含子的两端序列均符合典型的"GT-AG"规则。RT-PCR分析表明,Act1仅在根中表达,Act2在根和雌花中表达,而Act3在所有检测的器官(包括根、茎、叶、卷须、雌花和幼果)中都表达,提示黄瓜根的生长发育需要多种肌动蛋白基因的参与,而Act2和Act3可能与黄瓜雌性系的形成发育有关。
- 徐纪明向太和
- 关键词：黄瓜肌动蛋白基因克隆
- 矮牵牛F3′,5′H全长cDNA的克隆及花特异启动子介导表达载体的构建被引量：5
- 2009年
- 通过RT-PCR从蓝色矮牵牛(Petunia hybrida)花瓣中克隆类黄酮-3',5'-羟基化酶基因(F3',5'H)全长cDNA(GenBank登记号EF371021)。生物信息学分析表明克隆的F3',5'H基因与GenBank登记号D14588、Z22545和DQ352142等的F3',5'H基因序列高度一致;其编码的氨基酸序列与GenBank登记号BAA03438.1(矮牵牛)、BAC10997.1(银杯草)和AAV85470.1(马铃薯)的高度同源,同源率分别为99%、88%和87%。利用pBIN19、pBluescript SK(+)和pMD18-PchsA质粒成功构建了花特异性启动子PchsA驱动的F3',5'H基因的表达载体pBIN19-PchsA-F3'5'H,并导入到野生型发根农杆菌K599中。利用K599诱导菊花生根,不定根的诱导率可达30.7%。这为利用转基因技术创造蓝色花卉提供了重要的基础。
- 王琳向太和
- 关键词：矮牵牛克隆
