国家自然科学基金(81072429)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 相关作者：李波清杜东龙孙万菊张珍孙辉更多>>
- 相关机构：滨州医学院滨州医学院附属医院华中科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”烟台市科学技术发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 幽门螺杆菌临床分离株热休克蛋白60基因序列分析被引量：3
- 2014年
- 目的分析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床分离株热休克蛋白60基因编码区序列特征。方法对分离自我国不同地区、患有不同胃肠疾病患者的63株Hp提取基因组DNA并设计hsp60特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增hsp60基因,经1%琼脂糖凝胶电泳后切胶回收、纯化PCR产物并测序,用DNAstar 5.0软件中的Clustal W程序对hsp60基因序列及由该序列翻译的氨基酸序列进行比较分析。结果成功特异性扩增并纯化到hsp60全基因序列。经序列比对,发现不同胃肠疾病来源的hsp60基因核苷酸序列在877、1 399以及1 579位点处存在单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)。其中来源于非胃癌患者的Hp在以上三位点处分别有8株(8/48,16.67%)G→A置换,9株(9/48,18.75%)C→G置换,7株(7/48,14.58%)A→G置换;胃癌患者来源的Hp在以上三位点处分别有3株(3/18,16.67%)G→A置换,1株(1/18,5.55%)C→G置换,2株(2/18,11.11%)A→G置换。将核苷酸序列翻译为氨基酸序列后,在以上三位点所对应的氨基酸序列,即293、467以及527位点处分别发生了由缬氨酸(V)到异亮氨基酸(I)、谷氨酰胺(Q)到谷氨酸(E)以及苏氨酸(T)到丙氨酸(A)的改变。结论我国Hp临床分离株热休克蛋白60基因序列存在单核苷酸多态性位点。
- 孙万菊杜东龙孙辉周秀芝张珍李波清
- 关键词：幽门螺杆菌单核苷酸多态性
- 幽门螺杆菌GroEL基因真核表达载体构建及鉴定
- 2012年
- 目的构建幽门螺杆菌热休克蛋白GroEL基因的真核表达载体pcDNA3.0-GroEL,为幽门螺杆菌的基因疫苗研制提供参考依据。方法提取幽门螺杆菌基因组DNA,PCR扩增GroEL基因,克隆至pMD19-T载体,通过PCR、酶切及测序鉴定后,将GroEL基因片段用限制性内切酶切下,克隆至真核表达载体pcDNA3.0,构建pcDNA3.0-GroEL重组质粒;采用PCR、酶切对重组质粒pcDNA3.0-GroEL进行鉴定。结果扩增出幽门螺杆菌GroEL基因片段约1 640 bp;pcDNA3.0-GroEL重组质粒经XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切,产生1个与GroEL基因PCR产物大小一致的小片段和1个不同于pcDNA3.0-GroEL重组质粒的大片段,表明GroEL基因已成功插入pcDNA3.0质粒中。结论成功构建幽门螺杆菌GroEL基因真核表达载体pcDNA3.0-GroEL。
- 李波清张玉梅李娜吴玉龙耿丽
- 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白60GROEL基因疫苗
- 威海地区幽门螺杆菌cagA基因3′端多态性分析被引量：2
- 2014年
- 目的研究威海地区幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床分离株cagA基因的3′端多态性。方法采用PCR法扩增Hp临床分离株的cagA基因3′端并测序,用DNAStar 5.0软件对其进行编码氨基酸序列的比对分析。结果 63株Hp临床分离株均cagA阳性(cagA+),其中93.7%(59/63)为东亚型(EPIYYA-ABD),6.3%(4/63)为西方型(EPIYYA-ABC)。3.4%(2/59)的东亚型菌株EPIYA-B突变为ESIYA-B,4株西方型型均突变为EPIYT-B。胃癌患者分离株中88.9%(16/18)为东亚型,11.1%(2/18)为西方型;非胃癌分离株中95.6%(43/45)为东亚型,4.4%(2/45)为西方型。2株分离自胃癌患者的西方型Hp EPIYA-A后的第一个氨基酸残基由赖氨酸(K)突变为谷氨酸(E)。结论威海地区Hp cagA基因以东亚型为主,但东、西方亚型Hp的致病性无显著差别,两型都存在cagA基因3′端编码氨基酸序列的改变。
- 杜东龙孙万菊孙辉刘岩红李波清
- 关键词：幽门螺杆菌CAGA多态性
- 幽门螺杆菌热休克蛋白60基因的定点突变及其原核表达被引量：5
- 2013年
- 目的定点突变幽门螺杆菌标准菌株ATCC26695 hsp60基因的1398、1399位点,并获得基因突变后hsp60基因的原核表达蛋白。方法采用Primer Premier5.0软件设计hsp60基因的2对引物,引入2个突变位点,通过重叠延伸PCR法进行3次扩增,获得突变型hsp60基因,克隆至原核表达载体pEASY-E1,重组质粒转化至E. coli BL21(DE3),对其进行测序验证,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE电泳检测表达产物。结果将幽门螺杆菌hsp60基因1398、1399位点AG突变为GC,构建了突变型hsp60基因的表达载体,转化大肠埃希菌后高效表达可溶性hsp60蛋白。结论构建了突变型hsp60基因表达载体,并能表达可溶性目的蛋白,为对其功能研究奠定了基础。
- 孙万菊杜东龙蒋宏张珍杜镇镇李波清
- 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白60定点突变原核表达
- 抗Trx单克隆抗体用于血吸虫病诊断的研究
- 2014年
- 目的:建立双抗体夹心ELISA法检测日本血吸虫硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)。方法:用重组日本血吸虫Trx(rTrx)蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选高滴度、高特异性的单克隆抗体建立双抗体夹心ELISA法。通过检测日本血吸虫排泄-分泌物(excretorysecretions,ES)与rTrx的浓度评价该方法的敏感性;通过对健康人血清的检测确定其特异性;通过对布氏姜片吸虫病、华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、囊虫病患者血清进行交叉反应试验,评价该方法的特异性。结果:获得2株稳定分泌抗rTrx蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为McTrx1和McTrx2。以McTrx1为包被抗体,HRP-McTrx2为酶标抗体,建立的双抗体夹心ELISA可检测出ES的最低浓度为4.8μg/ml,检测出rTrx的最低浓度为1.2μg/ml。该方法的特异性为96%。结论:以抗rTrx蛋白单克隆抗体McTrx1与McTrx2为基础建立的双抗体夹心ELISA法具有较高的特异性。
- 吴玉龙程梅刘春会耿丽张珍杜镇镇李波清李雍龙
- 关键词：日本血吸虫单克隆抗体硫氧还蛋白
